曹森楊，李采霞，王杜娟，溫開(kāi)群，畢 紅

（鹽城市婦幼保健院，江蘇 鹽城 224002）

卵母細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間對(duì)單精子胞漿內(nèi)注射胚胎質(zhì)量及妊娠結(jié)局的影響分析

曹森楊，李采霞，王杜娟，溫開(kāi)群，畢 紅

（鹽城市婦幼保健院，江蘇 鹽城 224002）

目的 分析探討卵母細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間對(duì)單精子胞漿內(nèi)注射胚胎質(zhì)量及妊娠結(jié)局的影響，探尋最佳單精子胞漿內(nèi)注射時(shí)機(jī)。方法 選取2012年1月～2015年12月我院收治的接受單精子胞漿內(nèi)注射治療的患者63例為研究對(duì)象，根據(jù)取卵結(jié)束到開(kāi)始進(jìn)行單精子胞漿內(nèi)注射將患者分為兩組，Ⅰ組30例為2～3 h內(nèi)注射，Ⅱ組33例為4～5 h內(nèi)注射，對(duì)比觀察兩組胚胎質(zhì)量及妊娠結(jié)局。結(jié)果 Ⅱ組患者卵母細(xì)胞核成熟率90.4%、胚胎植入率24.7%、妊娠率42.4%均顯著高于Ⅰ組卵母細(xì)胞核成熟率80.7%%、胚胎植入率12.1%、妊娠率23.3%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)4～5 h然后進(jìn)行單精子胞漿內(nèi)注射治療，可獲得理想的胚胎質(zhì)量與臨床結(jié)局。

卵母細(xì)胞；單精子胞漿內(nèi)注射；培養(yǎng)時(shí)間；胚胎質(zhì)量；妊娠結(jié)局

單精子胞漿內(nèi)注射被廣泛地應(yīng)用到輔助生殖領(lǐng)域中，是男性不育的一種重要方法。當(dāng)獲得卵母細(xì)胞后何時(shí)進(jìn)行單精子胞漿內(nèi)注射并無(wú)統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)[1]，基于此，本研究分析探討了卵母細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間對(duì)單精子胞漿內(nèi)注射胚胎質(zhì)量及妊娠結(jié)局的影響，探尋最佳單精子胞漿內(nèi)注射時(shí)機(jī)?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012年1月～2015年12月我院收治的接受單精子胞漿內(nèi)注射治療的患者63例為研究對(duì)象，納入標(biāo)準(zhǔn)：?jiǎn)渭円蚰蟹揭蛩貙?shí)施單精子胞漿內(nèi)注射，年齡均在35歲以下，基礎(chǔ)內(nèi)分泌無(wú)異常，根據(jù)取卵結(jié)束到開(kāi)始進(jìn)行單精子胞漿內(nèi)注射將患者分為兩組，Ⅰ組為2～2 h內(nèi)注射（30例），Ⅱ組為4～5 h內(nèi)注射（33例）。Ⅰ組平均年齡（30.5±3.3）歲，平均獲卵數(shù)為（9.5±3.8）個(gè)，平均移植胚胎數(shù)（2.2±0.5）個(gè)；Ⅱ組平均年齡（30.3±3.8）歲，平均獲卵數(shù)為（9.5±4.2）個(gè)，平均移植胚胎數(shù)（2.2±0.4）個(gè)；兩組患者年齡、平均獲卵數(shù)、移植胚胎數(shù)，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 超促排卵

使用達(dá)必佳（促性腺激素釋放激素的類似物）進(jìn)行垂體降調(diào)節(jié)，實(shí)施果納芬（注射用重組人促卵泡激素）促排卵，并根據(jù)患者情況給予hMG（人絕經(jīng)期促性腺激素），采用B超檢測(cè)患者情況結(jié)合血清E2水平對(duì)藥物的用量進(jìn)行調(diào)節(jié)，在目標(biāo)卵泡直徑達(dá)到18～20 mm時(shí)給予5000～10000 IU hCG（人絨毛膜促性腺激素）肌肉注射，于34～36 h后取卵（取卵當(dāng)天視為0 d）。將獲得的卵冠丘復(fù)合體移植到G-IVF（受精）培養(yǎng)基進(jìn)行體外培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為2～5 h。

1.2.2 單精子胞漿內(nèi)注射

取卵后2 h～5 h將冠丘復(fù)合體置于80 IU/mL透明質(zhì)酸酶清洗，除去顆粒細(xì)胞，然后將卵母細(xì)胞轉(zhuǎn)移到新鮮G-MOPS（操作培養(yǎng)基）微滴中，然后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法[2]進(jìn)行單精子胞漿內(nèi)注射，完成單精子胞漿內(nèi)注射后講卵母細(xì)胞轉(zhuǎn)移到G1（卵裂）培養(yǎng)基中，培養(yǎng)到第3 d。

1.2.3 胚胎培養(yǎng)

胚胎體外培養(yǎng)采用G5系列，第0 d脫顆粒、單精子胞漿內(nèi)注射采用G-MOPS培養(yǎng)基，0 d胚胎培養(yǎng)采用G-IVF培養(yǎng)基，1～3 d胚胎培養(yǎng)采用G1培養(yǎng)基，胚胎移植采用G1培養(yǎng)基。培養(yǎng)溫度為37℃，6%CO2與5%O2。各種培養(yǎng)基中均添加10%人血清替代蛋白，覆蓋石蠟油，置于培養(yǎng)箱提前平衡過(guò)夜。

1.2.4 胚胎評(píng)估、移植及妊娠確認(rèn)

在受精后16～18 h（第1 d），按照Scott原核評(píng)分對(duì)卵母細(xì)胞受精情況進(jìn)行評(píng)估，此次研究中的所有胚胎均來(lái)源于正常受精卵。于第3 d按照Veeck胚胎評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)評(píng)估胚胎卵裂球數(shù)、形態(tài)與碎片化比例，達(dá)到胚胎卵裂球數(shù)6個(gè)及以上，形態(tài)基本對(duì)稱具有折光性；胚胎碎片比例在10%以下則為優(yōu)質(zhì)胚胎。在第3 d，將2～3枚胚胎連同G1培養(yǎng)基10～15 μL一起移植到導(dǎo)管中，然后移入患者子宮。所有患者從取卵當(dāng)天開(kāi)始給予黃體酮支持，于移植后第14 d進(jìn)行血hCG檢查，對(duì)陽(yáng)性結(jié)果者于移植后28 d行B超監(jiān)測(cè)孕囊，以確定是否臨床妊娠。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

運(yùn)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以“±s”表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以百分?jǐn)?shù)（%）表示，采用x2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)時(shí)間對(duì)單精子胞漿內(nèi)注射胚胎質(zhì)量的影響

Ⅰ組、Ⅱ組患者卵母細(xì)胞核成熟率分別為80.7%，90.4%，Ⅱ組患者卵母細(xì)胞核成熟率顯著高于Ⅰ組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=10.86，P＜0.05）；兩組間受精率、卵裂率與優(yōu)質(zhì)胚胎率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表1。

表1 卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)時(shí)間對(duì)單精子胞漿內(nèi)注射胚胎質(zhì)量的影響 [n（%）]

2.2 三組患者胚胎植入率與妊娠結(jié)局比較

Ⅱ組胚胎植入率顯著高于Ⅰ組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=4.92，P＜0.05）；Ⅱ組妊娠率顯著高于Ⅰ組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=4.78，P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 三組患者胚胎植入率與妊娠結(jié)局比較 [n（%）]

3 討 論

人卵母細(xì)胞經(jīng)核成熟、胞質(zhì)成熟才能夠完成受精與胚胎發(fā)育。臨床上輔助生殖治療促排卵藥物使用目的是改變卵泡幕集模式，取卵泡后將獲得不同程度的卵母細(xì)胞，其細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)成熟度可能存在差異[3]。當(dāng)前，針對(duì)卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)時(shí)間對(duì)單精子胞漿內(nèi)注射治療結(jié)局的影響有不同的報(bào)道，相關(guān)研究指出，通過(guò)卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)可對(duì)單精子胞漿內(nèi)注射受精率、胚胎質(zhì)量、妊娠結(jié)局起到改善作用[4]，也有研究指出卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)時(shí)間并不會(huì)影響胚胎質(zhì)量與妊娠結(jié)局[5]。

本次研究結(jié)果顯示，Ⅰ組、Ⅱ組患者卵母細(xì)胞核成熟率分別為80.7%，90.4%，Ⅱ組患者卵母細(xì)胞核成熟率顯著高于Ⅰ組，由于卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)細(xì)胞質(zhì)遲于細(xì)胞核成熟，這可能是造成Ⅰ組患者植入率、妊娠率下降的原因。兩組間受精率、卵裂率與優(yōu)質(zhì)胚胎率比較無(wú)顯著性差異，而Ⅰ組患者植入率、妊娠率顯著更低，這預(yù)示著卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)時(shí)間對(duì)單精子胞漿內(nèi)注射治療的影響，并非在胚胎發(fā)育早期階段產(chǎn)生顯著作用，而是在囊胚形成、胚胎植入（后期階段）發(fā)揮顯著的作用[5]。結(jié)果提示，卵母細(xì)胞需要體外培養(yǎng)4 h然后進(jìn)行單精子胞漿內(nèi)注射治療，可獲得理想的胚胎質(zhì)量與臨床結(jié)局，且4～5 h可維持較為理想的水平。

[1] 顧亦凡,陸長(zhǎng)富,龔 斐,等.卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)時(shí)間對(duì)單精子胞漿內(nèi)注射臨床結(jié)局的影響[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志,2010,20(22): 3364-3367.

[2] 乜照燕,吳海峰,張 娜,等.卵母細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間對(duì)單精子胞漿內(nèi)注射胚胎質(zhì)量及妊娠結(jié)局影響[J].中國(guó)男科學(xué)雜志,2015(1):28-31.

[3] 粱 琳,陳秀娟.觀察體外受精中卵泡液的抗氧化能力及其對(duì)卵母細(xì)胞質(zhì)量和胚胎發(fā)育的影響[J].生殖醫(yī)學(xué)雜志,2015,24(7):532-537.

[4] 張 巍,周 瑋,趙軍招,等.自然周期未成熟卵體外培養(yǎng)卵母細(xì)胞成熟率與臨床結(jié)局的關(guān)系[J].浙江醫(yī)學(xué),2012(17):1420-1423.

[5] 鹿 群,陳 曦,沈 浣,等.卵母細(xì)胞激活技術(shù)在卵細(xì)胞質(zhì)內(nèi)單精子注射受精失敗或低下患者中的應(yīng)用[J].中國(guó)婦產(chǎn)科臨床雜志,2014(2):109-113.

本文編輯：魯守琴

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ISSN.2095-8803.2016.13.084.02