李軼倞，張 娜，田 楓

(北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實驗動物科學(xué)部，北京 100191)

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技術(shù)方法

一種簡易小鼠尾靜脈注射固定法
——籠蓋壓制法

李軼倞，張 娜，田 楓

(北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實驗動物科學(xué)部，北京 100191)

目的 介紹一種簡便易行的小鼠尾靜脈注射固定方法。方法 20只BALB/C雄性荷瘤裸鼠，由實驗員A和實驗員B用籠蓋壓制法固定小鼠進(jìn)行尾靜脈注射,觀察注射完成時間和成功率。結(jié)果 兩位實驗員100%均可完成尾靜脈注射。結(jié)論 籠蓋壓制法為小鼠進(jìn)行尾靜脈注射提供了一種簡易方法，特別對于特殊形態(tài)的小鼠進(jìn)行尾靜脈注射更加有效。

小鼠；尾靜脈注射；固定；籠蓋壓制法

大、小鼠尾靜脈注射是一種常用的動物技術(shù)，注射工作順利完成與否和固定方法的選擇密切相關(guān)。而且如果要在短時間內(nèi)對大量動物同時給藥，特別是對尾靜脈注射而言，方便、恰當(dāng)?shù)膭游锕潭ǚ椒ㄊ欠浅Ｖ匾腫1]。一般情況下，大多實驗者選擇使用商品化的固定器固定小鼠，見圖1，是將固定器打開，左手拎鼠尾至于固定器中，關(guān)閉固定器。在實際工作摸索出一種簡便易行的小鼠尾靜脈注射固定方法，即籠蓋壓制法，亦有相關(guān)文獻(xiàn)對此方法進(jìn)行過報道[2]?；\蓋壓制法是用右手打開籠蓋，左手持鼠尾，將動物放在鼠盒中只留鼠尾，關(guān)閉籠蓋，右手涂抹酒精對鼠尾注射部位消毒，并進(jìn)行靜脈注射，見圖2。本文以荷瘤裸鼠實驗為例，介紹籠蓋壓制法在小鼠尾靜脈注射中的應(yīng)用。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物：SPF級BALB/C裸鼠，20只，雄性，16 g～20 g，購自北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實驗動物科學(xué)部，實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK(京)2011-0012。飼養(yǎng)于北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實驗動物科學(xué)部屏障環(huán)境中，使用許可證號：SYXK(京)2011-0039。飼喂全價SPF 級大、小鼠繁殖飼料，由北京科澳協(xié)力飼料有限公司生產(chǎn)。20只裸鼠腋下接種肺癌細(xì)胞，待腫瘤長到約80 cm3時開始進(jìn)行尾靜脈注射，

1.1.2 試劑:0.9%氯化鈉注射液，石家莊四藥有限公司，批號為141231425。BD 1 mL一次性使用無菌注射器帶注射針，碧迪醫(yī)療器械(上海)有限公司經(jīng)銷，批號為4345295。

1.2 方法

實驗分為2組，每組10只小鼠，分別由技術(shù)熟練的實驗員A和實驗員B按標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程應(yīng)用籠蓋壓制法對小鼠進(jìn)行尾靜脈注射，每次每只小鼠注射100 μL 0.9%氯化鈉注射液，注射完成注意用干棉球壓迫止血。每次注射記錄完成尾靜脈注射的時間，并觀察注射成功率。完成時間數(shù)據(jù)以時間的均值及標(biāo)準(zhǔn)差表示。實驗操作過程中按實驗動物使用的3R原則給予人道的關(guān)懷。

2 結(jié)果

實驗員A和實驗員B 使用籠蓋壓制法均能100%完成尾靜脈注射，完成時間見表1。

組別Groups注射所用時間Timeofinjection成功率(%)Successrate實驗員ATechnicianA300.7±8.1100實驗員BTechnicianB295.3±7.2100

3 討論

動物實驗中最基本的實驗技術(shù)，如抓取與固定方法、給藥方法等，雖然已經(jīng)有較完整的實驗方法，但在實際工作中操作者往往會摸索出更有效的實驗技巧[3-5]。

大、小鼠尾靜脈注射法由于其在體內(nèi)吸收快，劑量明確等優(yōu)點，往往被實驗者所選用。尾靜脈注射操作過程中，選對良好的固定方法，是保證實驗順利完成的重要基礎(chǔ)。有關(guān)動物實驗的相關(guān)教材中通常將固定器固定法作為常用的方法介紹給讀者[1]，但是小鼠傳統(tǒng)固定器多采用金屬或有機(jī)玻璃等制成，自已加工制做不易，購買成本較高，部分文獻(xiàn)報道的新型小鼠固定裝置則制作較為復(fù)雜，且不易清洗[6]。而且我們在以往的工作中發(fā)現(xiàn)傳統(tǒng)固定器固定方法存在一些弊端，如由于每次注射，要開關(guān)固定器就相對耽誤時間。而且固定器相對單一的尺寸設(shè)計對于不同品系、不同模型的小鼠適應(yīng)性也較差。在操作過程中，固定過松，小鼠容易調(diào)轉(zhuǎn)身體起不到固定作用，而固定過緊又容易造成小鼠窒息死亡。另外，有的固定器為不銹鋼材質(zhì)，不利于觀察小鼠注射藥物后的狀態(tài)。

由于工作中經(jīng)常需要對大量小鼠進(jìn)行尾靜脈注射，簡便快捷的固定方法是非常重要的。亦有其他文獻(xiàn)報道一些改進(jìn)的或自制的尾靜脈注射裝置供大家參考[7-8]。為此，我們探索使用籠蓋壓制法固定小鼠，由于不需要開關(guān)固定器，達(dá)到了省時省力的目的，能夠在短時間內(nèi)對大批實驗小鼠進(jìn)行安全，快速的尾靜脈注射。同時對于個別體重過大DB/DB小鼠或荷瘤鼠等特殊形態(tài)的小鼠亦可以起到良好的固定效果，并便于觀察被試動物對于藥物的應(yīng)激反應(yīng)。本文的實驗結(jié)果僅我們每年數(shù)萬次小鼠尾靜脈操作中的一個實例。

由于實驗選擇的有特殊代表性的荷瘤小鼠，結(jié)果顯示籠蓋壓制法的確對于體積較大或荷瘤小鼠的固定更顯示其獨有的優(yōu)點，與固定器法相比，不再受固定器尺寸的影響。但是籠蓋壓制法對于需多次重復(fù)尾靜脈注射實驗不太適宜。由于多次尾靜脈注射時，此種固定方法尾靜脈不易看清，影響注射效果。另外需要指出的是籠蓋壓制法的使用也可能與實驗人員的習(xí)慣性有關(guān)，若比較習(xí)慣使用這種方法，則會比較便捷；若不習(xí)慣使用籠蓋壓制法則可能在完成尾靜脈注射的時間上比傳統(tǒng)固定器法要慢。由于我們實驗技術(shù)人員均能較適應(yīng)這種固定方法，因此在用時上較短。如果新的操作人員可能需要一定的時間磨合才可在較短的時間完成靜脈注射。

這里將最常使用的固定器固定法與本實驗應(yīng)用的籠蓋壓制法從安全性、觀察性、適用范圍、消毒性、交叉污染、費用、快捷性、多次注射的重復(fù)性八個方面進(jìn)行了比較，見表2，供實驗人員試具體實驗條件選擇應(yīng)用。

圖1 固定器固定法Fig.1 Traditional fixing device

圖2 籠蓋壓制法Fig.2 Cage lid pressing method

固定方法Fixingmethods安全性Safty對小鼠Formice對操作者Foroperator觀察性O(shè)bservability適用范圍Applicability消毒性Disinfection交叉污染Crosscontamination費用Expenses快捷性Rapidity多次注射重復(fù)性Repeatability固定器固定法TraditionalFixingdevice固定過緊易窒息Tootightfixingmaycausesuffocation安全Safe固定過緊,不利于觀察應(yīng)激反應(yīng)Inconvenientobservation適用范圍相對較小Relativelysmallapplica-bility易于消毒Easytodis-infect不會交叉污染Nocrosscon-tamination較貴Moreex-pensive相對費時Rela-tivetime-consuming最佳Best籠蓋壓制固定法Cagelidpressing安全Safe安全Safe利于觀察反應(yīng)convenientob-servation適用范圍較為寬泛Relativelywideapplica-bility易于消毒Easytodis-infect不會交叉污染Nocrosscon-tamination無額外費用Nomoreex-pense簡便Simple不好Notgood

4 結(jié)論

綜上所述，籠蓋壓制法用于小鼠的尾靜脈注射的固定是切實可行的，特別是對特殊形態(tài)的小鼠進(jìn)行尾靜脈注射時可起到較好的固定效果。

[1] 鄭振輝，周淑佩，彭雙清. 實用醫(yī)學(xué)實驗動物學(xué) [M]. 北京：北京大學(xué)醫(yī)學(xué)出版社，2008: 289.

[2] 王玖恒，張 園，譚樂誠，等. 一種小鼠尾靜脈注射的新方法 [J]. 廣西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2012，15(2): 155-156.

[3] 姜驪, 陳輝, 何勇. 一種新的大鼠灌胃方法——側(cè)抓灌胃法 [J]. 實驗動物科學(xué), 2011, 28(6): 62-63

[4] 陳霆，李楓棣，鄧巍，等. 小鼠內(nèi)眥靜脈叢注射與尾靜脈注射比較 [J]. 中國比較醫(yī)學(xué)雜志, 2014, 24(1): 72-73.

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[7] 施文, 孫永強. 小鼠尾靜脈注射和采血簡易固定裝置的制作和使用方法 [J]. 免疫學(xué)雜志，2011，27( 9): 807-808.

[8] 蘇麗娜，郭劍偉，饒光玲. 小鼠尾靜脈注射與斷頭取血實驗技術(shù)的改進(jìn) [J]. 大理學(xué)院學(xué)報，2010，9(6): 25-27.

A simple fixing method for tail vein injection in mice—cage lid pressing method

LI Yi-jing, ZHANG Na, TIAN Feng

(Department of Laboratory Animal Science, Peking University Health Center，Beijing 100191, China)

Objective To introduce a simple fixing method for tail vein injection in mice. Methods Twenty tumor-bearing male BALB/c nude mice were used in this study. Tail vein injection was performed to these mice by two laboratory technicians A and B, respectively. The injection time and success rate were recorded and analyzed. Results Mouse tail vein injection was successfully completed by the two technicians with the cage lid pressing method. Conclusions Cage lid pressing method is a simple method for tail vein injection in mice, especially provides a more efficient method for those special form of mice.

Mice; Tail vein injection; Fixing method; Cage lid pressing method

北京高等學(xué)校青年英才計劃項目(編號：YETP0057)。

李軼倞(1984-)，女，技師，專業(yè)：動物實驗及管理。E-mail: 434362038@qq. com。

田楓 (1973-)， 女，博士，副主任技師，研究方向：實驗動物研究與管理方面研究。E-mail: fengtian_38@163. com。

R-33

A

1671-7856(2016)10-0079-03

10.3969.j.issn.1671-7856. 2016.10.015

2016-08-15