錢文慧 曹燕麗 吳晶晶 侯憶璠 蘇 華 巖林蘋

江蘇省南京軍區(qū)南京總醫(yī)院制劑科，江蘇南京210002

HPLC法測定地丙醇搽劑中醋酸地塞米松和樟腦的含量

錢文慧 曹燕麗 吳晶晶 侯憶璠 蘇 華 巖林蘋▲

江蘇省南京軍區(qū)南京總醫(yī)院制劑科，江蘇南京210002

目的建立同時測定地丙醇搽劑中醋酸地塞米松和樟腦含量的分析方法。方法采用高效液相色譜法同時測定醋酸地塞米松和樟腦的含量，以Lichrospher C18為色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），乙腈-水（60∶40）為流動相，檢測波長為270 nm，柱溫為25℃，流速：1.0 mL/min。結果醋酸地塞米松和樟腦檢測濃度分別在0.007 74～0.015 49 mg/mL（r2=0.9999）和0.487 28～1.949 13 mg/mL（r2=0.9999）范圍內與峰面積呈良好的線性關系，平均加樣回收率分別為100.28%、99.72%，RSD為0.58%、0.56%。地丙醇搽劑中醋酸地塞米松平均含量為0.29 mg/mL，樟腦平均含量為28.84 mg/mL。結論本法操作簡單，準確可靠，適用于地丙醇搽劑的質量控制。

高效液相色譜法曰醋酸地塞米松曰樟腦曰地丙醇搽劑

地丙醇搽劑為南京軍區(qū)南京總醫(yī)院（以下簡稱“我院”）臨床廣泛使用的外用制劑，具有消炎抗敏、止癢止痛的療效，臨床上主要用于慢性濕疹、神經(jīng)性皮炎、皮膚瘙癢癥的治療，療效顯著。地丙醇搽劑處方中的主要成分為醋酸地塞米松和樟腦，其中醋酸地塞米松能降低毛細血管的通透性，減輕水腫，從而抑制炎性反應的發(fā)生和發(fā)展［1-2］；樟腦則具有殺蟲止癢、消腫止痛的功效［3］，兩者是地丙醇搽劑發(fā)揮療效的主要有效成分。原質量標準的含量測定項下僅要求采用紫外分光光度法測定醋酸地塞米松的含量，方法處理費時，且未要求定量檢測揮發(fā)性成分樟腦的含量。為了全面控制制劑的質量，筆者參考相關文獻［3-8］，建立了采用同一波長同時定量測定地丙醇搽劑中醋酸地塞米松和樟腦的含量，該方法操作簡單、結果可靠，為進一步保障該制劑的質量提供了依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agi1ent 1100 Series高效液相色譜儀，VWD檢測器；AE240電子分析天平（德國梅特勒-托利多儀器有限公司），KQ-250DB數(shù)控超聲波清洗器（江蘇昆山超聲儀器有限公司）；FA1604S電子天平（上海天平儀器廠）。

1.2 試藥

醋酸地塞米松對照品（中國食品藥品檢定研究院提供，批號100122-201206，純度100%）；樟腦對照品（中國食品藥品檢定研究院提供，批號110747-201409，純度98.7%）；色譜醇甲醇（美國TEDIA公司）；地丙醇搽劑（規(guī)格：每瓶裝60 mL，我院制劑科自制，批號：140307），其余所用試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 檢測波長的選擇

本研究用紫外分光光度計分別對醋酸地塞米松和樟腦的對照品溶液進行全波長掃描，發(fā)現(xiàn)醋酸地塞米松和樟腦的的最大吸收波長分別為239、290 nm，本應選擇兩曲線的交叉點285 nm為測定波長，但因該制劑中醋酸地塞米松和樟腦的比例相差很大，樟腦的濃度是醋酸地塞米松的10倍，因此測定波長選擇了醋酸地塞米松吸收值較大的270 nm作為檢測波長，在該檢測波長下兩組分相互無干擾，且吸收值比較合適，因此選擇270 nm作為檢測波長，具體吸收圖譜見圖1。

圖1 醋酸地塞米松和樟腦的紫外吸收光譜圖

2.2 色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗

按照高效液相色譜法（《中國藥典》2015年版一部附錄ⅥD）測定［4］。采用Lichrospher C18柱（4.6 mm× 250 mm，5 μm）色譜柱，以乙腈-水（60∶40）為流動相，檢測波長270 nm，流速1.0 mL/min，柱溫25℃，進樣量為20 μL，理論塔板數(shù)按醋酸地塞米松和樟腦峰計算不低于2000。

2.3 對照品溶液的制備

分別精密稱取醋酸地塞米松和樟腦對照品適量，置于25、50 mL量瓶中，加流動相系統(tǒng)稀釋至刻度，搖勻，配制成分別含醋酸地塞米松4.9376 mg/mL和樟腦0.1936 mg/mL的對照品儲備液。分別精密吸取醋酸地塞米松對照品儲備液2 mL和樟腦對照品儲備液0.6 mL置于10 mL容量瓶中，加流動相稀釋至容量瓶刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.4 供試品溶液的制備

精密吸取地丙醇搽劑0.4 mL于10 mL量瓶中，加流動相至刻度，過濾，除去初濾液，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.5 專屬性試驗

按處方比例和供試品制備工藝不加醋酸地塞米松和樟腦，制成陰性對照，按照“2.3”項下方法制成陰性對照溶液。精密吸取如上所述的對照品溶液、供試品溶液與陰性對照溶液各20 μL，按上述方法進行測定并記錄色譜圖。試驗結果顯示，在供試品色譜中，與對照品色譜相應的保留時間處，有同一色譜峰，而陰性對照溶液在相應保留時間處則無色譜峰出現(xiàn)，表明其對樣品測定無干擾，具體圖譜見圖2。

圖2 地丙醇搽劑的HPLC圖

2.6線性關系考察

分別精密吸取醋酸地塞米松儲備液1.0、1.6、2.0、3.0、4.0 mL和樟腦儲備液0.4、0.5、0.6、0.7、0.8 mL至10 mL的容量瓶中，采用流動相稀釋至刻度，定容。按照上述色譜條件和方法進樣20 μL，以對照品濃度為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y），進行線性回歸，分別得到醋酸地塞米松和樟腦的回歸方程：Y= 15 403X-3.18，r2=0.9999（n=5）和Y=171.6X-2.7954，r2=0.9999（n=5）。結果表明，醋酸地塞米松的濃度在0.007 74～0.015 49 mg/mL之間，樟腦的濃度在0.487 28～1.949 13 mg/mL之間，與峰面積呈良好的線性關系，方法可行。

2.7 精密度試驗

分別取“2.2”項下的醋酸地塞米松和樟腦對照品溶液，按上述色譜條件和方法連續(xù)進樣5次，進樣量為20 μL，結果得醋酸地塞米松峰面積RSD為0.58%，樟腦峰面積RSD為0.56%，表明該方法精密度良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗

取同一批號（批號：140307）的樣品1份，按照“2.3”項下供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，在常溫下分別于0、1、2、4、8 h進樣20 μL，記錄醋酸地塞米松和樟腦的色譜圖并計算峰面積，RSD分別為0.80%、0.99%，表明樣品溶液的穩(wěn)定性良好。

2.9 重復性試驗

取同一批號（批號：140307）的樣品5份，按照“2.3”項下供試品溶液的制備方法進行制備，按上述的色譜條件連續(xù)進樣5次，進樣量為20 μL，結果得醋酸地塞米松和樟腦峰面積的RSD分別為0.98%、1.00%，表明方法重復性好。

2.10 加樣回收率試驗

精密吸取已知含量的樣品0.2 mL（批號：140307），共9份，分別置于10 mL量瓶中，精密加入低、中、高濃度的醋酸地塞米松儲備液0.18、0.3、0.42 mL和樟腦儲備液0.6、1、1.4 mL，按照“2.4.3”項下樣品方法制備。精密吸取上述試液各20 μL注入色譜儀，測定含量，計算回收率。醋酸地塞米松和樟腦的平均回收率分別為100.28%、99.72%，RSD分別為1.04%和0.90%。結果見表1～2。

表1 醋酸地塞米松加樣回收率試驗結果（n=9）

表2 樟腦加樣回收率試驗結果（n=9）

2.11 樣品含量測定

取三批地丙醇搽劑（批號：140103、140307、140819），按照“2.4.3”項下方法制備供試品溶液，依法測定，結果見表3。

表3 醋酸地塞米松和樟腦含量測定結果（n=3）

綜合3批樣品測定結果，本品含醋酸地塞米松為標示量的90.0%～110.0%，因樟腦為揮發(fā)性成分，所以確定本品含樟腦為標示量的85.0%～110.0%。

3 討論

3.1 流動相的選擇

參照《中國藥典》2015版二部中關于醋酸地塞米松和樟腦的含量測定方法及部分參考文獻［5，9-12］，對流動相進行了選擇試用：發(fā)現(xiàn)甲醇-水（60∶40）出峰時間太慢，40 min內樟腦都未出峰，且該流動相下醋酸地塞米松的樣品峰形不太好；而乙腈-水（70∶30）出峰時間又稍快，且樣品峰分離度不好；最終采用乙腈-水（60∶40）為流動相，兩樣品色譜峰出峰時間合適，分離度較好，故選擇其為最佳流動相。

3.2 稀釋溶劑的選擇

文獻報道［5，13-16］，醋酸地塞米松和樟腦都為非極性物質，易溶于甲醇或無水乙醇等溶劑。筆者經(jīng)過比較和實驗，發(fā)現(xiàn)乙腈-水（60∶40）流動相系統(tǒng)作為稀釋溶劑對醋酸地塞米松和樟腦的溶解性都較好，同時也能避免樣品出現(xiàn)溶劑峰。

3.3 質量標準的制訂

原質量標準中僅測定地丙醇搽劑中醋酸地塞米松的含量，對制劑中另一揮發(fā)性成分樟腦的含量并未檢測，因此為了全面控制制劑的質量，需要同時測定制劑中醋酸地塞米松和樟腦的含量。筆者檢索了相關文獻［17-20］，關于采用同一波長同時測定兩個成分的相關報道較少，因此為了進一步提高醫(yī)院制劑的質量以及確保臨床用藥的安全，本文根據(jù)地丙醇搽劑中兩個主藥的成分性質以及含量的多少，建立了采用同一波長同時測定制劑中醋酸地塞米松和樟腦的含量。最后結合實際生產(chǎn)情況，綜合多批樣品測定結果，確定本品含醋酸地塞米松為標示量的90.0%～110.0%；而樟腦為揮發(fā)性成分，且之前只對樟腦僅進行定性鑒別，未進行定量控制，因此確定本品含樟腦為標示量的85.0%～110.0%。

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Determination of dexamethasone acetate and camphor in Dibingchun Liniment by HPLC

QIAN WenhuiCAO YanliWu JingjingHou YifanSU HuaYAN Linping▲
Department of Preparation Division，Nanjing Genera1 Hospita1 of Nanjing Mi1itary Command，PLA，Jiangsu Province，Nanjing210002，China

Objective To estab1ish the method for the determination of dexamethasone acetate and camphor in Dibingchun Liniment.Methods The HPLC method was used to determine their contents and the Lichrospher C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）co1umn was used，the detection wave1ength was set at 270 nm and the co1umn temperature was maintained at 25℃.The mobi1e phase system was acetonitri1e-water（60∶40）and the f1ow rate was 1.0 mL/min.Results The 1iner range of dexamethasone acetate and camphor were 0.007 74-0.015 49 mg/mL（r2=0.9999）and 0.487 28-1.949 13 mg/mL（r2=0.9999）respective1y and the average recovery was 100.28%and 99.36%.The average contents of dexamethasone acetate and camphor for determination in Dibingchun Liniment were 0.29，28.84 mg/mL.Conclusion This method is simp1e，practica1 and accurate，the resu1t can be used to contro1 the qua1ity of Dibingchun Liniment.

HPLC；Dexamethasone acetate；Camphor；Dibingchun Liniment

R914.1

A

1674-4721（2016）07（c）-0142-04

2016-04-13本文編輯：趙魯楓）

全軍醫(yī)療機構制劑標準提高科研專項課題重點項目（14ZJZ08）

▲通訊作者