張桂芝，李峰屏

(1.青海省海晏縣人民醫(yī)院 812200；2.寧波美康保生生物醫(yī)學(xué)工程有限公司，浙江寧波 315100)

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·臨床研究·

MP1干式生化分析儀淀粉酶檢測的精密度性能評價

張桂芝1，李峰屏2

(1.青海省海晏縣人民醫(yī)院 812200；2.寧波美康保生生物醫(yī)學(xué)工程有限公司，浙江寧波 315100)

目的 應(yīng)用美國臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(CLSI)EP5-A2文件對MP1全自動干式生化分析儀定量測定淀粉酶(AMY)的精密度性能進(jìn)行評價。方法 采用MP1全自動干式生化分析儀對高、低濃度AMY質(zhì)控品進(jìn)行檢測，計算批內(nèi)、批間、日間及室內(nèi)精密度。結(jié)果 MP1全自動干式生化分析儀檢測高、低值A(chǔ)MY批內(nèi)精密度CV為0.67%和2.50%，批間精密度CV為0.15%和0.52%，日間精密度CV均為0%，室內(nèi)精密度CV為0.67%和2.43%。結(jié)論 MP1全自動干式生化分析儀定量測定AMY的精密度性能良好，重復(fù)性好，能滿足臨床實驗的要求。

淀粉酶； 精密度； MP1全自動干式生化分析儀

淀粉酶(AMY)廣泛存在于胰腺和唾液腺中，能水解淀粉分子，是一種重要的碳水化合物水解酶。AMY被普遍作為急性胰腺炎的實驗室診斷指標(biāo)，是臨床診斷急腹癥的常規(guī)檢查項目[1-2]。目前，生化分析儀主要采用酶速率法檢測血清AMY水平[3]。近年來，基于微流控芯片的便攜式即時檢測(POCT)已成為國內(nèi)外研究的熱點[4-5]?，F(xiàn)依照美國臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(CLSI)制訂的EP5-A2評價方案[6]，對寧波美康保生生物醫(yī)學(xué)工程有限公司結(jié)合微流控芯片技術(shù)開發(fā)的MP1全自動干式生化分析儀檢測AMY的精密度進(jìn)行評價。報道如下。

1 材料與方法

1.1 一般材料 寧波美康保生生物醫(yī)學(xué)工程有限公司生產(chǎn)的全自動干式生化分析儀(型號MP1)，以及AMY測定盤片(批號20160420)；AMY低、高值質(zhì)控品為Randox公司產(chǎn)品，批號分別為942UN和697UE。

1.2 方法

1.2.1 檢測原理 MP1全自動干式生化分析儀定量測定AMY的方法為酶速率法，檢測盤片中裝有AMY凍干試劑小球，檢測中凍干小球復(fù)溶，試劑中對-硝基苯麥芽七糖與標(biāo)本中AMY反應(yīng)，生成硝基苯麥芽三糖、對-硝基苯麥芽四糖、麥芽三糖、麥芽四糖，前者在α-葡萄糖苷酶作用下，繼續(xù)水解為對-硝基苯酚和葡萄糖，對-硝基苯酚生成速率與AMY活性呈正比，在405 nm處對生成物的吸光度變化進(jìn)行測定，計算標(biāo)本中AMY的濃度。

1.2.3 離群值檢驗 以5.5倍標(biāo)準(zhǔn)差作為判斷依據(jù)，如果重復(fù)測量的變異絕對值超出，則拒絕該批數(shù)據(jù)。

1.2.4 精密度評價 參照EP5-A2文件，每個濃度水平獨立進(jìn)行精密度的評價。每天取同一濃度標(biāo)本2份，分2批檢測，連續(xù)進(jìn)行20 d。計算批內(nèi)精密度標(biāo)準(zhǔn)差(Sr)，批間精密度標(biāo)準(zhǔn)差(Srr)，日間精密度標(biāo)準(zhǔn)差(Sdd)和室內(nèi)精密度(ST)，精密度CV計算采用標(biāo)準(zhǔn)差除以所有結(jié)果均值再乘以100。參照文獻(xiàn)[7] 設(shè)定MP1全自動干式生化分析儀AMY檢測的精密度CV評價標(biāo)準(zhǔn)：批內(nèi)精密度CV%≤1/4 CLIA′88允許總誤差(TEa)，批間及日間精密度CV%≤1/3 CLIA′88 TEa，總精密度CV%≤1/2CLIA′88 TEa。

2 結(jié) 果

2.1 2種濃度質(zhì)控AMY檢測結(jié)果比較 MP1全自動干式生化分析儀檢測AMY高、低值質(zhì)控所有結(jié)果。見表1。

表1 AMY高、低值質(zhì)控檢測結(jié)果比較

2.2 初步精密度評價 見表2。

表2 AMY高、低值質(zhì)控檢測初步精密度實驗結(jié)果

2.3 精密度數(shù)據(jù)評價 MP1全自動干式生化分析儀測定高、低值濃度AMY質(zhì)控的Sr分別為1.61和1.87，Srr分別為0.35和0.38，Sdd均為0，說明日間變異幾乎是由批間變異導(dǎo)致，ST分別為1.62和1.82。各精密度CV計算結(jié)果顯示，批內(nèi)精密度CV分別為0.67%和2.50%，小于1/4 CLIA′88TEa(7.5%)，批間精密度CV分別為0.15%和0.52%，日間精密度CV均為0，批間及日間精密度CV在1/4 CLIA′88 TEa(10%)內(nèi)，室內(nèi)精密度CV分別為0.67%和2.43%；CV在可接受范圍1/2 CLIA′88 TEa(15%)內(nèi)。

3 討 論

急性胰腺炎是臨床常見急腹癥，病死率可達(dá)5%～10%。當(dāng)急性胰腺炎發(fā)生時，胰腺中AMY進(jìn)入血液使含量升高；又因AMY能通過腎小球濾過，因此也可通過檢測尿液中AMY活性實現(xiàn)對胰腺疾病的監(jiān)測[1-2]。目前，AMY活性檢測是臨床診斷急性胰腺炎的重要而普遍使用的指標(biāo)，應(yīng)用較廣的檢測方法為酶速率法[3]。

微流控技術(shù)作為當(dāng)前分析科學(xué)最重要的發(fā)展前沿，是實現(xiàn)分析儀器微型化、自動化和集成化的最適合產(chǎn)業(yè)化的技術(shù)平臺[4-5]。MP1全自動干式生化分析儀結(jié)合微流控技術(shù)，可使以往實驗室繁復(fù)的全血定量、血球血清分離、血清稀釋等步驟在芯片上在線自動化完成，具有自動化程度高，靈敏度高，特異性好，標(biāo)本采集后無需經(jīng)過前處理、即時獲得檢驗結(jié)果的特點。

精密度是檢測系統(tǒng)最基本的分析性能，是其他分析性能評價的基礎(chǔ)，其目的是分析實驗室內(nèi)檢測系統(tǒng)的精密度情況，CLSI EP5-A2 文件是目前精密度評價實驗方案中最全面和最具統(tǒng)計學(xué)效能的方法，為全面客觀地評價MP1全自動干式生化分析儀定量檢測AMY方法的精密度性能，本組按文件要求對批內(nèi)、批間和日間離群值進(jìn)行判斷，結(jié)果顯示所得數(shù)據(jù)中沒有出現(xiàn)離群值。檢測過程中的質(zhì)量控制證明了所有結(jié)果均可有效使用，所采集的數(shù)據(jù)能真實地反映系統(tǒng)的精密度性能[7]。最終通過對數(shù)據(jù)分析評價可知，MP1全自動干式生化分析儀定量測定AMY方法的批內(nèi)、批間、日間精密度及總精密度CV均在設(shè)定的可接受范圍內(nèi)，說明該系統(tǒng)的精密度高，重復(fù)性好，能符合臨床實驗要求。

[1]董立娜，薛興偉．血清淀粉酶和尿淀粉酶聯(lián)合檢測對早期急性胰腺炎的診斷價值探討[J]．中國傷殘醫(yī)學(xué)，2016，24(5)：82-84．

[2]蘇艷麗，吳昌學(xué)，張帥民．血Ca2+、CRP、纖維蛋白原和淀粉酶聯(lián)合檢測用于急性胰腺炎的評價[J]．貴陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2015，40(2)：163-165．

[3]孟舒婷，王惠民，季伙燕，等．響應(yīng)曲面法驗證淀粉酶檢測程序最適 pH 值,Cl-和EPS濃度[J]．檢驗醫(yī)學(xué)，2015，30(8)：782-786．

[4]李曉瓊，楊春華，潘邵武，等．面向POCT應(yīng)用的微流控芯片技術(shù)綜述[J]．世界復(fù)合醫(yī)學(xué)，2015，9(1)：30-37．

[5]Sia SK,Kricka LJ.Microfluidics and point-of-care testing[J].Lab Chip,2008,8(12):1982-1983.

[6]NCCLS.Evaluation of precision performance of clinical chemistry devices:Approved Guideline[S].EP5-A2，1999:1-49.

[7]馮仁豐．臨床檢驗質(zhì)量管理技術(shù)基礎(chǔ)[M]．上海：上?？茖W(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，2003：89．

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.20.059

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1673-4130(2016)20-2933-02

2016-04-24

2016-06-19)