常見榮，魏練平，王榮海 ，宋禮華,

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重組人生長(zhǎng)激素對(duì)人胃癌MGC803細(xì)胞生長(zhǎng)的影響

常見榮1，魏練平2，王榮海3，宋禮華1,3

目的 探究重組人生長(zhǎng)激素(rhGH)對(duì)人胃癌MGC803細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。方法 采用Western blot法檢測(cè)MGC803與MKN45兩種胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)激素受體(GHR)蛋白的表達(dá)以及實(shí)時(shí)定量PCR(qRT-PCR)法檢測(cè)二者GHR mRNA的相對(duì)表達(dá)量。采用MTT法檢測(cè)在無(wú)血清同步24 h、3%胎牛血清(FBS)給藥培養(yǎng)基條件下，不同濃度rhGH作用不同時(shí)間對(duì)MGC803細(xì)胞增殖的影響。采用流式細(xì)胞術(shù)及Western blot法測(cè)定不同濃度的rhGH對(duì)MGC803細(xì)胞周期及相關(guān)信號(hào)通路節(jié)點(diǎn)蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果 Western blot與qRT-PCR結(jié)果表明，MGC803細(xì)胞在蛋白以及mRNA水平都被驗(yàn)證為GHR陽(yáng)性表達(dá)的細(xì)胞株，具有發(fā)揮作用的生物學(xué)基礎(chǔ)。MTT結(jié)果表明，在含3%FBS的給藥培養(yǎng)基條件下，不同濃度的rhGH對(duì)MGC803細(xì)胞有促增殖作用，但不同rhGH濃度組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。細(xì)胞周期的結(jié)果表明，與對(duì)照組比較，rhGH給藥組增殖指數(shù)(PI)升高。Western blot結(jié)果顯示，在rhGH作用下，磷酸化酪氨酸蛋白激酶2(p-JAK2)、磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄活化因子3(p-STAT3)、磷酸化絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶(p-AKT)和磷酸化細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(p-ERK)等信號(hào)蛋白表達(dá)上調(diào)。結(jié)論 在3% FBS培養(yǎng)條件下，rhGH促進(jìn)MGC803細(xì)胞增殖，與激活JAK2-STAT3通路、上調(diào)下游p-AKT及p-ERK的表達(dá)有關(guān)。

重組人生長(zhǎng)激素；胃癌；MGC803；生長(zhǎng)激素受體；JAK-STAT3通路

臨床上，嚴(yán)重的蛋白營(yíng)養(yǎng)不良和負(fù)氮平衡是影響腫瘤治療療效和患者生存質(zhì)量的首要制約因素，也是晚期腫瘤患者的主要死亡原因，單純的營(yíng)養(yǎng)支持并不能改善腫瘤患者的惡液質(zhì)狀態(tài)。生長(zhǎng)激素(growth hormone，GH)是由垂體分泌的合成類激素，具有促進(jìn)蛋白質(zhì)合成、糾正負(fù)氮平衡狀態(tài)、調(diào)節(jié)免疫功能等作用，對(duì)于臨床上腫瘤患者惡液質(zhì)的改善具有重要意義。但GH作為一種生長(zhǎng)因子能否用于腫瘤患者的治療一直存在爭(zhēng)議，爭(zhēng)議的焦點(diǎn)在于GH在營(yíng)養(yǎng)支持的同時(shí)是否會(huì)促進(jìn)腫瘤的增殖[1-2]，因此探討GH對(duì)腫瘤增殖的影響具有重要的意義。胃癌是源自胃黏膜上皮的惡性腫瘤，患者往往會(huì)出現(xiàn)負(fù)氮平衡與惡液質(zhì)狀態(tài)[3-4]，嚴(yán)重影響了胃癌患者的生存質(zhì)量，該研究初步探究重組人生長(zhǎng)激素(recombinant human growth hormone，rhGH)體外對(duì)胃癌細(xì)胞株增殖的影響，為rhGH對(duì)腫瘤增殖的影響提供參考。

1 材料與方法

1.1 主要試劑和儀器 MGC803、MKN45人胃癌細(xì)胞株購(gòu)自北京醫(yī)學(xué)科學(xué)院；注射用rhGH由安徽安科生物工程(集團(tuán))股份有限公司提供；TRIzol Reagent(美國(guó)Invitrogen公司)；PrimeScriptTMRT Master Mix(Perfect Real Time)與SYBRTMPremix Ex TaqTMII (Tli RNaseH Plus)試劑盒(日本Takara公司)；GHR、β-actin引物由上海生工公司合成；MTT(美國(guó)Sigma公司)；RPMI-1640改良型培養(yǎng)基、雙抗(青鏈霉素)(美國(guó)Hyclone公司)；胎牛血清(上海生工公司)；細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(上海碧云天生物研究所)；GHR單克隆抗體(英國(guó)Abcam公司)；酪氨酸蛋白激酶2(janus kinase2，JAK2)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄活化因子3(signal transducer and activator of transcription 3，STAT3)、絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶(serine/threonine kinase，AKT)、細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase 1/2，ERK1/2)、磷酸化AKT、磷酸化ERK、磷酸化STAT3、磷酸化JAK2等單克隆抗體(美國(guó)Cell Signaling Technology公司)；β-actin單克隆抗體(北京銳抗生物科技有限公司)；辣根過(guò)氧化酶標(biāo)記的山羊抗兔、山羊抗鼠抗體以及預(yù)染蛋白Marker(美國(guó)Thermo公司)；實(shí)時(shí)定量PCR(qRT-PCR)儀(美國(guó)Applied Biosystems公司)；Emax Plus酶標(biāo)儀、FACS Verse流式細(xì)胞儀(美國(guó)MD公司)；ChemiScope 3600 Pro化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)(上海勤翔公司)。

1.2 方法

1.2.1 Western blot法檢測(cè)GHR的表達(dá) 正常培養(yǎng)MGC803與MKN45兩種細(xì)胞。待細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期，棄去上清液并用預(yù)冷的PBS洗去殘留培養(yǎng)基后，加入含有蛋白酶抑制劑的細(xì)胞裂解液400 μl，冰上放置15 min充分裂解。分別用細(xì)胞刮刀收集后，轉(zhuǎn)移至干凈的離心管中，4 ℃、15 000 r/min離心15 min，取上清液。利用BCA試劑盒定量檢測(cè)蛋白濃度，根據(jù)測(cè)出濃度值加入適量含DTT的上樣緩沖溶液，調(diào)整兩樣品最終蛋白濃度相等，沸水浴8 min。等體積上樣，聚丙烯酰胺凝膠電泳2 h，通過(guò)轉(zhuǎn)膜將膠上蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜上。經(jīng)過(guò)5% BSA封閉、一抗4 ℃孵育過(guò)夜，辣根過(guò)氧化酶標(biāo)記的二抗孵育1.5～2 h，凝膠自動(dòng)成像系統(tǒng)對(duì)于覆蓋ECL發(fā)光液的膜條進(jìn)行掃描，最終獲得GHR以及β-actin的蛋白表達(dá)結(jié)果圖。

1.2.2 qRT-PCR法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)GHR mRNA的表達(dá) 取正常培養(yǎng)的細(xì)胞，控制細(xì)胞數(shù)在一定范圍(5×106～1×107個(gè))，加入1 ml TRIzol試劑提取細(xì)胞內(nèi)總RNA。利用超微量紫外分光光度計(jì)測(cè)得RNA濃度并得到光密度(optical density，OD)值，計(jì)算OD260/OD280，純RNA的OD260/OD280范圍為1.7～2.0。根據(jù)所提取的RNA樣品濃度，利用PrimeScriptTMRT Master Mix(Perfect Real Time)試劑盒，構(gòu)成適當(dāng)?shù)捏w系(10 μl)并逆轉(zhuǎn)錄得到cDNA，逆轉(zhuǎn)錄條件為37 ℃、15 min(反轉(zhuǎn)錄反應(yīng))，85 ℃、5 s(反轉(zhuǎn)錄酶的失活反應(yīng))。逆轉(zhuǎn)錄所得的產(chǎn)物作為qRT-PCR的模板，根據(jù)SYBRTMPremix Ex TaqTMII(Tli RNaseH Plus)試劑盒構(gòu)成總體積為20 μl的反應(yīng)體系，設(shè)置MKN45組以及MGC803組，以β-actin為內(nèi)參，所用引物[5-6]見表1。qRT-PCR反應(yīng)條件為95 ℃、20 s，95 ℃、3 s，60 ℃、30 s，重復(fù)40個(gè)循環(huán)。溶解曲線的條件為95 ℃、15 s，60 ℃、1 min，95 ℃、15 s。根據(jù)最終反應(yīng)所得的CT值，計(jì)算出2-ΔΔCT值，從而得出兩種細(xì)胞GHR mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

表1 qRT-PCR法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)GHR mRNA的表達(dá)所用引物

1.2.3 MTT法測(cè)定細(xì)胞增殖 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MGC803細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為5×107/L，分別接種于3塊96孔板中，每孔100 μl，貼壁生長(zhǎng)。待細(xì)胞貼壁后，傾去培養(yǎng)基，每孔加入200 μl無(wú)血清培養(yǎng)基饑餓處理。24 h后傾去無(wú)血清培養(yǎng)基并分別加入給藥培養(yǎng)基(含3% FBS)配置的終濃度為25、100、400 μg/L的rhGH 180 μl/孔。同時(shí)設(shè)置對(duì)照組，每組設(shè)6個(gè)復(fù)孔。藥物作用24、48、72 h后，分別取出96孔板，每孔加入20 μl MTT，孵育4～6 h后，緩慢吸棄上清液，每孔加150 μl DMSO 并振蕩溶解10 min，酶標(biāo)儀檢測(cè)各孔OD值，波長(zhǎng)為490 nm。相對(duì)增殖率(%)=(實(shí)驗(yàn)組OD值/對(duì)照組OD值)×100%。根據(jù)以上步驟，重復(fù)3次，得出不同藥物濃度、不同時(shí)間對(duì)于MGC803細(xì)胞增殖的影響。

1.2.4 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期 將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MGC803細(xì)胞鋪于60 mm一次性無(wú)菌平皿中，貼壁生長(zhǎng)后棄去上清液，加無(wú)血清培養(yǎng)基饑餓處理24 h。分為對(duì)照組以及給藥組，根據(jù)MTT結(jié)果設(shè)置給藥組rhGH濃度為100 μg/L。分別作用4、8、12、24 h后，0.25%胰酶消化收集細(xì)胞。參考試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行處理，最后上機(jī)檢測(cè)。

根據(jù)以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，得到rhGH作用效果的最佳時(shí)間，再設(shè)置不同rhGH濃度(對(duì)照組、25、100、400 μg/L)作用MGC803細(xì)胞固定時(shí)間后，0.25%胰酶消化，收取細(xì)胞，根據(jù)試劑盒操作處理，上機(jī)檢測(cè)。以上同法重復(fù)3次。采用modifit軟件進(jìn)行細(xì)胞DNA含量分析，得到藥物作用時(shí)間以及濃度對(duì)于MGC803細(xì)胞增殖指數(shù)(PI)的影響，PI(%)=(S+G2/M)/(G0/G1+S+G2/M)×100%。

1.2.5 Western blot法檢測(cè)rhGH作用后細(xì)胞內(nèi)相關(guān)信號(hào)通路節(jié)點(diǎn)蛋白的表達(dá) 取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MGC803細(xì)胞鋪于4個(gè)100 mm一次性培養(yǎng)皿中，待細(xì)胞貼壁后傾去上清液，加無(wú)血清培養(yǎng)基饑餓處理24 h。待無(wú)血清饑餓結(jié)束，每皿加入9 ml含藥培養(yǎng)基(含3% FBS)，rhGH終濃度分別為 0、25、100、400 μg/L。給藥作用半小時(shí)后棄去上清液，裂解細(xì)胞收取蛋白，處理步驟與1.2.1方法相同。檢測(cè)的信號(hào)蛋白有JAK2、STAT3、AKT、ERK、p-JAK2、p-STAT3、p-AKT、p-ERK以及β-actin，利用Quantity One 軟件對(duì)所測(cè)蛋白的灰度值進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

2.1 Western blot法檢測(cè)兩種細(xì)胞GHR的表達(dá) MGC803與MKN45的GHR表達(dá)見圖1，MKN45細(xì)胞GHR表達(dá)呈陰性，而MGC803細(xì)胞GHR則呈陽(yáng)性表達(dá)。

圖1 MKN45與MGC803細(xì)胞GHR的表達(dá)

2.2 qRT-PCR法檢測(cè)兩種細(xì)胞內(nèi)GHR mRNA的表達(dá) MKN45與MGC803細(xì)胞GHR mRNA相對(duì)表達(dá)量結(jié)果見圖2。MGC803細(xì)胞GHR mRNA 與MKN45細(xì)胞比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=24.076，P<0.05)。

圖2 MKN45與MGC803細(xì)胞GHR mRNA相對(duì)表達(dá)量與MKN45比較：*P<0.05

綜合以上兩種方法對(duì)于GHR以及GHR mRNA的檢測(cè)，Western blot結(jié)果顯示MKN45細(xì)胞呈GHR陰性表達(dá)，且qRT-PCR 結(jié)果也顯示其GHR mRNA明顯低于MGC803細(xì)胞，說(shuō)明MGC803是GHR陽(yáng)性表達(dá)的細(xì)胞株。故此后續(xù)實(shí)驗(yàn)主要研究對(duì)象為MGC803細(xì)胞。

2.3 MTT法檢測(cè)rhGH對(duì)MGC803細(xì)胞增殖的影響

2.3.1 rhGH作用時(shí)間對(duì)MGC803細(xì)胞增殖的影響 在3% FBS培養(yǎng)條件下，與對(duì)照組(0.428±0.034、0.945±0.058、1.335±0.069)比較，濃度為100 μg/L的rhGH作用24 h(0.492±0.035)、48 h(1.127±0.069)以及72 h(1.514±0.046)對(duì)MGC803細(xì)胞均有促進(jìn)增殖作用，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.629、5.726、6.074，P﹤0.05)。與同時(shí)間對(duì)照組比較，24 h時(shí)給藥組相對(duì)增殖率為114.9%(t=4.847，P<0.05)，48 h以及72 h給藥組相對(duì)增殖率分別119.2%(t=8.390,P<0.05)以及113.4%(t=6.421，P<0.05)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見圖3、4。

圖3 對(duì)照組與100 μg/L rhGH作用MGC803細(xì)胞不同時(shí)間OD值變化與同時(shí)間對(duì)照組比較：*P<0.05

圖4 100 μg/L rhGH作用MGC803細(xì)胞不同時(shí)間的相對(duì)增殖率與同時(shí)間對(duì)照組比較：*P<0.05

2.3.2 不同濃度rhGH對(duì)MGC803細(xì)胞增殖的影響 在3% FBS培養(yǎng)條件下，rhGH濃度分別為25、100、400 μg/L。不同濃度rhGH分別作用MGC803細(xì)胞24、48、72 h時(shí)均表現(xiàn)出促進(jìn)增殖的作用，給藥組OD值與對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=6.836、13.577、18.273，P<0.05)，但同一時(shí)間各濃度組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見圖5。

2.4 流式細(xì)胞儀檢測(cè)rhGH對(duì)MGC803細(xì)胞周期的影響

表2 rhGH作用MGC803細(xì)胞不同時(shí)間周期變化及增殖指數(shù)

與同時(shí)間對(duì)照組比較：*P<0.05

圖5 不同濃度rhGH對(duì)MGC803細(xì)胞增殖的影響與對(duì)照組比較：*P<0.05

2.4.1 rhGH作用不同時(shí)間對(duì)MGC803細(xì)胞周期的影響 rhGH對(duì)于MGC803細(xì)胞的影響隨著時(shí)間的變化而呈現(xiàn)不同的作用。結(jié)果顯示，rhGH作用MGC803細(xì)胞4 h時(shí)，給藥組與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)?？赏茢啵瑀hGH作用MGC803細(xì)胞4 h可能為最優(yōu)條件，見表2。

2.4.2 不同濃度rhGH作用MGC803細(xì)胞4 h對(duì)細(xì)胞周期的影響 依據(jù)公式可算得PI值，與對(duì)照組比較，給藥組PI有不同程度的增加。對(duì)照組PI為39.83%，給藥組PI依次為45.95%、46.64%、42.83%，說(shuō)明rhGH促使MGC803細(xì)胞由G0/G1期向S期、G2/M期轉(zhuǎn)變，促進(jìn)細(xì)胞增殖，見圖6。

2.5 Western blot法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)相關(guān)信號(hào)通路蛋白表達(dá) 給藥組p-JAK2、p-STAT3、p-AKT、p-ERK的表達(dá)水平均有上調(diào)，其中p-JAK2/JAK2低濃度組與對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，隨著rhGH給藥濃度的增加，給藥組與對(duì)照組灰度比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=13.407，P<0.05)，同時(shí)給藥組p-STAT3/STAT3和p-AKT/AKT與對(duì)照組比較均有不同程度上調(diào)，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=9.050、9.936，P<0.05)，但給藥組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。給藥組p-ERK/ERK與對(duì)照組比較蛋白水平明顯上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=3.727E3，P<0.01)。見圖7。

3 討論

rhGH是否促進(jìn)腫瘤的增殖是介入腫瘤治療的關(guān)鍵因素。從分子機(jī)制看，細(xì)胞膜表面GHR的表達(dá)是GH影響腫瘤細(xì)胞增殖的生物學(xué)基礎(chǔ)[7-10]。最初選取了兩株人胃癌細(xì)胞株作為研究對(duì)象，探討二者GHR的表達(dá)情況。Western blot結(jié)果顯示，MGC803呈GHR陽(yáng)性表達(dá)，而MKN45則呈陰性。qRT-PCR結(jié)果顯示，人胃癌MGC803細(xì)胞株GHR mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯多于人胃癌MKN45細(xì)胞株，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說(shuō)明rhGH確實(shí)存在促進(jìn)MGC803細(xì)胞增殖的生物學(xué)基礎(chǔ)。由于體外rhGH發(fā)揮作用的第一步是與GHR結(jié)合[11]，故此后續(xù)實(shí)驗(yàn)主要研究對(duì)象為MGC803細(xì)胞。

圖6 不同濃度rhGH對(duì)MGC803細(xì)胞周期的影響

圖7 不同濃度rhGH作用MGC803細(xì)胞相關(guān)信號(hào)通路蛋白表達(dá)

A：對(duì)照組；B：rhGH 25 μg/L；C：rhGH 100 μg/L；D：rhGH 400 μg/L；與對(duì)照組比較：*P<0.05，**P<0.01

MTT實(shí)驗(yàn)表明，3% FBS培養(yǎng)條件下(為降低血清生長(zhǎng)因子對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響)，rhGH對(duì)MGC803的增殖有促進(jìn)作用(P<0.05)。進(jìn)一步研究顯示，在無(wú)血清饑餓處理24 h后，rhGH能促進(jìn)MGC803細(xì)胞由G0/G1期向S期、G2/M期轉(zhuǎn)變。Western blot結(jié)果顯示rhGH能不同程度上調(diào)MGC803細(xì)胞p-JAK2、p-STAT3、p-AKT、p-ERK的表達(dá)水平。其中p-AKT與p-ERK是JAK2-STAT3信號(hào)通路的下游信號(hào)蛋白，p-ERK被認(rèn)為可以從細(xì)胞質(zhì)入核，介導(dǎo)諸多基因轉(zhuǎn)錄，從而促進(jìn)細(xì)胞增殖[12]。而AKT是PI3K-AKT-mTOR經(jīng)典信號(hào)通路的重要組成部分，p-AKT的上調(diào)能夠激發(fā)下游蛋白，引發(fā)一系列細(xì)胞增殖以及抑制細(xì)胞凋亡的反應(yīng)[13]。由此可見，本研究中rhGH在低血清水平下，可能通過(guò)與GHR結(jié)合，激活JAK2-STAT3信號(hào)通路，進(jìn)一步上調(diào)p-AKT與p-ERK，從而促進(jìn)GHR陽(yáng)性表達(dá)的MGC803細(xì)胞的增殖與細(xì)胞周期的改變。

實(shí)驗(yàn)設(shè)置3個(gè)rhGH給藥濃度，以生理濃度25 μg/L為低濃度，臨床藥理濃度100 μg/L為中濃度，400 μg/L為高濃度[14]。在MTT實(shí)驗(yàn)及流式細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)中，均沒有表現(xiàn)出濃度依賴性，3種濃度的rhGH對(duì)下游信號(hào)蛋白磷酸化水平的調(diào)節(jié)差異亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與對(duì)照組比較，rhGH能夠促進(jìn)MGC803細(xì)胞株的增殖(P<0.05)，但與生理濃度(25 μg/L)比較，rhGH臨床藥理濃度(100 μg/L)及高濃度400 μg/L未表現(xiàn)出增殖差異。推測(cè)這與細(xì)胞內(nèi)GHR受體的表達(dá)量以及GH飽和有關(guān)，研究[15]顯示，2分子的GHR結(jié)合1分子的GH形成二聚化，是GH發(fā)揮生物學(xué)功能的基礎(chǔ)，而當(dāng)GH濃度超出細(xì)胞內(nèi)GHR所能結(jié)合的范圍，1個(gè)受體分子與1個(gè)GH分子結(jié)合，將阻止受體二聚化，從而不能發(fā)揮信息傳遞的功能。

綜上所述，rhGH在體外對(duì)MGC803細(xì)胞的生長(zhǎng)有促進(jìn)作用。此外，與體外研究相比，rhGH在體內(nèi)對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的影響更加復(fù)雜。rhGH在體內(nèi)不僅可以通過(guò)與腫瘤表面GHR結(jié)合，直接或間接通過(guò)IGF-1影響腫瘤增殖，也可以與肝臟GHR結(jié)合，通過(guò)循環(huán)IGF-1作用于腫瘤細(xì)胞[16]。而rhGH作用下機(jī)體營(yíng)養(yǎng)與免疫的改善對(duì)腫瘤的增殖也會(huì)產(chǎn)生影響。rhGH是否能應(yīng)用于腫瘤患者以及對(duì)MGC803細(xì)胞的體內(nèi)影響受多種因素調(diào)控而可能呈現(xiàn)不同的反應(yīng)，將通過(guò)動(dòng)物模型進(jìn)一步研究。

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Effect of recombinant human growth hormone on the growth of gastric cancer MGC803 cells

Chang Jianrong1, Wei Lianping2,Wang Ronghai3,et al

(1DeptofBiochemistryandMolecularBiology,AnhuiMedicalUniversity,Hefei230032；2SchoolofLifeScience,AnhuiAgriculturalUniversity,Hefei230061;3AnhuiAnkeBiotechnology(Group)Co.,Ltd,Hefei230000)

Objective To explore the effect of recombinant human growth hormone (rhGH) on the growth of human gastric cancer MGC803 cells. Methods Western blot was performed to detect the expressions of growth hormone receptor (GHR) protein of MGC803 and MKN45 cells, and the relative expressions of GHR mRNA of the two kinds of gastric cancer cells were evaluated by qRT-PCR. Under the condition of serum starvation for 24 hours and incubated in culture media with 3% FBS, MTT assay was used to detect the proliferation of MGC803 cells treated with different concentrations of rhGH for different times. Flow cytometry (FCM) was used to detect the effect of rhGH on MGC803 cell cycle. The expressions of related signal pathway proteins were measured by Western blot. Results The results of Western blot and qRT-PCR showed that MGC803 cells were verified as the cell strains of GHR positive expression in the level of protein and mRNA. MTT assay revealed that rhGH could promote the proliferation of MGC803 cells but the difference among different rhGH concentration groups was not statistically significant. FCM analysis showed that rhGH could improve the proliferation index (PI) of MGC803 cells. Western blot suggested that rhGH could upregulate the expressions of p-JAK2, p-STAT3, p-AKT and p-ERK. Conclusion rhGH may activate the JAK/STAT3 signal pathway and thus upregulate the downstream p-AKT and p-ERK levels to promote the prolifetation of MGC803 cells.

rhGH；gastric cancer；MGC803；growth hormone receptor；JAK-STAT3 pathway

時(shí)間：2016-8-10 11:04:48

http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1065.R.20160810.1104.004.html

2016-05-30接收

1安徽醫(yī)科大學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室，合肥 230032

2安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，合肥 230061

3安徽安科生物工程(集團(tuán))股份有限公司，合肥 230000

常見榮，女，碩士研究生；

宋禮華，男，教授，博士生導(dǎo)師，責(zé)任作者，E-mail：Sonlh@ankebio.com

R 735.2；R 341；R 969

A

1000-1492(2016)10-1411-06

10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2016.10.004