于 婷 曲守方

中國食品藥品檢定研究院體外診斷試劑一室衛(wèi)生部生物技術產(chǎn)品檢定方法及其標準化重點實驗室，北京100050

2015年醫(yī)療器械檢測機構促甲狀腺素定量檢測能力比對實驗分析報告

于 婷 曲守方

中國食品藥品檢定研究院體外診斷試劑一室衛(wèi)生部生物技術產(chǎn)品檢定方法及其標準化重點實驗室，北京100050

目的了解我國醫(yī)療器械檢驗機構檢測能力，以促進檢測水平的整體提高。方法中國食品藥品檢定研究院在2015年組織全國醫(yī)療器械檢驗機構促甲狀腺素定量檢測能力比對實驗，統(tǒng)一向各參加檢測機構提供比對試驗樣本和促甲狀腺素酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒，通過比較檢測結果是否落在（指定值±3SD）范圍內(nèi)進行結果判定。結果16家（94.1%）檢測結果滿意，1家檢測機構2個樣本檢測結果未在范圍內(nèi)。結論大部分檢測機構比對實驗數(shù)據(jù)準確、可靠，個別檢測機構在質(zhì)量體系管理中存在漏洞，影響了檢驗質(zhì)量。

促甲狀腺素；酶聯(lián)免疫吸附測定；醫(yī)療器械；檢測能力

為了解我國食品藥品監(jiān)督管理總局系統(tǒng)內(nèi)的醫(yī)療器械實驗室檢驗檢測能力和質(zhì)量保證水平，促進檢驗檢測結果的準確性和可靠性，中國食品藥品檢定研究院（以下簡稱“中檢院”）在2015年組織全國多家醫(yī)療器械檢驗機構開展體外診斷試劑檢測能力比對，檢測項目為促甲狀腺素（TSH）定量分析，全國共有17家實驗室參加這次比對實驗。本次比對實驗工作從2015年初開始，由中檢院醫(yī)療器械檢定所負責組織實施。為確保比對實驗工作的科學、規(guī)范、有效，特制訂了比對實驗工作程序，主要包括：方案制定、樣品制備、樣品穩(wěn)定性和均一性研究、統(tǒng)一發(fā)放樣品和檢測用試劑盒、各檢測機構進行樣品檢驗、數(shù)據(jù)收集整理及結果分析、中期報告、數(shù)據(jù)確認、總結報告、上報國家局。其中在方案確定和中期報告階段，均需要專家組確認。現(xiàn)將此次比對情況做一簡介。

1 資料與方法

1.1 TSH背景介紹

TSH是由腦垂體前葉分泌的一種糖類蛋白激素，由α和β亞基組成。TSH的α亞基與卵泡刺激素（FSH）、人絨膜促性腺激素（HCG）、促黃體素（LH）的α亞基基本相同，而β亞基具有特異性。TSH主要功能是促進甲狀腺組織生長發(fā)育并能提高其功能。TSH可以誘導甲狀腺素（T4）和三碘甲腺原氨酸（T3）的合成與釋放。血清TSH濃度是研究下丘腦-垂體-甲狀腺軸功能和診斷甲狀腺功能的重要指標之一［1-5］，尤其對亞臨床甲亢和甲減的診斷具有重要意義，并有助于評價甲狀腺疾病的治療效果和判斷預后［6-10］。

影響TSH檢測的因素主要有樣本狀態(tài)、檢測方法、溯源性、交叉反應、抗原抗體的特性（純度、效價等）、樣本情況等，我們?yōu)榱双@得良好的比對效果，對檢測方法、試劑及批次、檢測儀器等方面都進行了統(tǒng)一規(guī)定，盡量保證在同一條件下開展比對實驗，從而可以充分體現(xiàn)不同機構的操作水平以及對定量試劑盒檢測的理解。

1.2 檢測方法

TSH定量檢測試劑盒的檢測原理多為抗原抗體間的免疫學反應，采用雙抗體夾心法進行檢測。國內(nèi)TSH試劑生產(chǎn)企業(yè)有49家，主要分布于北京、天津、山東、河南，其余散在分布于江蘇、福建、廣東；進口代理公司有15家，主要位于上海（14家）。目前在我國食品藥品監(jiān)督管理總局取得醫(yī)療器械注冊證的國產(chǎn)和進口TSH檢測試劑盒有六十余種，包括化學發(fā)光法、酶聯(lián)免疫法、膠體金、時間分辨免疫熒光法、非均相免疫法等檢測試劑盒，其中化學發(fā)光法試劑盒占比達68%，其次為酶聯(lián)免疫法試劑盒占比為16%。除膠體金無需檢測儀器外，其他不同檢測方法相應的檢測儀器不同，如化學發(fā)光儀、酶標儀、時間分辨免疫分析儀等等，所以顯而易見存在以下問題：①抗原抗體等原材料的選擇方面存在差異；②檢測技術本身特點，如化學發(fā)光法、時間分辨免疫熒光法試劑盒線性范圍寬、靈敏度高，而酶標儀線性范圍窄等；③樣品的基質(zhì)效應影響，使得測定結果的標準化存在一定困難。那么在此情況下，不指定方法和試劑，做出的結果是否具有可比性。我們采用9家試劑盒（3家進口和6家國產(chǎn)試劑）進行了預實驗，結果也驗證了同一樣本在不同檢測平臺上的結果差異較大，變異系數(shù)最大達到78%，最小也在9%左右，完全不具備可比性（數(shù)據(jù)略）。所以這次比對實驗中，檢測方法和檢測試劑是必須要考慮的問題之一。

1.3 檢測儀器

比對實驗中通過檢測結果，一定程度上可以反映參加比對實驗的檢測機構實驗室環(huán)境、人員實驗操作水平的熟練程度、儀器性能狀態(tài)以及數(shù)據(jù)處理能力。選擇進口儀器，或者國產(chǎn)化學發(fā)光或時間分辨免疫熒光分析試劑，會存在一定困難。表現(xiàn)在：一方面這些儀器基本上都是專機專用，不是所有參加實驗室都配備，絕大部分勢必要在實驗室之外的場地進行此次比對實驗；另一方面若采用全自動儀器，除手工上樣和設置程序外，完全無其他手工操作步驟，這也就失去了組織比對實驗的初衷。而酶標儀因其幾乎是各醫(yī)療器械檢測機構的常規(guī)配備儀器，而具有一定的優(yōu)勢。絕大部分酶免檢測試劑盒對于酶標儀的品牌無要求，僅需各酶標儀具有基本的濾光片（如405、450、630 nm等）即可完成試驗檢測，所以選擇手工操作酶免試劑盒，比對實驗基本都可以在各檢測機構內(nèi)部完成，完全可以達到這次比對實驗的目的。因此最終確定：由中檢院統(tǒng)一提供同一廠家同一批次的國產(chǎn)手工操作的酶聯(lián)免疫法試劑盒，保證比對實驗的前提條件的一致性，以達到真正考察各參加比對實驗單位檢測能力。綜合檢測方法和檢測儀器的分析，最終確定采用TSH酶聯(lián)免疫法試劑盒作為本次比對實驗用試劑盒。

1.4 樣本

參考品（25份/套），1～10號樣本為不同濃度的TSH緩沖溶液，11～22號樣本為不同濃度的TSH臨床血清樣本，23～25號樣本為分別含HCG、LH、FSH的特異性樣本緩沖溶液。測試樣品的均勻性和穩(wěn)定性（包括2～8℃放置7 d及室溫放置3 d），均進行了實驗驗證，結果均滿足要求。

1.5 檢測

要求各檢測機構必須嚴格按試劑盒具體操作步驟進行測定。

2 結果

2.1 原始材料匯總

仔細復核各實驗室遞交的電子版與紙質(zhì)版數(shù)據(jù)，對各信息進行確認后，再統(tǒng)一進行分析。

根據(jù)作業(yè)指導書，上報數(shù)據(jù)應為各樣本單孔測定的結果，但是有部分實驗室仍然采用雙孔數(shù)據(jù)均值，所以在對這些數(shù)據(jù)分析前，與各實驗室溝通，由各實驗室選擇并確定上報的單孔數(shù)據(jù)，從而保證各檢測機構比對實驗結果在同一水平上進行分析。

2.2 實驗結果有效性的分析

實驗有效性的監(jiān)測也是本次TSH檢測比對試驗中需要檢測人員考慮的問題。使用試劑盒檢測時要按照試劑盒要求進行校準品1#、校準品7#以及線性回歸方程R值的檢測，只有滿足以下條件，方可認為結果有效：①在減去空白值后，校準品1#平均OD值應小于0.050。②在減去空白值后，校準品7#平均OD值應大于1.500。③由標準曲線求得趨勢線線性回歸方程和對應的R值，其應大于0.98。如不能同時滿足上述條件，則此酶標板的試驗結果無效，全部試驗需重新進行。本次試驗中全部實驗室在進行數(shù)據(jù)處理前，都進行了結果有效性的檢測，且都通過，表明實驗有效。

2.3 數(shù)據(jù)處理方式分析

試劑盒說明書中，對于數(shù)據(jù)處理是：由標準曲線求得趨勢線線性回歸方程，并未明確規(guī)定標準曲線擬合方式。所以大部分檢測所采用的處理方法為直線擬合，少數(shù)為四參數(shù)擬合；即便均采用直線擬合方法，X、Y軸代表不一致，有以OD值為X軸，有以濃度值為X軸；在雙波長測定中，存在扣或不扣空白等等，以上不同的數(shù)據(jù)處理方式，將導致結果存在一些差異。但最為重要的是當采用直線擬合方法將出現(xiàn)低濃度樣本測定濃度不符合實際的情況，以表1中的數(shù)據(jù)為例：

表1 某一標準曲線數(shù)據(jù)

對以上標準曲線數(shù)據(jù)，分別采用兩種線性擬合方式進行分析，并將該實驗中高、中以及2個低濃度樣本的OD值代入相應的方程計算得到對應的濃度值，以這兩種方法得到的兩個濃度值之比作為指標分析，來比較計算值之間的差異。結果見表2。

表2 兩種不同擬合方法計算結果表

由表2可以看出，高、中濃度樣本兩個擬合方法得到的比值之比均在1左右，偏差并不大，而對應的低濃度樣本，比值則達到10以上，尤其是4號樣本，達到了65。根據(jù)表1試劑盒標準曲線的理論濃度和相應的OD值數(shù)據(jù)，可以看到當OD值為0.107或0.103時，理論上濃度至少應大于0.5 μU/mL，但是采用直線擬合時，僅僅為0.05 μU/mL，不符合實際情況，所以直線擬合方式并不適合分析低濃度樣本。因此我們統(tǒng)一采用試劑盒生產(chǎn)企業(yè)推薦方法，對各實驗室上報的全部原始數(shù)據(jù)均采用點對點擬合方法，重新計算后進行匯總分析。數(shù)據(jù)見表3。

表3 各檢測機構TSH檢測比對試驗數(shù)據(jù)匯總表

最終，按照此次TSH比對項目的判斷原則：將中檢院實驗室測定結果與全部參加實驗室結果的均值作為指定值，通過比較各實驗室結果偏離指定值的程度進行結果判定：各實驗室25份樣本的測定結果均落在（指定值±3SD）范圍內(nèi)判定為滿意；反之判定為不滿意。最終獲得結果滿意的為16家，不滿意結果為1家（2個樣本檢測結果落在范圍外），滿意率為94.1%。

3 討論

體外診斷試劑免疫類定量檢測實驗影響因素較多，包括檢測技術本身、所選擇抗原抗體的純度和效價，以及檢測物在樣本中的結合狀態(tài)和溯源等，并且應深刻理解擬合曲線對定量結果的影響［11-15］。這次TSH定量檢測比對實驗中，雖然僅有1家檢驗機構結果不滿意，但是通過分析各檢測機構遞交的材料及信息溝通交流，發(fā)現(xiàn)個別檢測機構在對定量試劑檢測方面的理解存在一些問題，有可能會影響其平時檢測能力和檢驗質(zhì)量。比如在雙波長測定時，通常采用450 nm/ 630 nm來表示兩個波長下測定值之間相減的關系，但有的檢測所錯誤認為是比值關系；個別實驗室檢驗操作不規(guī)范，試驗結果重復性較差；個別實驗室在結果偏離后分析原因是檢測儀器不穩(wěn)定未通過此次比對實驗。因此通過本次比對實驗，各檢測機構尤其是結果不滿意的檢測機構，應對問題原因進行深入分析，采取有效的糾正措施，如加強檢驗標準操作規(guī)范的建設、加強儀器設備的管理、定期對儀器進行強檢等，以確保檢驗結果的準確性，最終提升自身檢測能力。

比對試驗結果是實驗室技術管理水準和操作水平能力的綜合體現(xiàn)［16-20］。參加比對實驗的人員，應該充分理解實驗室間比對試驗的重要性、必要性，并認真執(zhí)行，才能做好這項技術上、組織上復雜的工作。TSH是首個體外診斷試劑定量檢測能力比對實驗項目，我們在組織這次比對實驗過程中，克服了諸多困難，最終順利完成此次比對實驗工作，并且基本達到預期目的。通過本次比對試驗，我院積累了開展體外診斷試劑定量檢測能力比對實驗的組織經(jīng)驗，同時我們通過這次比對實驗，基本了解各檢測機構該項目檢測能力，為體外診斷定量檢測試劑在不同檢測機構的質(zhì)量控制奠定了一定的基礎。

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Inter-laboratory comParison analysis rePort for determination of thyroid-stimulating hormone of medical device testing institutions in 2015

YU TingQU Shoufang
The First Department of In Vitro Diagnostic Reagents，Nationa1 Institutes for Food and Drug Contro1 Key Laboratory of Method and Standardization for Qua1ity Contro1 of Biotechnica1 Products，Beijing100050，China

Objective To understand the detection capabi1ities of medica1 device testing institutions in China，and to promote the overa11 improvement of detection 1eve1.Methods Nationa1 Institutes for Food and Drug Contro1 had carried out inter-1aboratory comparison by detecting thyroid-stimu1ating hormone in the nationa1 medica1 device testing institutions in 2015.Comparison samp1es and thyroid-stimu1ating hormone enzyme-1inked immunosorbent assay（ELISA）kits were provided centra11y to participate in the test.A11 resu1ts were judged by whether the resu1ts were in the range of（specify va1ues±3SD）.Results The resu1ts showed that 16 1aboratories were satisfied，and the passing rate was 94.1%. The resu1ts of two samp1es from one medica1 device testing institutions were not in the scope.Conclusion Data from most of medica1 device testing institutions are accurate and re1iab1e.The vu1nerabi1ity exists in the qua1ity management in a few institutions，which affects the detection qua1ity.

Thyroid stimu1ating hormone；Enzyme-1inked immunosorbent assay；Medica1 device；Detection capabi1ities

R446.61

A

1673-7210淵2016冤07淵c冤-0095-04

2016-04-02本文編輯：張瑜杰）

于婷（1978-），女，博士，副研究員，主要從事體外診斷試劑檢定、標準物質(zhì)研制及行業(yè)標準制修訂工作。

曲守方（1977-），女，博士，副研究員，主要從事體外診斷試劑檢定、標準物質(zhì)研制及行業(yè)標準制修訂工作。