李 英

（昆山第二人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，江蘇 昆山 215300）

宮頸癌相關(guān)基因表達(dá)與HPV感染的相關(guān)性研究

李 英

（昆山第二人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，江蘇 昆山 215300）

目的 探討宮頸癌凋亡相關(guān) Bcl-2、TRAIL及 Caspasc-3在宮頸組織中的表達(dá)及與人乳頭瘤病毒感染（HPV）的相關(guān)性。方法 采用免疫組織化學(xué)方法對(duì)宮頸正常組織（NE）26例，宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織（SCC）30例進(jìn)行 Bcl-2、TRAIL及Caspasc-3蛋白表達(dá)的測(cè)定，同時(shí)采用PCR技術(shù)測(cè)定各組患者HP16／18感染情況。結(jié)果 ①TRALL在SCC組宮頸活檢組織中陽性表達(dá)率顯著低于 NE組（P＜0.05），SCC組中Caspage-3陽性表達(dá)率均顯著低于 NE組（P＜0.05），Bcl-2、HPV16／18在SCC組宮頸活檢組織中陽性表達(dá)率顯著高于NE組，（P＜0.05）。②在宮頸組織中，TRALL陽性表達(dá)率與組織分化程度具有相關(guān)性（P＜0.05），Caspage-3陽性表達(dá)率與組織分化程度及臨床分期具有相關(guān)性（P＜0.05）；Bcl-2陽性表達(dá)率與組織分化程度及臨床分期具有相關(guān)性（P＜0.05）；HPV16／18陽性表達(dá)率和SCC病理特征均無關(guān)。③HPV16／18感染及Bcl-2表達(dá)與TRALL、Caspage-3表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05）；TRALL與Caspage-3表達(dá)呈正相關(guān)（P＜0.05），HPV16／18感染與 Bcl-2表達(dá)呈正相關(guān)（P＜0.05）。結(jié)論 Bcl-2的過度表達(dá)，TRAIL及 Caspasc-3低表達(dá)和HPV16／18感染在宮頸癌發(fā)病過程中發(fā)揮協(xié)同作用。

Bcl-2； TRAIL； Caspasc-3； 人乳頭狀瘤病毒； 宮頸癌

宮頸癌（cervical cancer）系臨床上常見的婦科惡性腫瘤［1］。臨床對(duì)于宮頸癌發(fā)病機(jī)制的研究顯示，人類乳頭瘤病毒（HPV）持續(xù)感染是宮頸癌發(fā)生的首要誘導(dǎo)因素，但其具體的致癌機(jī)制尚未明確。近年來隨著學(xué)者對(duì)于細(xì)胞凋亡及凋亡相關(guān)蛋白研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)其對(duì)宮頸增生的影響已成為腫瘤治療及病毒感染的新靶點(diǎn)［2］。故筆者結(jié)合多年臨床經(jīng)驗(yàn)，通過測(cè)定Bcl-2、TRAIL、Caspasc-3 HPV16／18基因在正常宮頸上皮與宮頸癌中的表達(dá)情況，探討了其與人乳頭瘤病毒感染（HPV）的相關(guān)性?，F(xiàn)報(bào)道如下。

資料和方法

1 研究對(duì)象

選取我院2014年1月至 12月行宮頸活檢組織、超高頻電波刀手術(shù)標(biāo)本蠟塊112例，年齡22～64歲，平均年齡42.6±22.9歲，其中NE26例，SCC30例。所選擇標(biāo)本病人均為初次診斷為宮頸癌者，無放化療、激素等治療史。所有取得的標(biāo)本均采用10%福爾馬林進(jìn)行固定，石蠟包埋，4μm厚常規(guī)切片。

2 方法

2.1 免疫組織化學(xué)檢測(cè) 采用免疫組織化學(xué)組化 Elivision TMplus法，測(cè)定宮頸活檢組織 TRAIL及Caspasc-3表達(dá)，TRAIL單克隆抗體購(gòu)于北京沫之東生物技術(shù)有限公司（1：100）、Caspasc-3多克隆抗體（1：200）、Elivision TMplus試劑盒購(gòu)于上海三維生物技術(shù)有限公司。操作嚴(yán)格依照說明書［3］。Bcl-2蛋白采用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)，Bcl-2鼠抗人單克隆抗體購(gòu)于上海酶聯(lián)生物研究所，操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。染色結(jié)果判斷參考文獻(xiàn)［4］進(jìn)行。

2.2 HPV16／18的 PCR檢測(cè) HPV16／18的測(cè)定按照核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)試劑盒的要求進(jìn)行，PCR擴(kuò)增試劑盒、Taq DNA酶和引物均購(gòu)自上海酶聯(lián)生物研究所。HPV16和 18型兩種特異型引物分別選自E6、E7基因區(qū)與 L1基因，兩者的擴(kuò)增長(zhǎng)度分別為400 bp和100bp。產(chǎn)物經(jīng)2%瓊脂糖凝膠電泳分析，在400bp、100bp處出現(xiàn)條帶者即判斷為陽性。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用 SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件理，多組間比較采用OneWay ANOVA分析（單因素方差分析），組間比較采用 t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用 χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性檢驗(yàn)采用Spearman等級(jí)相關(guān)性分析。

結(jié) 果

1 宮頸病變組織中不同基因的表達(dá)水平

TRALL、Caspage-3在 NE組組宮頸活檢組織中陽性表達(dá)率高于SCC組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），Bcl-2、HPV16／18在 SCC組宮頸活檢組織中陽性表達(dá)率高于NE組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 宮頸病變組織中不同基因的表達(dá)水平

2 宮頸組織中各基因表達(dá)與病理特征關(guān)系分析

在宮頸組織中，TRALL陽性表達(dá)率與組織分化程度密切相關(guān)，Caspage-3、Bcl-2陽性表達(dá)率與 CIN分級(jí)、組織分化程度及臨床分期密切相關(guān)，差異顯著（P＜0.05）；HPV16／18陽性表達(dá)率與SCC病理特征均無關(guān)。見表2。

表2 宮頸組織中各基因表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性

3 Spearman等級(jí)相關(guān)性分析

HPV16／18感染與 TRALL、Caspage-3表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r＝－0.627、－0.616，P＜0.05），Bcl-2表達(dá)與TRALL、Caspage-3表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r＝－0.576、－0.573，P＜0.05），TRALL與 Caspage-3表達(dá)呈正相關(guān)（r＝－0.683、－0.629，P＜0.05），HPV16／18感染與Bcl-2表達(dá)呈正相關(guān)（r＝－0.515、－0.508，P＜0.05）。

討 論

宮頸癌居我國(guó)婦科惡性腫瘤的首位，不僅對(duì)婦女的健康產(chǎn)生危害，對(duì)其生命及生活質(zhì)量也均構(gòu)成嚴(yán)重威脅。其他國(guó)家相比，我國(guó)屬于宮頸癌發(fā)病率相對(duì)較低的國(guó)家，但據(jù) WTO國(guó)際部研究中心最新統(tǒng)計(jì)顯示，我國(guó)每年新增宮頸癌病例約達(dá)12.9萬［5］，已成為我國(guó)婦女死亡的主要原因之一，且近幾來其患病率明顯增加，并逐漸轉(zhuǎn)向年輕化［7］。宮頸癌的發(fā)生是多方面、多階段的極其復(fù)雜的過程，其中細(xì)胞凋亡作為腫瘤形成的重要機(jī)制之一在近幾年倍受注目，目前研究多集中于促凋亡蛋白與抗凋亡的蛋白以及從宮頸上皮肉瘤樣病變-低度到宮頸上皮肉瘤樣病變-高度在到宮頸癌的整個(gè)過程中發(fā)揮重要作用的凋亡蛋白方面［6］。

TRALL蛋白屬腫瘤壞死因子家族，可發(fā)揮顯著的抗腫瘤作用，而對(duì)正常組織細(xì)胞未表現(xiàn)出顯著的殺傷作用。Taleda等［7］研究顯示，TRALL蛋白缺失，宮頸癌發(fā)病率明顯上升。本研究發(fā)現(xiàn)，TRALL蛋白在SCC宮頸活檢組織中陽性表達(dá)率呈下降趨勢(shì)，且TRALL蛋白陽性表達(dá)率與組織分化程度密切相關(guān)，表明 TRALL蛋白的缺失與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展具有一定的相關(guān)性。同時(shí)，本研究還顯示，Caspage-3在SCC組的陽性表達(dá)率均顯著低于 NE組，表明Caspage-3低表達(dá)與宮頸癌的發(fā)生具有相關(guān)性，可能出現(xiàn)于宮頸癌向惡性發(fā)展的初期，表明 Caspage-3低表達(dá)可促進(jìn)宮頸癌惡化進(jìn)程。這與國(guó)內(nèi)賈萬鈞等［8］研究結(jié)果相一致。

Bcl-2蛋白是重要的細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)因子，研究顯示［9］，Bcl-2蛋白過度表達(dá)可抑制細(xì)胞凋亡，使受損的細(xì)胞獲得永生，并在增殖基因、生長(zhǎng)抑制基因的共同調(diào)控下可發(fā)展成為腫瘤。本研究顯示，Bcl-2陽性表達(dá)率與組織分化程度及臨床分期具有相關(guān)性，表明 Bcl-2與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展有密切聯(lián)系，其陽性表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的增殖、浸潤(rùn)密切相關(guān)，這與朱華等［10］研究結(jié)果一致。

近幾年研究發(fā)現(xiàn)，病毒整合也是影響宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展的重要因素，它可引起病毒基因表達(dá)失調(diào)、增加宿主基因的不穩(wěn)定性，還有可能導(dǎo)致癌基因激活，從而誘導(dǎo)了細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為。高危型HPV主要為16、18等亞型，它們?cè)趯m頸癌演變過程發(fā)揮重要作用。本研究顯示，SCC組的HPV16／18感染率顯著高于NE組，表明HPV16／18感染為宮頸癌發(fā)生發(fā)展的主要原因之一。

Spearman等級(jí)相關(guān)性分析結(jié)果顯示，HPV16／18感染與 Bcl-2蛋白表達(dá)呈正相關(guān)，與 TRALL蛋白及Caspage-3蛋白呈負(fù)相關(guān)，推斷HPV16／18感染有可能對(duì)Bcl-2蛋白、TRALL蛋白及Caspage-3表達(dá)水平及細(xì)胞內(nèi)定位發(fā)揮直接或間接調(diào)控作用，同時(shí)也顯示 Bcl-2蛋白、TRALL蛋白及Caspage-3蛋白參與了HPV16／18感染引起的鱗狀上皮細(xì)胞分化成熟障礙過程，四者間在宮頸癌的演變過程中發(fā)揮協(xié)調(diào)作用。

綜合上述研究，深入研究 Bcl-2蛋白、TRALL蛋白及Caspage-3蛋白與HPV感染的相關(guān)性，對(duì)于宮頸癌的早期診斷、預(yù)后的判斷提可供有力的臨床指導(dǎo)，也為未來宮頸癌的基因治療提供了一定基礎(chǔ)。

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（檀葉青 張?jiān)鑫渚庉嫞?/p>

Association of Cervical Cancer Related Gene Expression with HPV Infection

LI Ying
（Obstetrics and Gynecology Department，Kunshan Second People′s Hospital，Kunshan 215300，China）

Objective To investigate the correlation between expression of apoptosis related to cervical cancer Bcl-2，TRAIL and Caspasc-3 in cervical tissue and infection with the human papillomavirus（HPV）.Methods The expression Bcl-2，TRAIL and Caspasc-3 protein in 26 cases of cervical normal tissue（NE），30 cases of cervical squamous carcinoma tissue（SCC）were measured by immunohistochemical method and the HP16／18 infection were detected with PCR technique.Results The positive expression rate of TRALL and Caspage-3 in cervical tissue of SCC group were significantly lower than that of NE group（P＜0.05）.The positive expression rates of Bcl-2 and HPV16／18 in SCC group were significantly higher than that of NE group（P＜0.05）.The positive expression rates of TRALL，Caspage-3 and Bcl-2 in the cervical tissues were correlated with degree of tissue histological differentiation and clinical stage of diseases（P＜0.05）.The positive expression rate of HPV16／18 in SCC and pathological characteristics were independent.The expression of HPV16／18 infection and Bcl-2 were negatively correlated with the TRALL and Caspage-3 expression（P＜0.05）.The TRALL expression was positively associated with Caspage-3 expression（P＜0.05）and the HPV16／18 infection was positively correlated with the expression of Bcl-2（P＜0.05）.Conclusion The over-expression of Bcl-2，low expression of TRAIL and Caspasc-3，and HPV16／18 infection may play a synergistic role in the pathogenesis of cervical carcinoma.

Key words：Bcl-2；TRAIL；Caspasc-3；Human papillomavirus；Cervical cancer

10.11748／bjmy.issn.1006－1703.2016.01.017

2015-07-03；

2015-10-10