賴道權(quán) 鄧勇 邱艷 邱自輝 歐書強(qiáng) 陳宇 鄧崢

?

·臨床與基礎(chǔ)研究·

白介素-33和白介素-35在乙型肝炎治療前后的變化及意義

賴道權(quán) 鄧勇 邱艷 邱自輝 歐書強(qiáng) 陳宇 鄧崢

目的 探討白介素(IL)-33和IL-35在乙型肝炎治療中的意義。方法 收集40例慢性乙型肝炎(CHB)患者治療前血清，并同時(shí)收集成功隨訪規(guī)律恩替卡韋分散片抗病毒治療6月后患者血清，另外選擇18例健康體檢者的外周血清，采用ELISA方法檢測外周血IL-33和IL-35水平表達(dá)情況。結(jié)果 正常組和CHB組IL-33水平分別為5.1±2.9 pg/mL和11.7±7.6 pg/mL，IL-35水平分別為28.9±24.7 pg/mL和271.8±480.4 pg/mL，兩組間相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為3.438和2.140，P值分別為0.002和0.039)?？共《局委?月后血清IL-33和IL-35水平均明顯下降，分別為7.1±3.8 pg/mL和46.1±29.4 pg/mL，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為2.345和2.044，P值分別為0.025和0.048)。結(jié)論 IL-33和IL-35在乙型肝炎患者血清中高表達(dá)，且治療好轉(zhuǎn)后均明顯下降，提示IL-33和IL-35參與乙型肝炎的發(fā)病過程。

肝炎；乙型；IL-33；IL-35

乙型肝炎病毒(HBV) 是一種不直接引起細(xì)胞破壞的嗜肝 DNA 病毒，其引起肝臟損傷的機(jī)制主要和機(jī)體免疫系統(tǒng)介導(dǎo)有關(guān)，宿主免疫系統(tǒng)識別HBV 并觸發(fā)免疫應(yīng)答導(dǎo)致肝細(xì)胞損害，臨床表現(xiàn)為肝功能血清轉(zhuǎn)氨酶升高。目前一般認(rèn)為 HBV 感染后細(xì)胞因子在肝臟組織損害過程中扮演著重要角色[1]，這些細(xì)胞因子的變化對引起肝組織病理損害起至關(guān)重要的作用[2]。然而，HBV感染后，哪些細(xì)胞因子參與以及如何參與肝臟組織損害過程尚未完全闡明。故本研究通過檢測慢性乙型肝炎(CHB)患者血清IL-33和IL-35水平，探討其是否參與了CHB疾病的發(fā)生及發(fā)展。

資料和方法

一、病例選擇

選擇江西省萍鄉(xiāng)市第二人民醫(yī)院2013年10月至2015年10月肝病科門診及住院CHB患者40例，再選擇其中使用恩替卡韋分散片規(guī)范抗病毒6個(gè)月后成功隨訪，且HBV DNA下降的乙型肝炎患者19例作為試驗(yàn)組，收集治療前血清及抗病毒治療6月后血清，其中男性14例，女性5例，年齡23～54歲，平均(34.4±8.2) 歲。并選擇同期健康體檢者18例，即健康對照組(HC)，其中男性12例，女性6例，年齡23～53歲，平均年齡(34.8±11.1)歲。所有患者診斷及抗病毒治療均符合2010年制定的《慢性乙型肝炎防治指南》標(biāo)準(zhǔn)[3]，近3個(gè)月未接受過免疫調(diào)節(jié)劑(如胸腺肽、糖皮質(zhì)激素)、保肝及抗病毒治療，排除合并藥物性、酒精性、自身免疫性、原發(fā)性肝癌及甲、丙、丁、戊型等病毒的重疊感染病例。所有參與研究的患者均簽署了知情同意書，且通過本院倫理委員會批準(zhǔn)。

二、檢測方法

ELISA檢測血清細(xì)胞因子，待全部標(biāo)本收集完畢后取上述凍存的血清標(biāo)本室溫凍融后通過ELISA雙抗體夾心法檢測細(xì)胞因子IL-33和IL-35水平(購自美國 MAR -KET公司)，操作嚴(yán)格按照試劑盒提供的說明書進(jìn)行，在酶標(biāo)儀450 nm處讀取數(shù)據(jù)。乙型肝炎病毒標(biāo)志物(HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc)采用化學(xué)發(fā)光法定量檢測，購自上海華科生物工程股份有限公司。生化儀(Dimension Rxl Max)檢測ALT、AST、TBil、DBil等生化指標(biāo)，HBV DNA檢測儀器購自廈門安普利生物有限公司，恩替卡韋分散片由江蘇正大天晴藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司生產(chǎn)。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

結(jié) 果

一、HC組和CHB組間年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)

HC組和CHB組間生化學(xué)指標(biāo)(TBil、DBil、ALT、AST)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。CHB組IL-33和IL-35水平均高于正常組，見表1。

表1 HC組和CHB組間年齡分布、TBil、ALT、AST、IL-33、IL-35水平比較(±s)

二、CHB組抗病毒治療IL-33和IL-35均較治療前明顯下降，且均P<0.05，但仍高于HC組，但均P>0.05，見表2。

表2 治療前后IL-33和IL-35水平比較(±s)

注：與HC組比較t分別為1.796和1.914；P分別為0.081和0.064

討 論

HBV感染后的臨床轉(zhuǎn)歸取決于病毒的毒力、數(shù)量和宿主的免疫應(yīng)答能力。機(jī)體的免疫應(yīng)答能力是防御病毒感染及病毒感染后清除的關(guān)鍵因素，其中細(xì)胞因子在病毒性肝炎中的作用愈來愈被重視，根據(jù)T淋巴細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子不同，可以將其分為Th1、Th2、Th17和Treg細(xì)胞。大量研究表明，Th1/Th2和Th17/Treg類細(xì)胞因子的表達(dá)失衡是病毒性肝炎慢性化和不良臨床轉(zhuǎn)歸的影響因素。

IL-33是一種核內(nèi)蛋白質(zhì),同時(shí)又能被釋放到細(xì)胞外，扮演著雙重角色，不但作為核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子參與基因表達(dá)的調(diào)控，還作為細(xì)胞因子影響信號通路的轉(zhuǎn)導(dǎo)[4]。細(xì)胞受損或壞死而非凋亡后，IL-33被動分泌到胞外，啟動宿主免疫系統(tǒng)，誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，激活特定免疫細(xì)胞促進(jìn)炎癥介質(zhì)，促炎因子的釋放，發(fā)揮類似高遷移率組蛋白的警報(bào)素作用[5]。

研究證實(shí)[6]，正常肝組織的肝竇內(nèi)皮細(xì)胞和門靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)有IL-33表達(dá)。Mchedlidzet等[7]研究提示，肝纖維化進(jìn)程中IL-33與固有免疫應(yīng)答之間有重要的關(guān)系，其他研究者[8]也證實(shí)IL-33作為固有細(xì)胞免疫反應(yīng)的協(xié)同刺激因子促進(jìn)肝內(nèi)iNKT細(xì)胞增殖與激活，增加γ干擾素的生成，參與肝臟病理生理調(diào)節(jié)過程。本研究顯示，CHB患者組IL-33水平明顯高于正常對照組，提示IL-33參與了CHB的發(fā)病過程。研究發(fā)現(xiàn)IL-33/ST2通過阻止Th1/Th17細(xì)胞介導(dǎo)肝免疫反應(yīng)對伴刀豆球蛋白誘導(dǎo)的肝炎具有保護(hù)作用[9]，提示CHB患者發(fā)病后，IL-33水平反應(yīng)性升高，起到保護(hù)肝臟作用有關(guān)。另外，通過恩替卡韋分散片抗病毒治療24周后復(fù)測上述CHB患者IL-33水平，發(fā)現(xiàn)患者血清IL-33水平明顯下降，但仍稍高于正常者水平。與Wang等[10]經(jīng)過12周的阿德福韋抗病毒治療后，伴隨著HBV DNA的含量減少，IL-33顯著下降結(jié)果一致。

IL-35是最近發(fā)現(xiàn)的抗炎細(xì)胞因子，能夠調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，從而阻止及延緩免疫性疾病的發(fā)生和發(fā)展。研究表明[11]，在人體內(nèi)其大部分是由調(diào)節(jié)性 T 細(xì)胞分泌，并且是該細(xì)胞發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用所必須的關(guān)鍵細(xì)胞因子[12]。Liu F等[13]研究發(fā)現(xiàn)，CHB患者外周血CD4+T 細(xì)胞中IL-35 的表達(dá)呈現(xiàn)差異性，提示IL-35在病毒感染中發(fā)揮誘導(dǎo)免疫耐受的重要作用。本研究顯示，CHB組IL-35水平明顯高于HC組，提示IL-35參與了CHB疾病的發(fā)病過程，與石銀月等[14]研究一致。另外，通過恩替卡韋分散片抗病毒治療24周后復(fù)測上述CHB患者IL-35水平發(fā)現(xiàn)，患者血清IL-35水平明顯下降，但仍稍高于正常者水平，提示CHB且控制后IL-35可逐漸恢復(fù)到正常水平，可能對維持機(jī)體正常免疫調(diào)控起到一定的作用。

因此，IL-33和IL-35在CHB的發(fā)病過程中起到了重要的作用，檢測其血清水平的變化，有利于進(jìn)一步明確HBV的發(fā)病機(jī)制和預(yù)后，從而有助于指導(dǎo)臨床治療。

[1] Bertoletti A, Maini MK, Ferrari C. The host-pathogen interaction during HBV infection: immunological controversies. Antivir Ther. 2010, 15 Suppl 3:15-24.

[2] Larrubia JR, Benito-Martínez S, Miquel-Plaza J, et al. Cytokines their pathogenic and therapeutic role in chronic viral hepatitis. Rev Esp Enferm Dig， 2009, 101: 343-351.

[3] 中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會，中華醫(yī)學(xué)會感染病學(xué)分會. 慢性乙型肝炎防治指南.中國病原生物學(xué)雜志，2011，6: 67-77.

[4] Palmer G, Gabay C.Interleukin-33 biology with potential insights into human diseases. Nat Rev Rheumatol， 2011, 7: 321-329.

[5] Arshad MI, Piquet-Pellorce C, Samson M. IL-33 and HMGB1 alarmins: sensors of cellular death and their involvement in liver pathology. Liver int, 2012, 32: 1200-1210.

[6] Marvie P, Lisbonne M, L'helgoualc'h A, et al. Interleukin-33 over expression is associated with liver fibrosis in mice and humans. J Cell Mol Med, 2010, 4: 1726-1739.

[7] McHedlidze T, Waldner M, Zopf S, et al. Interleukin-33-dependent innate lymphoid cells mediate hepatic fibrosis. Immunity, 2013，39: 357-371.

[8] Bourgeois E, Van LP, Samson M, et al. The pro-Th2 cytokine IL-33 directly interacts with invariant NKT and NK cells to induce IFN-gamma production. Eur J Immunol, 2009, 39: 1046-1055.

[9] Volarevic V, Mitrovic M, Milovanovic M, et al. Protective role of IL-33/ST2 axis in Con A-induced hepatitis. J Hepatol, 2012, 56: 26-33.

[10] Wang J, Cai Y, Ji H, et al. Serum IL-33 levels are associated with liver damage in patients with chronic hepatitis B. J Interferon Cytokine Res, 2012，32: 248-253.

[11] Collison LW, Workman CJ, Kuo TT, et al. The inhibitory cytokine IL-35 contributes to regulatory T cell function.Nature， 2007， 450：566- 569.

[12] Chaturvedi V， Collison LW， Guy CS， et al. Cutting edge: Human regulatory T cells require IL-35 to mediate suppression and infectious tolerance. J Immunol, 2011,186：6661-6666.

[13] Liu F， Tong F， He Y， et al. Detectable expression of IL-35 in CD4 + T cells from peripheral blood of chronic hepatitis B patients. Clin Immunol， 2011， 139：1-5.

[14] 石銀月，顏學(xué)兵，徐娟,等. 慢性 HBV 感染者外周血中IL-35表達(dá)水平的檢測及其意義. 中華實(shí)驗(yàn)和臨床感染病雜志(電子版)，2012，6：33-36.

(本文編輯：易玲)

江西省衛(wèi)生計(jì)生委科技計(jì)劃課題(20154043)

337000 江西省萍鄉(xiāng)市第二人民醫(yī)院感染科

鄧勇，Email: 490698443@qq.com

2016-01-07)