安 哲，張 妮，李思鵬，李妙羨，王香玲

（西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院檢驗科，陜西 西安 710004）

高速離心對傳染病四項復(fù)檢結(jié)果的影響

安 哲，張 妮，李思鵬，李妙羨，王香玲

（西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院檢驗科，陜西 西安 710004）

目的 觀察高速離心對HBsAg、HIV-Ag／Ab、抗-HCV、TP-Ab復(fù)檢結(jié)果的影響。方法 收集HBsAg、HIV-Ag／Ab、抗-HCV、TP-Ab四項初檢低值陽性樣本，分別采用低速離心和高速離心分離血清，然后進行復(fù)檢并對復(fù)檢結(jié)果進行比較。結(jié)果 經(jīng)低速離心和高速離心后復(fù)檢，HBsAg的復(fù)檢陽性率分別是 58.62%和 27.59%，存在顯著性差異（χ2＝5.069，P＝0.017），HIVAg／Ab的復(fù)檢陽性率分別是34.78%和8.70%，存在顯著性差異（χ2＝4.600，P＝0.032），抗-HCV的復(fù)檢陽性率分別是79.17%和75.00%，不存在顯著性差異（χ2＝0.118，P＝0.731），TP-Ab的復(fù)檢陽性率分別是96.00%和92.00%，不存在顯著性差異（χ2＝0.355，P＝0.552）；低速離心后復(fù)檢陽性樣本 68例經(jīng)高速離心后的復(fù)檢陽性率為 69.12%（47／68），低速離心后復(fù)檢陰性樣本33例經(jīng)高速離心后的復(fù)檢陰性率為87.88%（29／33）；低速離心后夾心法檢測項目和間接法檢測項目的復(fù)檢陽性率分別為48.08%和87.26%，存在顯著性差異（χ2＝18.055，P＜0.001），高速離心后夾心法檢測項目和間接法檢測項目的復(fù)檢陽性率分別為19.23%和83.67%，存在顯著性差異（χ2＝41.911，P＜0.001），提高離心速度后夾心法檢測項目和間接法檢測項目的復(fù)檢陽性率分別下降了28.85%和3.59%，存在顯著性差異（χ2＝8.246，P＝0.004）。結(jié)論 提高離心速度可以明顯降低HBsAg和HIV-Ag／Ab的復(fù)檢陽性率；HBsAg、HIV-Ag／Ab、抗-HCV、TP-Ab低值陽性時經(jīng)低速離心后復(fù)檢存在假陽性和假陰性，免疫學(xué)方法不同的項目其復(fù)檢陽性率存在明顯差異，提高離心速度對夾心法檢測項目的復(fù)檢結(jié)果有明顯影響。

乙肝病毒表面抗原； 人類免疫缺陷病毒抗原／抗體； 丙肝病毒抗體； 梅毒螺旋體抗體； 低速離心； 高速離心

乙肝病毒表面抗原（HBsAg）、丙肝病毒抗體（抗-HCV）、人類免疫缺陷病毒抗原／抗體（HIV-Ag／Ab）、梅毒螺旋體特異性抗體（TP-Ab）四項血清標(biāo)志物，也稱傳染病四項，通常聯(lián)合檢測用以篩查乙肝病毒（hepatitis B virus，HBV）、丙肝病毒（hepatitis C virus，HCV）、人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）、梅毒螺旋體（Treponema Pallidum，TP）四種傳染性病原體感染?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)（chemiluminecence microparticle immunoassay，CMIA）具有高靈敏度、高特異度，且檢測時間短、可實現(xiàn)自動化檢測，目前在國內(nèi)已逐步推廣，尤其是用于傳染病四項的快速檢測。傳染病四項初檢陽性樣本必須經(jīng)過進一步確證檢測方能證實為感染，初檢陽性結(jié)果給患者帶來精神壓力和時間、經(jīng)濟損失，較高的初檢陽性率也增加實驗室檢測成本。在確保檢測結(jié)果準確的情況下降低傳染病四項的初檢陽性率是化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)在臨床應(yīng)用過程中備受關(guān)注的問題。本次研究旨在探索在化學(xué)發(fā)光免疫分析過程中，提高離心速度對傳染病四項復(fù)檢陽性率的影響。

材料和方法

1 一般資料

收集我院 2014年9月至11月期間，HBsAg、HIV-Ag／Ab、抗HCV、TP-Ab四項經(jīng) CMIA法初檢呈低值陽性樣本。初檢樣本的分離使用普通離心機，3500r／min，離心 10min。獲得HBsAg低值 0.05～0.20mIU／L樣本29例，HIV-Ag／Ab低值1～2S／CO樣本23例，抗 HCV低值1～2S／CO樣本24例，TPAb低值1～2S／CO樣本25例。

2 試劑與儀器

HBsAg、HIV-Ag／Ab、抗HCV、TP-Ab檢測試劑購自 ARCHITECT Laboratory，儀器采用美國雅培公司 ARCHITECT i 2000自動免疫分析儀；離心機采用上海安亭科學(xué)儀器廠生產(chǎn)的低速大容量多管離心機（LXJ-ⅡB型）和高速冷凍臺式離心機（TGL-16G型）。

3 方法

HBsAg、HIV-Ag／Ab、抗HCV、TP-Ab檢測均采用化學(xué)發(fā)光微粒子免疫測定技術(shù)（CMIA）；其中HBsAg和 HIV-Ag／Ab檢測原理為夾心法，抗-HCV和 TP-Ab檢測原理為間接法。初檢低值陽性樣本分別經(jīng)低速離心和高速離心后復(fù)檢，采用雙管復(fù)檢。復(fù)檢結(jié)果以雙管陽性判定為陽性，單管陽性判定為陽性，雙管陰性判定為陰性。

4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用 SPSS16.0軟件包進行統(tǒng)計學(xué)處理。不同復(fù)檢陽性率的比較采用χ2檢驗，以 P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

1 不同離心速度分離后 HBsAb、HIV-Ag／Ab、抗HCV、TP-Ab的復(fù)檢結(jié)果

所有樣本分為 4份，2份經(jīng) 3500 r／min離心10min后進行雙管復(fù)檢，另外 2份經(jīng) 12000r／min離心10min后復(fù)檢。低速離心后復(fù)檢陽性的 68例樣本經(jīng)高速離心后的復(fù)檢陽性率為69.12%（47／68），低速離心后復(fù)檢陰性的 33例樣本經(jīng)高速離心后的復(fù)檢陰性率為 87.88%（29／33）；其他檢測結(jié)果見表1。

表1 傳染病四項初檢低值陽性的復(fù)檢結(jié)果

2 不同方法學(xué)項目復(fù)檢陽性率的比較

以免疫學(xué)原理不同分為兩組：夾心法組和間接法組，比較兩組復(fù)檢陽性率和提高離心速度對復(fù)檢陽性率的影響，結(jié)果見表2。

表2 夾心法組和間接法組的復(fù)檢陽性率比較

討 論

據(jù)世界衛(wèi)生組織最新統(tǒng)計顯示，全球約有慢性HBV感染者2.4億，每年約有 65萬人死于 HBV感染相關(guān)疾?。?］；而截至2010年全球存活有 3330萬HIV感染者［2］；全球約有 1.85億慢性 HCV感染者，每年約有35萬人死于 HCV感染相關(guān)疾?。?］；全球每年約有1200萬梅毒新發(fā)病例。這四種傳染性疾病均可經(jīng)血液傳播，對輸血安全及人體健康構(gòu)成了極大威脅。傳染病四項的血清學(xué)檢測通常是針對乙型肝炎病毒、人類免疫缺陷病毒、丙型肝炎病毒、梅毒螺旋體四種感染性病原體的血清標(biāo)志物檢測，包括HBsAg、HIV-Ab、抗HCV、TP-Ab。目前已屬于臨床實驗室的常規(guī)檢測項目。

化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)是一種將化學(xué)發(fā)光和免疫反應(yīng)相結(jié)合而建立起來的一種可檢測微量抗原或抗體的新型標(biāo)記免疫分析技術(shù)，具有高靈敏度、高特異度、重復(fù)性好、檢測時間短、可自動化檢測等優(yōu)點。尤為適合于傳染病四項的快速檢測，檢測效果優(yōu)于酶聯(lián)免疫吸附法［4］。

血清或血漿是臨床實驗室最常用的標(biāo)本類型。血清或血漿的分離通常采用低速離心，且能夠滿足臨床實驗室大多數(shù)項目的檢測需求，通常也用于化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)檢測傳染病四項。但是眾所周知，相對離心力10000RCF以上的離心才能最大限度避免纖維蛋白、血細胞及其碎片、血液中可能存在的其他粒子對抗原、抗體檢測的影響。臨床實驗室采用低速離心分離的血清或血漿進行傳染病四項的檢測過程中經(jīng)常出現(xiàn)初檢低值陽性結(jié)果，大量初檢低值陽性樣本的出現(xiàn)不僅給患者帶來心理負擔(dān)，也延長了檢測時間、增加了檢測費用。本次研究的目的旨在于探索不同離心速度對化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)檢測傳染病四項的影響。

研究采用的化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)為化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析技術(shù)，以 3500 r／min和 12000 r／min的離心速度分別代表低速離心和高速離心。研究共納入初檢低值陽性樣本 101例，結(jié)果發(fā)現(xiàn)傳染病四項中，HBsAg、HIV-Ag／Ab的高速離心后復(fù)檢陽性率相比低速離心后的復(fù)檢陽性率明顯降低。HBsAg的復(fù)檢陽性率分別是27.59%和58.62%（χ2＝5.069，P＝0.017），HIVAg／Ab的復(fù)檢陽性率分別是8.70%和34.78%（χ2＝4.600，P＝0.032）。提示對于HBsAg定量檢測和 HIV-Ag／Ab檢測的初檢低值陽性樣本，為了盡可能的避免外源性干擾，復(fù)檢時采用高速離心分離樣本后復(fù)檢是很有必要的，不僅可以避免大量假陽性結(jié)果，同時也可以避免少數(shù)假陰性結(jié)果，研究中發(fā)現(xiàn)2例HBsAg假陰性結(jié)果。

研究中發(fā)現(xiàn)低速離心和高速離心后二者也能夠發(fā)現(xiàn)個別假陽性和假陰性樣本，但是總體上復(fù)檢陽性率沒有發(fā)生顯著性變化，抗-HCV的復(fù)檢陽性率分別是79.17%和75.00%（χ2＝0.118，P＝0.731），TP-Ab的復(fù)檢陽性率分別是96.00%和 92.00%（χ2＝0.355，P＝0.552），結(jié)果提示提高離心速度對抗HCV和TP-Ab檢測的影響較小，但是提高離心速度仍能夠發(fā)現(xiàn)個別假陽性和假陰性結(jié)果。

所有樣本中假陽性結(jié)果較多。研究發(fā)現(xiàn)，低速離心后復(fù)檢陽性樣本 68例經(jīng)高速離心后的復(fù)檢陽性率為69.12%（47／68），低速離心后復(fù)檢陰性樣本33例經(jīng)高速離心后的復(fù)檢陰性率為87.88%（29／33）。

以往研究者對影響因素也多有討論，但未就離心速度做出明確描述［5］，復(fù)檢原則也經(jīng)多方研究，目前成為傳染病四項檢測的基本原則［6］。本次研究的上述結(jié)果說明：（1）傳染病四項檢測過程中，復(fù)檢很重要；（2）對于高靈敏度、高特異度的化學(xué)發(fā)光法，初檢低值陽性樣本經(jīng)常規(guī)使用的低速離心分離樣本后復(fù)檢，存在假陽性和假陰性結(jié)果；（3）主要是假陽性結(jié)果。

傳染病四項的 CMIA法檢測存在不同的基本免疫學(xué)原理。HBsAg和 HIV-Ag／Ab檢測采用雙抗體夾心法和雙抗原夾心法，而抗 HCV和TP-Ab檢測采用的是間接法。研究以不同方法學(xué)分組，結(jié)果顯示無論是低速離心（87.26 vs.48.08，χ2＝18.055，P＜0.001）還是高速離心（83.67 vs.19.23，χ2＝41.911，P＜0.001），間接法組的復(fù)檢陽性率都明顯高于夾心法組的復(fù)檢陽性率。提示免疫學(xué)方法不同，其復(fù)檢結(jié)果一致性也不同；以夾心法為基本原理的HBsAg和 HIV-Ag／Ab檢測，其初檢低值陽性結(jié)果的假陽性率較高，大部分樣本復(fù)檢為陰性；而以間接法為基本原理的抗 HCV和TP-Ab檢測，其初檢低值陽性結(jié)果的假陽性率較低，大部分樣本復(fù)檢時仍呈陽性。進一步比較復(fù)檢陽性率的變化，也顯示，提示提高離心速度后，夾心法的復(fù)檢陽性率下降明顯，而間接法的復(fù)檢陽性率則未發(fā)生明顯降低（χ2＝8.246，P＝0.004）。

綜合以上研究結(jié)果，低速離心復(fù)檢存在假陽性和假陰性；高速離心可以降低傳染病四項的復(fù)檢陽性率，并有助于發(fā)現(xiàn)低速離心后復(fù)檢假陰性結(jié)果；提高離心速度對傳染病四項復(fù)檢結(jié)果的影響在不同方法學(xué)之間存在差異。

［1］World Health Organization.Guidelines for the prevention，care and treatment of persons with chronic hepatitis B infection.World Health Organization.2015，03.Available：http：／／www.who.int／hiv／pub／hepatitis／hepatitis-b-guidelines／en／.

［2］World Health Organization.Guidelines for the screening，care and treatment of persons with hepatitis C infection.World Health Organization，2014，04.

［3］中華醫(yī)學(xué)會感染病學(xué)分會艾滋病學(xué)組.艾滋病診療指南（2011版）.中華傳染病雜志，2011，29（10）：629-640.

［4］黃慶華，周燕，呂迎霞，等.化學(xué)發(fā)光法在感染性指標(biāo)定量檢測中的應(yīng)用.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2014，24（5）：1293-1295.

［5］莊岳鵬，莊惠萍，吳雙，等.影響乙肝表面抗原檢測結(jié)果的因素及對策.標(biāo)記免疫分析與臨床，2012，19（6）：380-382.

［6］Acar A，Kemahli S，Altunay H，et al.The significance of repeat testing in Turkish blood donors screened with HBV，HCV，and HIV immunoassays and the importance of S／CO ratios in the interpretation of HCV／HIV screening test results and as a determinant for further confirmatory testing.Transfus Med，2010，20（3）：152-159.

（潘子昂編輯）

Effect of High Speed Centrifugation on the Retesting Results of Serum Markers of Four Blood-Borne Infectious Diseases

AN Zhe，ZHANG Ni，LI Si-peng，LI Miao-xian，WANG Xiang-ling
（Department of Clinical Medicine，The Second Hospital Affiliated to Medical School of XiAn Jiaotong University，Xian 710004，China）

Objective To explore the effect of high speed centrifugation on the retesting results of serum markers of four blood-borne infectious diseases.Methods The blood samples with low initial testing-value were collected，in which there were 29 samples with HBsAg between 0.05-0.20mIU／L，23 samples with HIV-Ag／Ab between 1-2S／CO，24 samples with anti-HCV 1-2S／CO，and 25 samples with anti-TP 1-2S／CO.The blood samples were separated at low and high centrifugation speed respectively in order to be redetected.The retesting results were compared in each item-group and among two method-groups.Results All samples were centrifuged at low speed and high speed respectively and then retested.The positive rates of HBsAg were 58.62%and 27.59%respectively and had significant difference（χ2＝5.069，P＝0.017）.The positive rates of HIV-Ag／Ab were 34.78%and 8.70%respectively and had significant difference（χ2＝4.600，P＝0.032）.The positive rates of anti-HCV were 79.17%and 75.00%respectively and had no significant difference（χ2＝0.118，P＝0.731）.The positive rates of anti-TP were 96.00%and 92.00%respectively and had no significant difference（χ2＝0.355，P＝0.552）.Among the 68 positive samples and 33 negative samples which all were retested after low speed centrifugation，the false positive rate and false negative rate were 30.88%（21／68）and 12.12%（4／33）respectively.With low speed centrifugation，the retesting positive rates were 48.08%in the sandwichmethod group and 87.26%in the indirect-method group，and the difference was significant（χ2＝18.055，P＝0.000）.With high speed centrifugation，the retesting positive rates were 19.23%in the sandwich-method group and 83.67%in the indirect-method group，and the difference was also significant（χ2＝41.911，P＝0.000）.As the speed increasing，the retesting positive rates among sandwich-method group and indirectmethod group decreased 28.85% and 3.59% and had significant difference（χ2＝8.246，P＝0.004）.Conclusion High speed centrifugation could significantly decrease the retesting positive rate of HBsAg and HIVAg／Ab.The low speed centrifugation could cause false positive and false negative.The effect of centrifugation speed on the retesting results differs between sandwich-method and indirect-method.

Hepatitis B virus surface antigen； Human immunodeficiency virus Ag／Ab； Hepatitis C virus antibody； Treponema pallidum antibody； Low-speed centrifugation； High-speed centrifugation

10.11748／bjmy.issn.1006－1703.2016.01.029

2015-02-26；

2015-08-12

安哲。E-mail：anzhe80＠126.com