崔艷萍*，薛潔好，劉群英，劉艷紅，胡慶蘭

（廣東省清遠(yuǎn)市婦幼保健院，廣東 清遠(yuǎn) 511500）

骨橋蛋白在子宮腺肌病中的表達(dá)及意義

崔艷萍*，薛潔好，劉群英，劉艷紅，胡慶蘭

（廣東省清遠(yuǎn)市婦幼保健院，廣東 清遠(yuǎn) 511500）

目的 應(yīng)用免疫組織化學(xué)S-P法檢測骨橋蛋白（OPN）在子宮腺肌病的腺上皮細(xì)胞胞漿中的表達(dá)，探討OPN在子宮腺肌病中的表達(dá)意義。方法 收集來我院手術(shù)治療的子宮腺肌病患者40例作為觀察組，納入同時期來我院進(jìn)行手術(shù)的子宮肌瘤患者40例作為對照組。比較兩組患者間組織中OPN表達(dá)水平差異。結(jié)果 OPN在腺肌病在位內(nèi)膜分泌期中的高表達(dá)，較在位內(nèi)膜增生期，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。OPN在腺肌病在位內(nèi)膜增生期與分泌期的表達(dá)均分別高于在正常內(nèi)膜增生期與分泌期的表達(dá)，兩組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 子宮腺肌病病灶及在位內(nèi)膜中OPN的表達(dá)上調(diào)，OPN可能參與了子宮腺肌病的發(fā)生與發(fā)展過程。

子宮腺肌病；子宮腺肌病腺上皮細(xì)胞；子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞；骨橋蛋白（OPN）

子宮腺肌病（adenomyosis）是指子宮內(nèi)膜細(xì)胞向肌層良性浸潤并在其中彌漫性生長的一種雌激素依賴性具有惡性生物學(xué)行為的良性疾病。其特征是在子宮肌層內(nèi)出現(xiàn)異位的子宮內(nèi)膜細(xì)胞與腺體并伴有周圍肌層細(xì)胞的肥大和增生，常引起患者出現(xiàn)經(jīng)量增多以及進(jìn)行性加重的痛經(jīng)等臨床表現(xiàn)。有關(guān)子宮腺肌病的真正發(fā)病原因及機制仍不十分清楚。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為可能與屏障瓦解基底內(nèi)膜內(nèi)陷、相關(guān)組織細(xì)胞因子的參與及免疫機制異常等因素有關(guān)。

子宮缺乏黏膜下層和基底膜可能是疾病發(fā)生的基礎(chǔ)，異位內(nèi)膜的黏附、侵襲、血管生成以及其細(xì)胞的無限增殖與惡性腫瘤的生物學(xué)行為相似。骨橋蛋白（OPN）是一種分泌型磷酸化糖蛋白，OPN與多種整合素受體結(jié)合后促進(jìn)細(xì)胞增殖、黏附、侵襲和轉(zhuǎn)移。關(guān)于OPN和子宮腺肌病關(guān)系的研究也越來越多，本研究通過檢測OPN在子宮腺肌病的腺上皮細(xì)胞胞漿中的表達(dá)，探討OPN在子宮腺肌病中的表達(dá)意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2014年1月～2016年4月在我院因子宮腺肌病住院擬手術(shù)治療的患者40例作為研究組，年齡38～51歲，平均年齡（46.20±4.75）歲，并選取子宮肌瘤患者40例作為對照組，年齡39～52歲，平均年齡（45.64±5.17）歲。所有患者無糖尿病、高血壓、腎病等慢性病史，均未接受免疫藥物及甾體類激素等治療，兩組年齡之間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。患者均經(jīng)腹腔鏡及病理學(xué)診斷確診。

1.2 方法

1.2.1 研究標(biāo)本分組及收集

研究組級對照組均40例。研究組包括子宮腺肌病病灶與在位內(nèi)膜各40例，其中在位內(nèi)膜標(biāo)本增生期內(nèi)膜22例和分泌期內(nèi)膜18例；對照組包括正常子宮肌層與正常子宮內(nèi)膜各40例，其中在位內(nèi)膜標(biāo)本增生期內(nèi)膜21例和分泌期內(nèi)膜19例。所有標(biāo)本子宮切除后“Y”字型切開子宮前壁或后壁子宮肌層至子宮腔。研究組標(biāo)本：切取腺肌病病灶（大小1×1×1 cm3）及在位內(nèi)膜（大小1×1×0.5 cm3）；對照組標(biāo)本：距離肌瘤邊緣2 cm以外切取正常子宮肌層（大小1×1× 1 cm3）及子宮內(nèi)膜（大小1×1×0.5 cm3）。見圖1。

圖1 研究標(biāo)本分組圖

1.2.2 石蠟切片制作及實驗方法

將制成的石蠟塊每個標(biāo)本連續(xù)切片3張，每張切片厚度為4 μm。其中1張采用蘇木素伊紅（HE）染色，確定病理診斷，子宮內(nèi)膜組織切片，進(jìn)行增生期或分泌期分期診斷；另1張切片應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法（S-P法）進(jìn)行OPN的檢測。

1.2.3 實驗試劑

兔抗人OPN單克隆抗體（抗體效價1:100），購自福州邁新公司產(chǎn)品（產(chǎn)品編號：sd-148），DAB顯色液試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn)

OPN的陽性表達(dá)定位于內(nèi)膜細(xì)胞的細(xì)胞漿中，為棕黃色顆粒。應(yīng)用Leica QW550系統(tǒng)來進(jìn)行圖像分析，免疫組化結(jié)果均采用陽性單位（positive unit，PU）來進(jìn)行定量表達(dá)反應(yīng)免疫組化陽性程度。在Leica Q550IW圖像分析系統(tǒng)測試待測結(jié)構(gòu)的平均灰度值Gα和背景的平均灰度值Gβ，Gmax=256，為檢測儀器最大灰度值。計算公式：PU=（Gα-Gβ/Gmax）×100。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。OPN陽性表達(dá)PU值用“±s”表示，采用t及F檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 OPN在子宮腺肌病病灶與正常子宮肌層中的表達(dá)

OPN在子宮腺肌病病灶中的高表達(dá)PU=（26.45±8.05），明顯高于正常子宮肌層中的低表達(dá)PU=（12.68±5.69），兩組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 OPN及VEGF在子宮腺肌病病灶與正常子宮肌層中的表達(dá)（±s）

表1 OPN及VEGF在子宮腺肌病病灶與正常子宮肌層中的表達(dá)（±s）

組別nOPN（PU）子宮腺肌病病灶4026.45±8.05正常子宮肌層4012.68±5.69 P＜0.05

2.2 OPN在腺肌病病灶與在位內(nèi)膜增生期、分泌期中的表達(dá)

OPN在腺肌病在位分泌期表達(dá)PU=（25.42±6.35）明顯高于在位內(nèi)膜增生期PU=（19.97±8.67），兩者比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；腺肌病病灶中OPN的陽性表達(dá)與在位內(nèi)膜增生期OPN陽性表達(dá)的PU值比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），而與在位內(nèi)膜分泌期的PU比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表2 OPN在腺肌病病灶及在位內(nèi)膜增生期、分泌期的表達(dá)（±s）

表2 OPN在腺肌病病灶及在位內(nèi)膜增生期、分泌期的表達(dá)（±s）

注：*與**、腺肌病病灶比較，P＜0.05；**與腺肌病病灶比較，P＞0.05

組別nOPN（PU）腺肌病病灶4026.45±8.05在位內(nèi)膜增生期2219.97±8.67*在位內(nèi)膜分泌期1825.42±6.35**

2.3 OPN在正常子宮肌層與正常子宮內(nèi)膜增生期、分泌期中的表達(dá)

OPN在正常子宮肌層、正常子宮內(nèi)膜增生期及分泌期中均有表達(dá)，其表達(dá)強度依次遞增，PU值分別為（12.68±5.69）、（12.81±6.78）和（13.32±3.45），三組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表3。

表3 OPN在正常子宮肌層及正常子宮內(nèi)膜增生期、分泌期的表達(dá)（±s）

表3 OPN在正常子宮肌層及正常子宮內(nèi)膜增生期、分泌期的表達(dá)（±s）

組別nOPN（PU）正常子宮肌層4012.68±5.69正常子宮內(nèi)膜增生期2112.81±6.78正常子宮內(nèi)膜分泌期1913.32±3.45 P＞0.05

2.4 OPN在正常內(nèi)膜與在位內(nèi)膜增生期、分泌期的表達(dá)

OPN在正常內(nèi)膜增生期中陽性表達(dá)的PU值低于腺肌病在位內(nèi)膜增生期的表達(dá)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；而正常內(nèi)膜分泌期中OPN陽性表達(dá)的PU值也低于腺肌病在位內(nèi)膜分泌期中的表達(dá)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表4。

表4 OPN在正常內(nèi)膜與腺肌病在位內(nèi)膜增生期、分泌期的表達(dá)（±s）

表4 OPN在正常內(nèi)膜與腺肌病在位內(nèi)膜增生期、分泌期的表達(dá)（±s）

組別nOPN（PU）P正常內(nèi)膜增生期2112.81±6.78分泌期1913.32±3.45在位內(nèi)膜增生期2219.97±8.67＜0.05分泌期1825.42±6.35＜0.05

3 討 論

子宮腺肌病是一種雌激素依賴性但表現(xiàn)出具有“浸潤、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)”與惡性腫瘤類似的生物學(xué)特征的“良性疾病”。目前發(fā)病率呈現(xiàn)明顯上升趨勢，嚴(yán)重影響女性身心健康。然而，子宮腺肌病的發(fā)病機制尚不清楚，多數(shù)研究者認(rèn)為子宮腺肌病是基底層內(nèi)膜細(xì)胞不斷增生，由于子宮內(nèi)膜黏膜缺乏黏膜下層的屏障，內(nèi)膜細(xì)胞浸潤轉(zhuǎn)移到子宮肌層間質(zhì)種植生長的結(jié)果。

OPN目前已經(jīng)被認(rèn)為是一種新的腫瘤標(biāo)記物，OPN可通過組織細(xì)胞粘附與細(xì)胞表面多種整合素受體（αvβ3、αvβ5、CD4等）結(jié)合，介導(dǎo)參與細(xì)胞的粘附、游走、遷移與增殖。有研究顯示，OPN在乳腺、腸道、子宮及卵巢等腫瘤組織中均呈現(xiàn)高表達(dá)，腫瘤在OPN過度表達(dá)情況下更容易出現(xiàn)侵襲與轉(zhuǎn)移。由于OPN能夠促進(jìn)腫瘤發(fā)生、抑制細(xì)胞凋亡、促進(jìn)腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移和逃逸腫瘤免疫，所以O(shè)PN可能與子宮腺肌病的發(fā)生也有密切的關(guān)系，它可能參與異位內(nèi)膜細(xì)胞黏附、浸潤、血管生成以及細(xì)胞增殖等。

本研究結(jié)果顯示，OPN在子宮腺肌病病灶的表達(dá)明顯高于正常子宮肌層中的表達(dá)，兩者比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），OPN過度表達(dá)促進(jìn)MMP-1、uPA等細(xì)胞因子表達(dá)上調(diào)，導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)降解，子宮內(nèi)膜與肌層間屏障消失，子宮內(nèi)膜細(xì)胞容易進(jìn)入子宮肌層而導(dǎo)致子宮腺肌病的發(fā)生。本研究結(jié)果還顯示，子宮腺肌病在位內(nèi)膜的增生期與分泌期中OPN陽性表達(dá)均高于正常內(nèi)膜的增生期和分泌期，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，在位內(nèi)膜中OPN的強陽性表達(dá)通過上調(diào)ICAM-1、MMP-1、MMP-2及VEGF等細(xì)胞因子，使在位內(nèi)膜細(xì)胞更具有粘附、侵襲及種植的能力。而正常子宮內(nèi)膜中由于OPN表達(dá)量低不足以介導(dǎo)上述與子宮腺肌病發(fā)生相關(guān)的細(xì)胞因子的表達(dá)，從而不導(dǎo)致子宮腺肌病的發(fā)生。本研究結(jié)果同時顯示，OPN在在位內(nèi)膜分泌期的表達(dá)明顯高于在位內(nèi)膜增生期，PU值分別為（25.42±6.35）和（19.97±8.67），兩組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），此結(jié)果提示，分泌期中OPN的強陽性表達(dá)激活MMP、ICAM-1及VEGF等相關(guān)細(xì)胞因子促進(jìn)分泌期中的子宮內(nèi)膜細(xì)胞較增生期的子宮內(nèi)膜細(xì)胞更容易進(jìn)入子宮肌層而導(dǎo)致子宮腺肌病的發(fā)生，此結(jié)果與Wo1ff等的報道相似，由于在孕激素的作用下，分泌期子宮內(nèi)膜細(xì)胞的生物學(xué)特性發(fā)生改變，其侵襲性與遷移性增強，使得分泌期的內(nèi)膜細(xì)胞更容易進(jìn)入子宮肌層而導(dǎo)致子宮腺肌病發(fā)生。

綜上所述，OPN在子宮腺肌病病灶及在位內(nèi)膜中的表達(dá)均上調(diào)，表明OPN參與了子宮腺肌病的發(fā)生與發(fā)展過程，OPN表達(dá)與子宮腺肌病的發(fā)生發(fā)展具有相關(guān)性。

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本文編輯：劉欣悅

R711.71

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