席 民，胡向陽，鄭 麗，汪 巧

?

TPO、CD56和GPC-3表達(dá)在甲狀腺乳頭狀癌中的診斷價(jià)值

席 民1,2，胡向陽1,3，鄭 麗4，汪 巧1,3

目的 探討甲狀腺過氧化物酶(TPO)、神經(jīng)細(xì)胞黏附分子(CD56)與磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(GPC-3) 蛋白表達(dá)在甲狀腺乳頭狀癌中的診斷價(jià)值。 方法 采用免疫組織化學(xué)Envision兩步法檢測80例甲狀腺乳頭狀癌和77例甲狀腺良性病變中TPO、CD56和GPC-3蛋白的表達(dá)。結(jié)果 80例甲狀腺乳頭狀癌中的TPO、CD56和GPC-3的陽性表達(dá)率分別為11.2%、8.8%、88.8%，77例甲狀腺良性病變中的陽性表達(dá)率分別為88.3%、93.5%、2.6%，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。三項(xiàng)標(biāo)記物中，以CD56診斷靈敏度最高，達(dá)93.5%；以GPC-3診斷特異度最高，達(dá)97.4%。甲狀腺乳頭狀癌中TPO、CD56和GPC-3蛋白的表達(dá)與患者性別、年齡、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理參數(shù)間均無相關(guān)性。結(jié)論TPO、CD56和GPC-3在甲狀腺乳頭狀癌與甲狀腺良性病變的鑒別診斷中均有重要價(jià)值，聯(lián)合檢測尤其是聯(lián)合靈敏度最高的CD56及特異度最高的GPC-3，更能提高甲狀腺乳頭狀癌診斷的準(zhǔn)確性。

甲狀腺乳頭狀癌；TPO；CD56；GPC-3

斷主要依據(jù)乳頭狀結(jié)構(gòu)、砂礫體、毛玻璃樣核、核溝、核內(nèi)包涵體等典型特征。然而，一些甲狀腺良性病變亦可伴有乳頭狀增生或毛玻璃樣核；一些非經(jīng)典型PTC也可無典型核特征，從而給HE染色下區(qū)分PTC與某些甲狀腺良性病變帶來困難，故尋找能夠幫助鑒別診斷的分子標(biāo)志物顯得十分必要。該研究采用免疫組織化學(xué)法檢測甲狀腺過氧化物酶(thyroperoxidase,TPO)、神經(jīng)細(xì)胞黏附分子(CD56)與磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(glypican3，GPC-3)在PTC與甲狀腺良性病變中的表達(dá)狀況，探討其對(duì)二者鑒別診斷的價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 標(biāo)本來源 選取安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院2013年～2015年期間的PTC標(biāo)本80例，男16 例，女64 例；年齡16～83歲，中位年齡50歲。伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者24例，不伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者56例。另收集同期手術(shù)切除的甲狀腺良性病變77例(結(jié)節(jié)性甲狀腺腫35例、甲狀腺腺瘤21例、橋本氏甲狀腺炎11例)，男14例，女63例；年齡22～76歲 ，中位年齡49歲。

1.1.2 主要抗體與試劑TPO、CD56、GPC-3單克隆抗體(均為即用型、鼠抗人抗體)、二抗及DAB顯色液等均購自福州邁新生物技術(shù)有限公司。

1.2 方法 所有手術(shù)切除標(biāo)本經(jīng)組織處理，石蠟包埋后切片，切片厚度約4μm。采用Envision免疫組化兩步法檢測TPO、CD56、GPC-3抗體在PTC和甲狀腺良性病變中的表達(dá)狀況。選用已知陽性切片作為陽性對(duì)照，PBS代替一抗做陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定TPO陽性定位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜，CD56陽性定位于細(xì)胞膜和(或)細(xì)胞質(zhì)，GPC-3陽性定位于細(xì)胞質(zhì)和(或)細(xì)胞膜，陽性產(chǎn)物為棕黃色,當(dāng)陽性細(xì)胞數(shù)占腫瘤細(xì)胞百分比≥10%，判定為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS13.0軟件進(jìn)行分析，采用χ2檢驗(yàn)、校正χ2檢驗(yàn)及Fisher精確概率法。靈敏度(%)=真陽性病例數(shù)/(真陽性病例數(shù)+假陰性病例數(shù))×100%；特異度(%)=真陰性病例數(shù)/(真陰性病例數(shù)+假陽性病例數(shù))×100%；準(zhǔn)確度(%)=真陽性病例數(shù)+真陰性病例數(shù)/(癌總例數(shù)+良性總例數(shù))×100%。

2 結(jié)果

2.1TPO在甲狀腺病變中的表達(dá)狀況TPO陽性表達(dá)部位定位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜。TPO在77例甲狀腺良性病變中有68例呈陽性表達(dá)，陽性率為88.3%；在80例PTC中，僅9例呈陽性表達(dá)，陽性率為11.3%。TPO在PTC與甲狀腺良性病變間的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=93.24，P<0.05)，見表1、圖1。TPO在PTC與甲狀腺良性病變鑒別診斷中的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度分別為88.8%、88.3%、88.5%。

圖1 PTC和結(jié)節(jié)性甲狀腺腫中TPO的表達(dá) 免疫組化×100

A：TPO在PTC中陰性表達(dá)；B：TPO在結(jié)節(jié)性甲狀腺腫中陽性表達(dá)

2.2CD56在甲狀腺病變中的表達(dá)狀況CD56陽性表達(dá)部位主要位于細(xì)胞膜，亦可見細(xì)胞質(zhì)表達(dá)。CD56在77例甲狀腺良性病變中有72例呈陽性表達(dá)，陽性率為93.5%；在80例PTC中，僅7例呈陽性表達(dá)，陽性率為8.8%，且表達(dá)部位多位于癌與周圍正常組織交界處。CD56在PTC與甲狀腺良性病變間的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=112.75，P<0.05),見表1、圖2。CD56在PTC與甲狀腺良性病變鑒別診斷中的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度分別為91.2%、93.5%、92.3%。

A：CD56在PTC中陰性表達(dá) ；B：CD56在濾泡腺瘤中陽性表達(dá)

2.3GPC-3在甲狀腺病變中的表達(dá)狀況GPC-3陽性表達(dá)部位主要定位于細(xì)胞質(zhì)。GPC-3在80例PTC中有71例呈陽性表達(dá)，陽性率為88.8%；77例甲狀腺良性病變中，僅2例呈陽性表達(dá)，陽性率為2.6%。GPC-3在PTC與甲狀腺良性病變間的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=117.06，P<0.05)，見表1、圖3。GPC-3在PTC與甲狀腺良性病變鑒別診斷中的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度分別為88.8%、97.4%、93.0%。

2.4PTC中TPO、CD56、GPC-3蛋白的表達(dá)臨床病理參數(shù)間的關(guān)系 甲狀腺乳頭狀癌中TPO、CD56失表達(dá)及GPC-3陽性表達(dá)在不同性別、年齡、腫瘤直徑以及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表2。

圖3 PTC和橋本氏甲狀腺炎中GPC-3的表達(dá) 免疫組化×100

A：GPC-3在PTC中陽性表達(dá) ；B：GPC-3在橋本氏甲狀腺炎中陰性表達(dá)

表1 TPO、CD56、GPC-3在PTC和甲狀腺良性病變中的表達(dá)狀況(n)

3 討論

TPO是甲狀腺激素(T3、T4)合成的關(guān)鍵酶，在碘的活化、酪氨酸殘基的碘化、碘化酪氨酸殘基的偶聯(lián)過程中起著重要的催化作用。近年來，國內(nèi)外學(xué)者陸續(xù)開始研究甲狀腺惡性病變中TPO的表達(dá)狀況，探討其實(shí)用價(jià)值，但結(jié)論尚存在爭議。大多數(shù)報(bào)道[1-4]指出TPO在甲狀腺惡性腫瘤中低表達(dá)或表達(dá)缺失，TPO免疫染色對(duì)區(qū)分甲狀腺良、惡性病變有較高的靈敏度及特異度，而Savinetal[5]卻持相反觀點(diǎn)，認(rèn)為TPO檢測不能用于區(qū)分甲狀腺良惡性病變。本次研究中，TPO在PTC組中僅少數(shù)陽性表達(dá)，陽性表達(dá)率顯著低于甲狀腺良性病變組。因此，本研究顯示免疫組化檢測TPO表達(dá)可以作為一個(gè)較好的輔助手段應(yīng)用于PTC與甲狀腺良性病變的鑒別診斷中，且TPO失表達(dá)狀況與PTC患者年齡、性別、腫瘤大小和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理參數(shù)無關(guān)。

表2 TPO、CD56、GPC-3表達(dá)與臨床病理參數(shù)間的關(guān)系

*P>0.05

CD56是免疫球蛋白超家族中的一員，在小細(xì)胞肺癌、甲狀腺腫瘤、前列腺癌等其他惡性腫瘤中的意義仍在研究探討中。研究[6-8]顯示CD56在甲狀腺乳頭狀癌中不表達(dá)或灶性弱表達(dá)，而在正常甲狀腺組織、濾泡性腺瘤、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫和乳頭狀增生中高表達(dá)。本研究中，CD56在甲狀腺良性病變中大多呈強(qiáng)陽性表達(dá)，在PTC中較少表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；且CD56 在PTC診斷中的靈敏度(91.2%)和特異度(93.5%)更優(yōu)于TPO。研究結(jié)果提示在PTC與甲狀腺良性病變的鑒別診斷中，CD56可能具有更高于TPO的潛在價(jià)值。同時(shí)，CD56在其灶性表達(dá)的7例PTC中，表達(dá)部位均主要位于癌與周圍良性或正常組織交界處，提示CD56失表達(dá)可能與腫瘤組織侵襲能力有關(guān)，國外學(xué)者ElDemellawyetal[9]也在其先前報(bào)道中提及類似結(jié)論。此外，本研究未顯示CD56在PTC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組與非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組間表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示CD56失表達(dá)可能與腫瘤組織轉(zhuǎn)移能力無關(guān)。

GPC-3是硫酸類肝素糖蛋白聚糖家族的一員，最初主要是探討其在肝癌組織[10-11]中的表達(dá)及其意義；而有關(guān)GPC-3在甲狀腺癌中的報(bào)道甚少。Yamanakaetal[12]指出GPC-3在甲狀腺惡性腫瘤中呈強(qiáng)陽性表達(dá)，且表達(dá)模式與肝癌類似，而國內(nèi)到目前為止尚無此類研究與報(bào)道。本研究檢測了80例PTC中GPC-3的表達(dá)狀況，陽性表達(dá)率為88.8%，顯著高于甲狀腺良性病變組(2.6%)；且特異度、準(zhǔn)確度更高于TPO與CD56，提示GPC-3可作為甲狀腺癌診斷的一項(xiàng)可靠標(biāo)志物。Yamanakaetal[12]亦指出GPC-3于腫瘤發(fā)展早期階段表達(dá)，可作為早期診斷的標(biāo)志物，而本研究中，GPC-3表達(dá)與PTC患者腫瘤直徑、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間均無相關(guān)性，故未能對(duì)這一觀點(diǎn)給出驗(yàn)證。

綜上所述，TPO、CD56在PTC中失表達(dá)或弱表達(dá)，在甲狀腺良性病變中表達(dá)較高；GPC-3在PTC中高表達(dá)，在甲狀腺良性病變中較少表達(dá)。TPO、CD56和GPC-3在PTC與濾泡腺瘤、橋本及伴有乳頭狀增生的結(jié)甲等甲狀腺良性病變的鑒別診斷中均有重要價(jià)值，聯(lián)合檢測尤其是聯(lián)合靈敏度最高的CD56及特異度最高的GPC-3，更能提高PTC診斷的準(zhǔn)確性。

[1]LiuZ,YuP,XiongY,etal.SignificanceofCK19,TPOandHBME-1expressionfordiagnosisofpapillarythyroidcarcinoma[J].IntJClinExpMed,2015,8(3):4369-74.

[2]PaunovicI,IsicT,HavelkaM,etal.Combinedimmunohistochemistryforthyroidperoxidase,galectin-3,CK19andHBME-1indifferentialdiagnosisofthyroidtumors[J].APMIS,2012,120(5):368-79.

[3] 郭 健,張世豪,延麗雅,等.CK19、TPO、Galectin-3與HBME-1蛋白表達(dá)對(duì)甲狀腺腫瘤病理診斷作用分析[J]. 中國實(shí)用醫(yī)藥,2015,10(18):5-7.

[4] 康 璇,段 宇. 利普液基細(xì)胞學(xué)聯(lián)合免疫細(xì)胞化學(xué)在細(xì)針穿刺診斷甲狀腺結(jié)節(jié)中的價(jià)值[J]. 南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2015,35(4):561-3.

[5]SavinS,CvejicD,IsicT,etal.Thyroidperoxidaseimmunohistochemistryindifferentialdiagnosisofthyroidtumors[J].EndocrPathol, 2006 ,17(1):53-60.

[6]CeyranAB,enolS,imekB?,etal.Roleofcd56ande-cadherinexpressioninthedifferentialdiagnosisofpapillarythyroidcarcinomandsuspectedfollicular-patternedlesionsofthethyroid:theprognosticimportanceofe-cadherin[J].IntJClinExpPathol, 2015,8(4):3670-80.

[7]MokhtariM,EftekhariM,TahririanR,etal.AbsentCD56expressioninpapillarythyroidcarcinoma:afindingofpotentialdiagnosticvalueinproblematiccasesofthyroidpathology[J].JResMedSci,2013,18(12):1046-50.

[8]ShahebrahimiK,MadaniSH,FazaeliAR,etal.DiagnosticvalueofCD56andnm23markersinpapillarythyroidcarcinoma[J].IndianJPatholMicrobiol,2013,56(1):2-5.

[9]ElDemellawyD,NasrA,AlowamiS.ApplicationofCD56,p63andCK19immunohistochemistryinthediagnosisofpapillarycarcinomaofthethyroid[J].DiagnPathol,2008,3:5.

[10]ChenM,LiG,YanJ,etal.Reevaluationofglypican-3asaserologicalmarkerforhepatocellularcarcinoma[J].ClinChimActa,2013,423:105-11.

[11]邰伯軍,姚 敏,顧 星. 磷脂酰肌醇蛋白多糖-3對(duì)肝癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響[J]. 臨床肝膽病雜志,2013,29(11):863-6.

[12]YamanakaK,ItoY,OkuyamaN,etal.Immunohistochemicalstudyofglypican3inthyroidcancer[J].Oncology,2007,73(5-6):389-94.

The diagnostic value of expression of TPO protein CD 56 protein and GPC -3 protein in papillary thyroid carcinoma

XiMin1,2,HuXiangyang1,3,ZhengLi4,etal

(1Dept of Pathology, Anhui Medical University, Hefei 230032;2Dept of Pathology, Chuzhou City Vocational College,Chuzhou 233100;3Dept of Pathology,The First Affiliated Hospital of Anhui Medical University, Hefei 230022;4Dept of Pathology, The Second People's Hospital of Hefei,Hefei 230011)

Objective To evaluate the diagnostic value of TPO, CD56 and GPC-3 in papillary thyroid carcinoma(PTC).Methods Immunohistochemical staining was performed in 80 specimens of PTC and 77 specimens of papillary benign lesions to examine the expression of TPO protein, CD56 protein and GPC-3 protein.Results The positive ratios of TPO, CD56 and GPC-3 were 11.2%, 8.8% and 88.8% in PTC, respectively, and their positive ratios in benign lesions were 88.3%, 93.5% and 2.6%. There were all statistical difference between them(P<0.05). The one which had highest diagnostic sensitivity was CD56 and it could reach 93.5%; the one which had highest diagnostic specificity was GPC-3 and it could reach 97.4% in three makers. There were no relationships between expression of TPO, CD56 and GPC-3 and the clinicopothological features including patients′ gender, age, tumor diameter and lymph node metastasis in PTC.Conclusion To evaluate the expression of TPO, CD56 and GPC-3 protein may provide reference value for the diagnosis of PTC and benign lesions. GPC-3, the one which has highest diagnostic specificity, combined with CD56 which has the highest diagnostic sensitivity of PTC, may further improve diagnostic accuracy of the PTC.

papillary thyroid carcinoma; TPO; CD56; GPC-3

R736.1

A

10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2016.10.032

2016-05-19接收

國家臨床重點(diǎn)?？平ㄔO(shè)項(xiàng)目經(jīng)費(fèi)資助(編號(hào)：3101005004021)

1安徽醫(yī)科大學(xué)病理學(xué)教研室，合肥 230032

2滁州城市職業(yè)學(xué)院病理教研室，滁州 233100

3安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科，合肥 230022

4合肥市第二人民醫(yī)院病理科，合肥 230011

席 民，男，碩士研究生；

胡向陽，女，副教授， 碩士生導(dǎo)師，責(zé)任作者，E-mail：yfhxy2013@163.com

甲狀腺乳頭狀癌(papillarythyroidcarcinoma,PTC)是甲狀腺惡性腫瘤中最常見的類型，其病理診