羅先 岑曉鵬 應(yīng)清香 范斯敏

（1，福建農(nóng)林大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院 350002；2，福建省南平市延平區(qū)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所 353000；3，福建省南平市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 353000；4，福建省南平市建陽(yáng)區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 354200）

仔豬豬瘟母源抗體消長(zhǎng)規(guī)律測(cè)定

羅先1岑曉鵬2應(yīng)清香3范斯敏4

（1，福建農(nóng)林大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院 350002；2，福建省南平市延平區(qū)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所 353000；3，福建省南平市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 353000；4，福建省南平市建陽(yáng)區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 354200）

選擇福建省南平市某規(guī)模化豬場(chǎng)豬瘟抗體檢測(cè)合格的10頭能繁母豬，分別從每頭母豬所生的仔豬中隨機(jī)抽取2頭，共20頭，25日齡斷奶，不注射豬瘟疫苗，分別于l日齡、5日齡、10日齡、15日齡、20日齡、25日齡、30日齡、35日齡、40日齡用豬瘟病毒抗體ELISA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)豬瘟抗體水平，通過(guò)檢測(cè)數(shù)據(jù)掌握母源抗體的消長(zhǎng)規(guī)律。結(jié)果表明，哺乳仔豬出生后5～10日齡血清抗體陽(yáng)性率達(dá)到了100%，為最高。抗體水平于15日齡以后開(kāi)始降低，至25日齡左右達(dá)到保護(hù)臨界值 (80%陽(yáng)性率)，40日齡時(shí)降低到5%。

仔豬；豬瘟；母源抗體；消長(zhǎng)規(guī)律

哺乳仔豬在一段時(shí)間內(nèi)被動(dòng)地獲得抵御病毒的能力，完全依賴于母源抗體的存在，但母源抗體又會(huì)影響免疫接種。本研究監(jiān)測(cè)了斷奶前后不同日齡的仔豬豬瘟抗體水平，得出的數(shù)據(jù)便于掌握母源抗體消長(zhǎng)規(guī)律，有利于豬瘟免疫程序的合理制定。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)樣品

挑選的哺乳仔豬為福建省南平市某規(guī)模化豬場(chǎng)同期分娩的10頭經(jīng)產(chǎn)母豬 (分娩前均經(jīng)過(guò)血清學(xué)檢測(cè)，判定為豬瘟抗體合格保護(hù)力)所產(chǎn)，隨機(jī)抽取每頭母豬所產(chǎn)的仔豬中的2頭，共20頭。不接種豬瘟疫苗免疫，仔豬于25日齡斷奶。分別于l日齡、5日齡、10日齡、15日齡、20日齡、25日齡、30日齡、35日齡、40日齡采集血液分離血清，并進(jìn)行豬瘟抗體檢測(cè)，觀察母源抗體的消長(zhǎng)規(guī)律。

1.2 試劑

IDEXX公司豬瘟病毒抗體 (CSFV-Ab)ELISA檢測(cè)試劑盒，批號(hào)43220-Y241。包括用CSFV-Ag包被的微量反應(yīng)板，陽(yáng)性對(duì)照血清（Positive Control）， 陰性對(duì)照血清（Negative Control）， 樣品稀釋液（Sample Diluent）， 酶標(biāo)抗體（Conjugate）， 10 倍濃縮洗滌液（Wash Concentrate×10）， TMB 底物溶液（TMB Substrate）， 終止液（Stop Solution）， 均購(gòu)自北京IDEXX生物科技有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)器材

MH-2微量振蕩器、QL-901 Vortex離心機(jī)、Eppendorf 10～100μl單道移液器、 BRAND30～300μl 8 道移液器、 AXYGEN 200μl移液器吸頭、Thermo Multiskan MK3型酶標(biāo)儀、BioTek洗板機(jī)、500ml量筒、超純水機(jī)、記時(shí)器等。

1.4 試驗(yàn)方法

（1）試驗(yàn)前，所有試劑需恢復(fù)到室溫（18～25℃）。通過(guò)輕輕旋轉(zhuǎn)使試劑均勻混合。

（2）取出用抗體包被的微量反應(yīng)板，并將每個(gè)樣品的位置在記錄表上標(biāo)記好。

（3）用8道移液器吸取50μl的樣品稀釋液加入每個(gè)反應(yīng)孔中。

（4）陰陽(yáng)性對(duì)照各設(shè)置2孔，余下的反應(yīng)孔為被檢樣品。用單道移液器吸取50μl陰性對(duì)照血清加入陰性對(duì)照孔，再吸取50μl陽(yáng)性對(duì)照血清加入陽(yáng)性對(duì)照孔，然后吸取50μl被檢樣品加入余下的反應(yīng)孔。

（5）將反應(yīng)板置于振蕩器中，振蕩混勻。

（6）在恒溫箱室溫孵育2h。

（7）用洗板機(jī)洗滌每個(gè)反應(yīng)孔，每孔加入300μl洗液，洗滌3次。最后一次洗滌后，將反應(yīng)板在折疊好的紗布上拍干。

（8）用8道移液器吸取100μl酶標(biāo)抗體加入每個(gè)反應(yīng)孔中，在恒溫箱室溫下孵育30min。

（9）重復(fù)步驟（7）。

（10）用8道移液器吸取100μl的TMB底物溶液加入每個(gè)反應(yīng)孔中。在室溫條件下于避光處孵育10min。

（11）用8道移液器吸取100μl終止液加入每個(gè)反應(yīng)孔中，終止反應(yīng)。

（12）置于酶標(biāo)儀上，用450nm單波長(zhǎng)測(cè)定樣本以及對(duì)照的吸光值（A450值）。

（13）結(jié)果計(jì)算：阻斷率=（陰性對(duì)照平均A450值-樣品A450值）/陰性對(duì)照平均A450值×100%；

（14）實(shí)驗(yàn)成立條件：陰性對(duì)照的平均A450值大于0.50， （陰性對(duì)照平均A450值-陽(yáng)性對(duì)照平均A450值）/陰性對(duì)照平均A450值×100%的值大于50%。

（15）判定標(biāo)準(zhǔn)：具體見(jiàn)表1。

表1 豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果判定

2 結(jié)果

母源抗體結(jié)果詳見(jiàn)表2。

3 分析與討論

從表2可以看出，仔豬出生后5～10日齡血清抗體陽(yáng)性率達(dá)到了100%，為最高?？贵w水平于15日齡以后開(kāi)始降低，至25日齡左右達(dá)到保護(hù)臨界值 (80%陽(yáng)性率)，40日齡時(shí)已經(jīng)降低到了5%。因?yàn)楸驹囼?yàn)中規(guī)定仔豬在25日齡斷奶，所以母源抗體水平在25日齡后下降的速度變快，應(yīng)該與此有關(guān)。鑒于該場(chǎng)的現(xiàn)有情況看來(lái)，在不采用超前免疫的情況下，26日齡為較佳的豬瘟疫苗免疫時(shí)間。

通過(guò)試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，仔豬母源抗體水平下降速度取決于對(duì)應(yīng)母豬的抗體水平，這與以往的一些研究結(jié)果基本符合。Vandeputte[1]發(fā)現(xiàn)，母源抗體能在哺乳仔豬吃奶后2h后被檢測(cè)到，并能持續(xù)7周以上。豬瘟強(qiáng)毒在仔豬7周齡免疫后不能感染機(jī)體，未免疫的對(duì)照組則呈現(xiàn)出典型的發(fā)病癥狀。劉莉等[2]通過(guò)檢測(cè)400頭仔豬的血清抗體發(fā)現(xiàn)，豬瘟疫苗按常規(guī)免疫接種后，母豬產(chǎn)下的仔豬其母源抗體呈現(xiàn)出正態(tài)分布，從1日齡開(kāi)始逐漸升高，可在11～16日齡達(dá)到最高峰值，之后母源抗體將隨著仔豬日齡的增長(zhǎng)開(kāi)始逐漸降低，大約有部分仔豬（將近50%）的抗體水平于21日齡時(shí)降到1：16甚至更低。在這個(gè)階段接種免疫疫苗不但能保持抗體在血清中的效價(jià)，還能避開(kāi)干擾的母源抗體。林毅等[3]應(yīng)用豬瘟Dot-ELISA試劑盒檢測(cè)仔豬的抗體結(jié)果如下：7日齡豬的瘟抗體保護(hù)率為80.0%、14日齡的保護(hù)率為60.0%、21日齡的保護(hù)率為33.3%、28日齡的保護(hù)率為13.4%、35日齡的保護(hù)率為6.7%。其中7日齡仔豬的母源抗體水平較高。

表2 仔豬豬瘟母源抗體檢測(cè)結(jié)果

綜上所述，仔豬的母源抗體消長(zhǎng)規(guī)律決定了仔豬豬瘟的免疫日齡，而這一規(guī)律必須通過(guò)抗體監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)來(lái)確定。選擇的免疫時(shí)間應(yīng)該為仔豬母源抗體降低至保護(hù)率80%的這個(gè)最低臨界值的日齡，這樣既能維持抗體在血清中的效價(jià)，又能不受母源抗體的干擾。由于母豬的血清抗體與仔豬的母源抗體水平有著緊密的聯(lián)系，所以在生產(chǎn)實(shí)踐中應(yīng)定期監(jiān)測(cè)母豬的母源抗體水平，根據(jù)檢測(cè)所得的數(shù)據(jù)對(duì)免疫程序進(jìn)行調(diào)整優(yōu)化，才能夠更科學(xué)地提高豬群對(duì)豬瘟病毒的免疫力，有效地控制和避免豬瘟疫情在豬場(chǎng)的發(fā)生。

[1]災(zāi)andeputte J,Too HL.Adsorption of colostral antibodies against classical swine fever,persistence of maternal antibodies,and effect on response to vaccination in baby pigs[J].Am J災(zāi)et Res,2001,62(11):1805-1811.

[2]劉莉,金璐娟,楊旭,等.規(guī)模化豬場(chǎng)豬瘟母源抗體消退規(guī)律[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2004(10)：46-47.

[3]林毅,馮金傳,張道永.規(guī)?；i場(chǎng)4種免疫程序的免疫效果比較[J].中國(guó)獸醫(yī)科技,2000,30(4)：20-22.