李 楊，周明偉，孫銘徽，趙 野，姜日花，賈玉璽

(吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院 皮膚科，吉林 長春130033)

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進展期白癜風(fēng)患者外周血淋巴細胞亞群75例檢測分析

李 楊，周明偉，孫銘徽，趙 野，姜日花，賈玉璽*

(吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院 皮膚科，吉林 長春130033)

白癜風(fēng)(Vitiligo)是一種臨床常見的色素脫失性皮膚病，發(fā)病率為 0.4%-2%[1]，因其影響美觀，嚴重影響患者的生活質(zhì)量。白癜風(fēng)的發(fā)病機制目前尚不十分清楚，可能與自身免疫、黑素細胞功能亢進、精神創(chuàng)傷、過度勞累、遺傳等因素相關(guān)，為探討白癜風(fēng)患者的細胞免疫狀態(tài),本研究對75例進展期白癜風(fēng)患者外周血淋巴細胞亞群進行了檢測。

1 資料與方法

1.1 研究對象 選擇2014年6月-2015年6月在吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院皮膚科門診診斷為進展期白癜風(fēng)患者75例，其中男38例，女37例，年齡1-63歲，平均40.44±11.9(歲)。其中尋常型39例，節(jié)段型36例。對照組：為同期健康獻血者62人，其中男37例，女25例，年齡21-66歲，平均41.4±12.34(歲)?；颊呓M和健康對照組性別、年齡比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。排除標準：患有自身免疫性疾病者；近 2 個月系統(tǒng)使用過治療白癜風(fēng)藥物者；血、尿、肝腎功能異常者；妊娠及哺乳期患者。

1.2 儀器與試劑 流式細胞儀：Cytomics FC500(Beckman Coulter，美國)，CD45/CD4/CD8/CD3抗體、CD45/CD56/CD19/CD3抗體及同型對照抗體及FACS Lysing Solution溶血素均采自Beckman Coulter公司。

1.3 方法 抽取白癜風(fēng)患者及健康人外周靜脈血2 ml，編號、置入EDTA抗凝管。抽取抗凝血300 μl分別放入Trucoune tube中，每個試管內(nèi)100 μl。編號Trucoune tube，分別加入20 μl CD45/CD4/CD8/CD3抗體，CD45/CD56/CD19/CD3抗體，20 μl同型對照抗體。再加入500 μl溶血素。后加入3 ml PBS充分混勻后離心(1 500 rpm，5分鐘)，用流式細胞儀進行檢測。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 進展期白癜風(fēng)患者外周血淋巴細胞比例 進展期白癜風(fēng)患者與健康人對照組淋巴細胞，檢測實驗組CD3(66.64±9.64)、CD4(34.74±9.16)低于對照組(P=0.027，0.039)，CD8(30.88±8.25)高于對照組(P=0.040)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，結(jié)果見表1。

2.2 尋常型與節(jié)段型白癜風(fēng)淋巴細胞比例 檢測尋常型CD3(71.24±8.26)、CD4(38.44±9.26)高于節(jié)段型(P=0.000,0.001)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。余結(jié)果未見明顯差異，結(jié)果見表2。

表1 患者組和對照組淋巴細胞亞群比較±s)

表2 尋常型與節(jié)段型白癜風(fēng)患者外周血淋巴細胞亞群比較

3 討論

研究表明，白癜風(fēng)患者常伴發(fā)自身免疫性疾病，如橋本氏甲狀腺炎、斑禿、糖尿病、惡性貧血等[2,3]，提示白癜風(fēng)與自身免疫狀態(tài)密切相關(guān)。Shin J等報道白癜風(fēng)患者皮損真表皮交界處有CD4+、CD8+T淋巴細胞浸潤及CD8+T細胞誘導(dǎo)的黑色素細胞凋亡[4-6]。成熟的T細胞一般只表達CD4+T細胞和CD8+T細胞。CD4+T細胞識別外源性抗原肽，分化的效應(yīng)細胞主要為Th細胞，但也有少數(shù)CD4+效應(yīng)T細胞具有細胞毒作用。CD8+T細胞識別內(nèi)源性抗原肽，分化的效應(yīng)細胞為細胞毒性T細胞，具有細胞毒作用，可特異性殺傷靶細胞。當患者體內(nèi)T淋巴細胞受到某些抗原刺激被激活，具有識別抗原作用的CD4+T細胞分化減少，具有抑制作用的CD8+T細胞增加，導(dǎo)致免疫功能異常。體內(nèi)Th等細胞被激活，導(dǎo)致相關(guān)B細胞增殖，產(chǎn)生抗黑素細胞自身抗體，使黑素細胞遭到破壞，從而導(dǎo)致白癜風(fēng)的發(fā)生。

本研究對75例進展期白癜風(fēng)患者外周血淋巴細胞亞群進行了檢測分析，結(jié)果白癜風(fēng)患者外周血CD3、CD4+T細胞降低，CD8+T細胞增高，進一步揭示了白癜風(fēng)的發(fā)病與外周血淋巴細胞亞群失衡有關(guān)。另尋常型CD3+、CD4+T細胞高于節(jié)段型，CD8+T細胞未見明顯差異，是否由樣本量較小所致，有待于今后進一步研究。

綜上，進展期白癜風(fēng)患者CD3+T細胞、CD4+T 細胞降低，CD8+T細胞增高，提示白癜風(fēng)的發(fā)病與細胞免疫密切相關(guān)，可為臨床用藥提供理論依據(jù)。

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[2]Akay BN,Bozkir M,Anadolu Y,et al.Epidemiology of vitiligo,associated autoimmune diseases and audiological abnormalities:Ankara study of 80 patients in Turkey[J].J Eur Acad Dermatol Venereol,2010,24(10):1144.

[3]Gill L,Zarbo A,Isedeh P,et al.Comorbid autoimmune diseases in patients with vitiligo:A cross-sectional study[J].J Am Acad Dermatol,2016,74(2):295.

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[5]張繼靈,曹碧蘭,袁 偉.白癜風(fēng)患者皮損中CD4+,CD8+T淋巴細胞及朗格漢斯細胞的檢測[J].中國皮膚性病學(xué)雜志，2008,20(5):448.

[6]Wu J,Zhou M,Wan Y,et al.CD8+T cells from vitiligo perilesional margins induce autologous melanocyte apoptosis[J].Mol Med Rep,2013,7(1):237.

吉林省科技發(fā)展計劃項目(20150414033GH)

1007-4287(2016)10-1731-02

2015-11-19)

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