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        豬源彭氏變形桿菌分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

        2016-11-28 04:54:41李劍靜植枝林李軍潘艷
        中國(guó)畜禽種業(yè) 2016年9期
        關(guān)鍵詞:彭氏子宮炎生化

        李劍靜 植枝林 李軍 潘艷

        (1,廣西岑溪市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 543200;2,廣西獸醫(yī)研究所 530001;3,廣西畜禽疫苗新技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 530001)

        豬源彭氏變形桿菌分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

        李劍靜1植枝林1李軍2,3潘艷2,3

        (1,廣西岑溪市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 543200;2,廣西獸醫(yī)研究所 530001;3,廣西畜禽疫苗新技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 530001)

        以患子宮炎的后備母豬的膿性分泌物為樣本,進(jìn)行病原菌分離,通過培養(yǎng)特性試驗(yàn)、生化試驗(yàn)、16S rRNA同源性比對(duì)和小鼠致病性試驗(yàn),鑒定其中的一株優(yōu)勢(shì)菌為具有一定致病力的彭氏變形桿菌。24種常用抗菌藥物體外藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示,該菌對(duì)頭孢曲松、頭孢噻呋、氧氟沙星、恩諾沙星、氟苯尼考敏感,對(duì)阿莫西林、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、阿米卡星、卡那霉素、林可霉素、大觀霉素、替米考星等藥物耐藥。

        豬子宮炎;彭氏變形桿菌;分離鑒定;藥敏試驗(yàn)

        彭氏變形桿菌(Proteus penneri)屬于腸桿菌科變形桿菌屬的革蘭陰性桿菌,是1種條件致病菌,可引起嚴(yán)重的疾病,在人醫(yī)臨床上最常見的是引起患者敗血癥、尿路感染及呼吸道感染[1]。據(jù)報(bào)道,在人醫(yī)臨床上彭氏變形桿菌的分離率,尿液標(biāo)本為50%,傷口及軟組織滲出液標(biāo)本為25%,血液標(biāo)本為15%[2-4]。彭氏變形桿菌在畜牧業(yè)上的報(bào)道相對(duì)較少,已有的報(bào)道顯示,該菌可感染對(duì)蝦和蛇[5-6],并且在魚類食品加工過程中容易造成污染,人們食用后可引起感染[7-8],該菌在食品衛(wèi)生檢測(cè)中具有重要意義。然而,查閱現(xiàn)有的文獻(xiàn)顯示,彭氏變形桿菌在家畜上引起的疾病鮮有報(bào)道。

        2016年3月廣西某中小規(guī)模場(chǎng)后備母豬散發(fā)子宮內(nèi)膜炎,為查明病因,無菌取其膿性分泌物進(jìn)行病原菌分離鑒定,經(jīng)過生長(zhǎng)特性、生化特性和16S rRNA同源性比對(duì),鑒定其中1株優(yōu)勢(shì)菌為彭氏變形桿菌,同時(shí)對(duì)該分離菌進(jìn)行了體外藥敏試驗(yàn),現(xiàn)將試驗(yàn)及結(jié)果報(bào)告如下。

        1 材料與方法

        1.1 樣品來源

        廣西某中小規(guī)模豬場(chǎng)患子宮炎的母豬,無菌取其膿性分泌物。

        1.2 試劑

        伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基、MHA培養(yǎng)基購(gòu)自北京陸橋技術(shù)有限公司,兔血培養(yǎng)基購(gòu)自鄭州安圖綠科生物工程有限公司。革蘭氏染液、微量生化反應(yīng)管和抗菌藥物敏感試驗(yàn)紙片購(gòu)自杭州濱和微生物試劑有限公司。Bacteria Genomic DNA Kit、 Es Taq DNA Polymerase、 dNTP、 DNA 分子量標(biāo)準(zhǔn)100bp Ladder、快速瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒購(gòu)自北京康為世紀(jì)生物技術(shù)有限公司。

        1.3 細(xì)菌分離培養(yǎng)和生長(zhǎng)形態(tài)觀察

        用接種環(huán)無菌取膿性分泌物分別劃線接種于兔血平板、麥康凱瓊脂平板和伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上,培養(yǎng)24h后觀察分離菌在培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)特性。挑取優(yōu)勢(shì)菌進(jìn)行純培養(yǎng)之后進(jìn)行革蘭氏染色、鏡檢。

        1.4 生化試驗(yàn)

        依據(jù)鏡檢結(jié)果,將優(yōu)勢(shì)菌純培養(yǎng)物接種于微量生化反應(yīng)管,按說明書要求的條件培養(yǎng),并在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)觀察結(jié)果,參照 《伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè)》[9]進(jìn)行結(jié)果判定。

        1.5 細(xì)菌16S rRNA鑒定

        細(xì)菌16S rRNA擴(kuò)增采用通用引物1492R和27F[10],由上海英駿生物技術(shù)有限公司合成。經(jīng)鏡檢的分離菌,取其純培養(yǎng)物,使用細(xì)菌DNA提取試劑盒提取菌株基因組DNA,以此作為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增,反應(yīng)體系為:10x Es Taq PCR Buffer 5 ul, dNTP Mix(2.5mM each)4ul, 上下游引物各2ul,模板 DNA 為 6ul, Es Taq DNA Polymerase(5U/ul)0.25ul,RNase-Free Water補(bǔ)足50ul。 反應(yīng)程序參照陳澤祥[10]進(jìn)行。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)電泳后進(jìn)行目的片段回收純化,送上海英駿生物技術(shù)有限公司測(cè)序。

        1.6 小鼠毒力試驗(yàn)

        用滅菌生理鹽水將受試菌懸液濃度調(diào)至1個(gè)麥?zhǔn)媳葷峁埽?×108CFU/ml)。 取健康昆明小鼠 10 只(20.5±1)g 隨機(jī)分為試驗(yàn)組和對(duì)照組,每組5只,試驗(yàn)組小鼠按0.2ml/10g腹腔注射菌液,對(duì)照組小鼠按同樣劑量腹腔注射滅菌生理鹽水。正常喂養(yǎng),連續(xù)7d觀察小鼠的活動(dòng)、發(fā)病和死亡情況,剖檢死亡小鼠。觀察病變,并取內(nèi)臟器官進(jìn)行接種菌回收、鑒定。

        1.7 藥敏試驗(yàn)

        藥敏試驗(yàn)采用NCCLS(2009)[11]推薦的Kirby-Bauer法的方法。用滅菌生理鹽水將受試菌濃度調(diào)至1個(gè)麥?zhǔn)媳葷峁埽?×108CFU/ml),取0.2ml均勻涂布于MHA平板,稍靜置待平板吸收菌液后貼標(biāo)準(zhǔn)藥敏紙片,置于恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)20h,用直尺量取各藥敏紙片的抑菌圈,結(jié)果判定參照NCCLS(2009)頒布的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。

        2 結(jié)果

        2.1 細(xì)菌分離和形態(tài)學(xué)觀察

        從其中1份樣品分離到1株優(yōu)勢(shì)菌,該菌在血平板和伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)為表面光滑、邊緣整齊、扁平、透明、膜狀的小菌落。鏡檢結(jié)果為革蘭氏陰性小桿菌。

        2.2 生化試驗(yàn)結(jié)果

        受試菌不能分解鳥氨酸脫羧酶、賴氨酸脫羧酶、精氨酸雙水解酶,能分解尿素酶、苯丙氨酸脫氨酶,吲哚陽性,產(chǎn)生H2S,能發(fā)酵葡萄糖和麥芽糖少產(chǎn)氣,不能水解七葉苷。受試菌的生化特性與 《伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè)》中的彭氏變形桿菌生化特性相符。

        2.3 16S rRNA同源性比對(duì)結(jié)果

        將測(cè)序獲得分離菌的16S rRNA序列在NCBI網(wǎng)站進(jìn)行同源性比對(duì),與數(shù)據(jù)庫(kù)記載的彭氏變形桿菌(GenBank登錄號(hào):JF775423.1)的16S rRNA序列同源性達(dá)98%。

        2.4 小鼠致病力試驗(yàn)

        試驗(yàn)組小白鼠腹腔接種細(xì)菌懸液后12h,表現(xiàn)為精神沉郁、呼吸困難,食欲飲欲減退,在24h內(nèi)出現(xiàn)死亡,連續(xù)飼養(yǎng)7d內(nèi),共死亡3只,無菌取死亡小白鼠的心血、肝臟等組織接種于血平板和伊紅美藍(lán)平板,分離到與接種菌一樣的細(xì)菌。對(duì)照組小白鼠表現(xiàn)正常,無死亡。

        依據(jù)分離菌的生長(zhǎng)形態(tài)、生化特性、16S rRNA同源性比對(duì)和小鼠致病力試驗(yàn)結(jié)果,鑒定該分離菌為具有一定致病力的彭氏變形桿菌。

        2.5 藥敏結(jié)果

        體外藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示,受試菌對(duì)頭孢曲松、頭孢噻呋、氧氟沙星、恩諾沙星、氟苯尼考敏感,對(duì)阿莫西林、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、阿米卡星、卡那霉素、林可霉素、大觀霉素、替米考星等藥物耐藥(附表)。

        附表 分離菌的體外藥敏試驗(yàn)結(jié)果

        3 討論

        (1)母豬子宮炎發(fā)病率高,表現(xiàn)為生殖道流出膿性分泌物、產(chǎn)后無乳或少乳、發(fā)情不及時(shí)、屢配不孕、產(chǎn)仔數(shù)低等。引起母豬子宮炎的因素多種多樣,自然因素、人為因素、管理因素、飼料因素和疾病因素均可導(dǎo)致母豬患子宮炎,其中多種疾病可引起豬子宮炎,細(xì)菌性感染主要是大腸桿菌、鏈球菌、葡萄球菌、棒狀桿菌、綠膿桿菌、變形桿菌等,病毒性感染有細(xì)小病毒、偽狂犬病毒、乙型腦炎病毒、藍(lán)耳病病毒和圓環(huán)病毒等,呈單一感染和混合感染,以多種病原混合感染為主,本次樣品除了分離出彭氏變性桿菌,還有葡萄球菌和鏈球菌。母豬子宮炎給豬場(chǎng)造成較為嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失,需引起養(yǎng)豬人的重視,做好防治工作。

        (2)彭氏變形桿菌是一種條件致病菌,當(dāng)動(dòng)物機(jī)體抵抗力下降時(shí)可造成感染,通過尿液糞便排放可照成飼養(yǎng)環(huán)境和水體污染,因此加強(qiáng)飼養(yǎng)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)水平、提高免疫力,切實(shí)做好飼養(yǎng)環(huán)境消毒等管理工作可減少該條件致病菌引起的感染。此外,該菌在食品加工過程中也容易污染食品,如果這些污染的食品在食用前未進(jìn)行充分加熱,可能會(huì)引起食用者感染,應(yīng)引起關(guān)注。

        (3)藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示,受試的24種抗菌藥物,彭氏變形桿菌的敏感率為20.8%(5/24), 中介率8.3%(2/24),耐藥率70.9%(17/24),表明分離到的彭氏變形桿菌已產(chǎn)生較強(qiáng)的耐藥性。細(xì)菌耐藥性日益嚴(yán)重,與不科學(xué)的使用抗菌藥物密不可分,如不必要的預(yù)防用藥、沒有依據(jù)的用藥和過量使用藥物。而進(jìn)行細(xì)菌分離和體外藥敏試驗(yàn),可為臨床治療用藥提供科學(xué)參考,避免了憑經(jīng)驗(yàn)亂用抗菌藥物,減少藥物成本,同時(shí)能減緩細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生。

        [1]Malgorzata Siwińskaa,Evgeniya A.Levinac,D,et al.Classification of a Proteus penneri clinical isolate with a unique O-antigen structure to a new Proteus serogroup[J].Carbohydrate Research災(zāi)olume,2015,407:131-136.

        [2]Cantón R,Sánchez-Moreno MP,Morosini Reilly MI.Pro teus penneri[J].Enferm Infecc Microbiol Clin,2006,24(l1):8-13.

        [3]Castro ST,Rodríguez CR,Perazzi BE,et al.Comparison of different methods in order to identify Proteus spp.Rev Argent Microbiol,2006,38:119-124.

        [4]Krajden S,Fuksa M,Petrea C,et al.Expanded clinical spectrum of infections caused by Proteus penneri[J].J Clin Microbiol.1987,25:578-579.

        [5]Cao H,He S,Lu L,et al.Chen B Identification of a Proteus penneri isolate as the causal agent of red body disease of the cultured white shrimp Penaeus vannamei and its control with Bdellovibrio bacteriovorus[J].Antonie災(zāi)an Leeuwenhoek.2014,105(2):423-430.

        [6]趙成堅(jiān).蛇源細(xì)菌的分離與鑒定[M].廣西大學(xué)碩士,2013.

        [7]鄭瑞生,陳涼涼,肖熙.熟制鮑魚殘留細(xì)菌的分離及16S rDNA鑒定[J].食品科學(xué)技術(shù)學(xué)報(bào),2013,31(4):32-36.

        [8]郭全友,何木,李保國(guó),等.大黃魚腐敗細(xì)菌鑒定及PLFAs初級(jí)模型的建立[J].現(xiàn)代食品科技,2015,31(12):227-234.

        [9]布坎南R E,吉本斯N E.伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè)[M].8版.北京:科學(xué)出版社,1984:667-675.

        [10]陳澤祥,潘艷,禤雄標(biāo),等.鴨疫里氏桿菌廣西分離株16S rRNA基因序列的測(cè)定和系統(tǒng)進(jìn)化分析[J].廣西農(nóng)業(yè)科學(xué),2007,38(2):205-208.

        [11]National Committee for Clinical Laboratoray Standards.Performance standards for antimicrobial disk and dilution susceptibility tests for bacteria isolated from animals approved standard[M].2nd.Wayne,Pa.NCCLS,2009:47-55.

        廣西自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2014GXNSFAA118119),廣西科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)計(jì)劃(桂科重14121003-3-1)。

        李劍靜(1977-),女,廣西岑溪市人,本科,獸醫(yī)師,研究方向:動(dòng)物疫病防控。

        潘艷(1978-),女,廣西南寧市人,博士,副研究員,研究方向:家畜傳染病與分子生物學(xué)。

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