胡小倩，周國芹，王素霞，曹明善，雷秋香，滑 天

（1.河北醫(yī)科大學(xué)附屬邢臺市人民醫(yī)院檢驗一科，河北 邢臺054001；2.邢臺醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校第二附屬醫(yī)院，河北 邢臺054001；3.邢臺市第三醫(yī)院，河北 邢臺054001；4.河北醫(yī)科大學(xué)附屬邢臺市人民醫(yī)院婦科，河北 邢臺054001）

聯(lián)合檢測血清 CA15-3及外周血 DNT細(xì)胞在乳腺良、惡性腫瘤鑒別及乳腺惡性腫瘤早期診斷中的應(yīng)用

胡小倩1，周國芹1，王素霞2，曹明善3，雷秋香1，滑 天4

（1.河北醫(yī)科大學(xué)附屬邢臺市人民醫(yī)院檢驗一科，河北 邢臺054001；2.邢臺醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校第二附屬醫(yī)院，河北 邢臺054001；3.邢臺市第三醫(yī)院，河北 邢臺054001；4.河北醫(yī)科大學(xué)附屬邢臺市人民醫(yī)院婦科，河北 邢臺054001）

目的 探討乳腺良、惡性腫瘤鑒別和乳腺惡性腫瘤早期診斷的新方法。方法 采用流式細(xì)胞儀測定乳腺腫瘤患者外周血DNT細(xì)胞及血清 CA15-3的表達(dá)水平。結(jié)果 血清 CA15-3及外周血 DNT細(xì)胞檢測乳腺惡性腫瘤的靈敏度、特異度分別為60.0%、96.3%；55.8%、71.3%。聯(lián)合血清 CA15-3及外周血 DNT細(xì)胞檢測，并聯(lián)實驗將乳腺惡性腫瘤的靈敏度提高至82.3%，串聯(lián)實驗將特異度提高到98.9%。結(jié)論 利用血清 CA15-3與 DNT細(xì)胞聯(lián)合檢測，將明顯提高乳腺惡性腫瘤診斷的靈敏度和特異度，有較大的臨床應(yīng)用價值。

乳腺腫瘤； 血清 CA15-3； DNT細(xì)胞； 流式細(xì)胞術(shù)

乳腺腫瘤是危害婦女健康的主要腫瘤［1］，全球乳腺癌發(fā)病率自20世紀(jì)70年代末開始一直呈上升趨勢，美國 8名婦女一生中就會有1人患乳腺癌。同時，乳腺癌也是中國女性發(fā)病率最高的癌癥，每年中國新發(fā)病率和死亡數(shù)量分別占全世界的12.2%和9.6%。乳腺癌的診療原則是早期診斷，早期治療，但由于腫瘤發(fā)展的隱匿性，往往發(fā)現(xiàn)時已經(jīng)處于中晚期，延誤了治療的最佳時機(jī)。腫瘤標(biāo)志物CA15-3在乳腺癌的診斷、療效評價、復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移、監(jiān)測及預(yù)后評估等方面有重要意義，作為診斷指標(biāo)越來越被重視。雙陰性 T淋巴細(xì)胞（doublenegative T-cell，DNT）已經(jīng)被證實是一種免疫調(diào)節(jié)性 T細(xì)胞，它的抗腫瘤作用是目前研究熱點(diǎn)課題［2］。本文通過聯(lián)合檢測外周血 DNT細(xì)胞及血清CA15-3，探討其在乳腺良、惡性腫瘤的鑒別及乳腺癌早期診斷方面的意義。

資料與方法

1 一般資料

選取2013年7月至 2015年6月邢臺市人民醫(yī)院乳腺腫瘤科收治的女性乳腺腫瘤患者 200例，均經(jīng)過病理確診，且沒有進(jìn)行手術(shù)及放化療。年齡32～74歲，平均48.3±9.6歲。其中，良性乳腺腫瘤80例，惡性乳腺腫瘤120例。

2 方法

2.1 血清 CA15-3的檢測

采用羅氏 CobasE601型電化學(xué)發(fā)光儀及進(jìn)口原裝試劑盒，方法按說明書操作。

2.2 外周血 DNT細(xì)胞的檢測

2.2.1 儀器與試劑 采用四色流式細(xì)胞術(shù)檢測DNT細(xì)胞（CD3＋CD4－CD8－）。儀器購自庫爾特-貝克曼公司，型號為 FC500，熒光標(biāo)記單克隆抗體均購自貝克曼公司。

2.2.2 檢測方法 要求所有研究對象生活飲食處于日常狀態(tài)，空腹為宜，采集經(jīng)乙二胺四乙酸抗凝的靜脈血 2mL，標(biāo)本在采集后 6小時內(nèi)處理。按照檢測要求，分別向編好號的流式試管中加入20μL單克隆抗體，隨后加入混勻的100μL抗凝血，混勻，避光，室溫孵育15min，分別加入溶血劑，溶解未標(biāo)記細(xì)胞及紅細(xì)胞。按操作程序上機(jī)檢測。

3 統(tǒng)計學(xué)方法

以CA15-3＞25U／mL為陽性標(biāo)準(zhǔn)，外周血DNT細(xì)胞≥8.3%為陽性標(biāo)準(zhǔn)。統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)，兩組間比較采用兩樣本均數(shù)t檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

1 乳腺腫瘤患者 CA15-3檢測結(jié)果

檢測結(jié)果見表1。

表1 乳腺腫瘤患者血清 CA15-3檢測結(jié)果（±s）

注：與良性腫瘤組比較，*P＜0.05

組別 例數(shù) 陽性例數(shù) 陽性率（%）CA15-3含量（U／mL）惡性腫瘤組 120 72 60.0* 59.63±8.83*良性腫瘤組80 3 3.8 16.14±3.15

由表1可見，乳腺良性腫瘤組80例患者中，血清CA15-3陽性率（假陽性率）為 3.8%；乳腺惡性腫瘤組120例患者中陽性率（即敏感度）為60.0%。惡性腫瘤組的陽性率及CA15-3含量均比良性組高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

2 乳腺腫瘤患者外周血 DNT細(xì)胞檢測結(jié)果

檢測結(jié)果見表2。

表2 乳腺腫瘤患者外周血 DNT細(xì)胞檢測結(jié)果（±s）

表2 乳腺腫瘤患者外周血 DNT細(xì)胞檢測結(jié)果（±s）

注：與良性腫瘤組比較，*P＜0.05

組別 例數(shù) DNT細(xì)胞（%）惡性腫瘤組 120 8.30±2.31*良性腫瘤組80 3.78±1.52

由表2可見，乳腺惡性腫瘤組 DNT細(xì)胞比例占（8.30±2.31）%，良性腫瘤組 DNT細(xì)胞比例占（3.78±1.52）%，二者相比較，惡性腫瘤組 DNT細(xì)胞比例明顯高于良性腫瘤組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

3 血清 CA15-3與外周血 DNT細(xì)胞判別乳腺腫瘤良、惡性的比較

以血清 CA15-3＞25U／mL為陽性標(biāo)準(zhǔn)，外周血DNT細(xì)胞≥8.3%為陽性標(biāo)準(zhǔn)，乳腺腫瘤患者血清CA15-3檢測陽性例數(shù)見表3，乳腺腫瘤患者外周血DNT細(xì)胞檢測陽性例數(shù)見表4，乳腺惡性腫瘤患者血清CA15-3與DNT細(xì)胞陽性例數(shù)見表5，乳腺良性腫瘤患者血清 CA15-3與 DNT細(xì)胞陽性例數(shù)見表6。

表3 乳腺良、惡性腫瘤患者外周血 T淋巴細(xì)胞檢測陽性數(shù)

表4 乳腺良、惡性腫瘤患者DNT細(xì)胞檢測陽性數(shù)

表5 乳腺惡性腫瘤患者血清 CA15-3及外周血 DNT細(xì)胞檢測陽性數(shù)

表6 良性腫瘤患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群及DNT細(xì)胞檢測陽性數(shù)

由表3可見，血清 CA15-3檢測乳腺惡性腫瘤的靈敏度 60.0%，特異度為96.3%，假陽性率為3.8%，假陰性率為40.0%。由表4可見，DNT細(xì)胞檢測惡性腫瘤的靈敏度為55.8%，特異度為71.3%，假陽性率為28.8%，假陰性率為44.2%。由表5可見，若聯(lián)合并聯(lián)檢測血清 CA15-3及外周血DNT細(xì)胞，可將檢測乳腺惡性腫瘤的敏感度提高至82.3%。由表6可見，若聯(lián)合串聯(lián)檢測血清 CA15-3及外周血DNT細(xì)胞，可將檢測乳腺惡性腫瘤的特異度提高至98.9%?；颊哐?CA15-3及外周血 DNT細(xì)胞兩項中任何一項異常，均應(yīng)進(jìn)一步深入檢查，兩項均正?？紤]排除惡性腫瘤可能。

討 論

腫瘤是失去了正常生物調(diào)控的異常生長、分化的細(xì)胞和組織。早期發(fā)現(xiàn)，早期診斷，早期治療是我國腫瘤診治的國策。早期發(fā)現(xiàn)的腫瘤，體積小，較少轉(zhuǎn)移，及時手術(shù)能徹底清除病灶，有效地控制腫瘤。對于無癥狀的腫瘤病人，腫瘤標(biāo)志物常常是唯一的能早期發(fā)現(xiàn)腫瘤的線索。乳腺腫瘤早期常無明顯癥狀，往往發(fā)現(xiàn)時已處于晚期，使患者喪失了盡早手術(shù)的機(jī)會。因此，乳腺腫瘤的早期診斷尤為關(guān)鍵，醫(yī)學(xué)界也在致力于尋找可以早期診斷乳腺惡性腫瘤以及乳腺良、惡性腫瘤鑒別的方法。

CA15-3是一種大分子糖類抗原，是乳腺癌相關(guān)抗原，臨床上認(rèn)為是較為敏感的腫瘤標(biāo)志物［3］，但是原發(fā)性乳腺癌 CA15-3升高并不顯著。美國臨床腫瘤協(xié)會（ASCO）綜合多項研究結(jié)果顯示，約2／3的乳腺癌患者 CA15-3在確診前 2～9個月即可逐漸升高，但早期患者很少高于正常范圍［4］，因此對于早期患者乳腺惡性腫瘤診斷意義不大，如果將CA15-3檢測單獨(dú)應(yīng)用于乳腺癌診斷，局限性很大。

近年來，國內(nèi)外研究都發(fā)現(xiàn)腫瘤患者普遍存在免疫功能紊亂，應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測外周血免疫細(xì)胞，用以早期發(fā)現(xiàn)和鑒別惡性腫瘤已應(yīng)用于臨床［5］。DNT細(xì)胞（CD3＋CD4－CD8－T淋巴細(xì)胞）是最近研究學(xué)者們非常感興趣的免疫細(xì)胞，它在維持自身免疫耐受和下調(diào)各種免疫應(yīng)答中的作用已經(jīng)被證實。有研究發(fā)現(xiàn)，DNT細(xì)胞在體外經(jīng)過非己抗原刺激后，可以特異性抑制同種同源CD4＋和CD8＋T細(xì)胞的增殖。因此，DNT細(xì)胞是一種抑制性的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞［6］。在我們的實驗中可以看出，乳腺惡性腫瘤患者 DNT細(xì)胞比例明顯高于良性腫瘤組，與吳曉蓮［7］實驗結(jié)果相一致。這表明惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中存在有DNT細(xì)胞的異常表達(dá)。

有資料表明，DNT細(xì)胞在免疫調(diào)節(jié)、器官移植、排斥反應(yīng)、自身免疫性疾病及腫瘤免疫耐受過程中發(fā)揮重要作用，是當(dāng)前免疫學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)之一［8］。

多數(shù)研究者認(rèn)為，單個腫瘤標(biāo)志物敏感性和特異性偏低，往往不能滿足臨床需要。因此，將特異性和相關(guān)性較好的幾種腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測，對提高腫瘤的早期診斷有重要價值［9］。本研究利用血清CA15-3與外周血DNT細(xì)胞聯(lián)合檢測，并聯(lián)實驗將乳腺惡性腫瘤的靈敏度提高至 82.3%，串聯(lián)實驗將特異度提高到98.9%，有較大的臨床應(yīng)用價值。

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（張增武編輯）

Application of Combined Detection of Serum CA15-3 and DNT Cells of Peripheral Blood in Early Diagnosis of Breast Malignant Tumors

HU Xiao-qian，ZHOU Guo-qin，WANG Su-xia，CAO Ming-shan，LEI Qiu-xiang，HUA Tian
（Department of Clinical laboratory，Xingtai People’s Hospital Affiliated to Hebei Medical University，Xingtai 054001，China）

Objective To explore a new method for early diagnosis of breast cancer，and differentiating diagnosis of benign and malignant tumor.Methods The flow cytometry was used to determine the expression levels of DNT cells and CA15-3 in peripheral blood of patients with breast cancer.Results The sensitivity and specificity of serum CA15-3 and peripheral blood DNT cells in the diagnosis of breast cancer were 60%，96.3%，55.8%，71.3%，respectively.The sensitivity and specificity of combined serum CA15-3 and peripheral blood DNT cells were 82.3%and 98.9%，respectively.Conclusion The combined detection of serum CA15-3 and DNT cells could improve the sensitivity and specificity with great clinical value for the diagnosis of breast cancer.Key words：Breast tumor； Serum CA15-3； DNT cells； Flow cytometry

10.11748／bjmy.issn.1006－1703.2016.01.008

2015-07-02；

2015-07-26

河北省邢臺市科技局立項課題（項目編號：2015ZC084）