李 娜,康建華,楊立順

(天津市北辰區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，天津 300400)

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阿爾茨海默病(AD)患者外周血Aβ42及Aβ40的變化研究

李 娜,康建華,楊立順*

(天津市北辰區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，天津 300400)

目的 探討阿爾茨海默病(AD)患者外周血Aβ42及Aβ40的變化情況及臨床意義。方法 以天津市北辰地區(qū)流行病學(xué)調(diào)查AD患者105例作為研究對象，同時隨機選擇同期42例健康老人作為對照組。采用夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定外周血Aβ42及Aβ40水平。結(jié)果 健康對照組和AD組患者外周血Aβ42分別為(23.46±17.07)ng/ml、(6.46±8.27) ng/ml，與健康對照組比較，AD組Aβ42明顯下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；外周血Aβ40分別為(11.24±13.02)ng/ml、(18.50±16.35) ng/ml，與健康對照組比較，AD組Aβ40明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；健康對照組Aβ42/Aβ40為2.08，AD組Aβ42/Aβ40為0.36，AD組Aβ42/Aβ40比值明顯降低。 結(jié)論 基于流行病學(xué)調(diào)查，天津市北辰地區(qū)的AD患者外周血Aβ42水平降低，Aβ40水平升高，Aβ42/Aβ40比值降低。

阿爾茨海默?。沪?淀粉樣蛋白；Aβ42；Aβ40；Aβ42/Aβ40

(ChinJLabDiagn,2016,20:1664)

阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)是一種原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，臨床表現(xiàn)主要以進(jìn)行性記憶、認(rèn)知功能減退，語言行為障礙為特點。目前其病因和發(fā)病機制尚未完全明確[1]。AD患者的特征性神經(jīng)病理學(xué)改變?yōu)槔夏臧?senile plagues，SP)，即神經(jīng)元周圍沉積的大量炎性斑塊。研究發(fā)現(xiàn)，其主要成分為β-淀粉樣蛋白(Amyloid β-protein，Aβ) ，根據(jù)其C端結(jié)構(gòu)Aβ主要有Aβ42和Aβ40兩種形式?；仡櫺匝芯堪l(fā)現(xiàn)，Aβ與AD疾病的進(jìn)展、嚴(yán)重程度有一定相關(guān)性。因此，本研究以天津市北辰地區(qū)流行病學(xué)AD患病率調(diào)查為基礎(chǔ)，了解AD患者外周血Aβ42、Aβ40及Aβ42/Aβ40比值的變化情況，為AD發(fā)病機制及臨床治療進(jìn)一步提供理論依據(jù)。

1 對象和方法

1.1 研究對象 以天津市北辰地區(qū)(天津市北辰區(qū)瑞景社區(qū)服務(wù)中心周邊小區(qū))≥60歲2352位體檢老人作為調(diào)查對象，運用整群隨機抽樣原則，先采用簡易智力狀態(tài)檢查量表(MMSE)和日常生活能力評定表(ADL)進(jìn)行認(rèn)知功能和日常能力的評分，評分低于標(biāo)準(zhǔn)者再使用Hamilton抑郁量表和Hachinski缺血量表進(jìn)行診斷性評分，最終由神經(jīng)內(nèi)科醫(yī)師結(jié)合病史、系統(tǒng)檢查及DSM-IV、NINCDS-ADRDA及NINDS-AIREN診斷標(biāo)準(zhǔn)，確診AD患者144例[2]。所有被檢測對象均遵循知情同意且符合醫(yī)學(xué)倫理要求。基于上述流行病學(xué)調(diào)查，隨機選擇105例AD患者作為實驗組(AD組)。同時隨機選擇同期42例健康老人作為健康對照組。

1.2 試劑及儀器 人Aβ42及Aβ40ELISA檢測試劑盒購自美國eBioscience公司；酶聯(lián)免疫檢測儀購自澳大利亞Tecan公司；X-15離心機購自美國Beckman公司。

1.3 檢測方法 將采集的肝素抗凝血，采用水平離心法1000×g離心30 min，迅速分離血漿和紅細(xì)胞。并將獲取的血漿嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作，最后使用酶聯(lián)免疫檢測儀于450 nm波長處測定各孔的OD值。健康對照組檢測方法相同。

2 結(jié)果

2.1 外周血Aβ42、Aβ40水平

結(jié)果顯示AD組Aβ42水平顯著低于健康對照組；而Aβ40水平顯著高于健康對照組。AD組與健康對照組比較，P<0.05，有統(tǒng)計學(xué)意義。見表1和圖1、2。

表1 外周血Aβ42 、Aβ40檢測值

2.2 外周血Aβ42/Aβ40水平

AD組與健康對照組比較，Aβ42/Aβ40比值明顯下降(圖3)。

圖1 外周血中Aβ42均值 圖2 外周血中Aβ40均值 圖3 外周血Aβ42/Aβ40比值

3 討論

3.1 關(guān)于實驗方法和結(jié)果的討論

Aβ作為AD重要的生物標(biāo)志物，主要由神經(jīng)元產(chǎn)生，并且在腦脊液(cerebrospinal fluid，CSF)及血液中均可檢出，雖然腦脊液是理想的檢測標(biāo)志物，但CSF受適應(yīng)癥、禁忌癥、采集技術(shù)的影響而限制了在實際工作中的廣泛應(yīng)用。由于血液與腦脊液中的Aβ能進(jìn)行雙向運輸而達(dá)到動態(tài)平衡，并且采集血液中的Aβ屬微創(chuàng)技術(shù)、損傷小，更易于臨床實際應(yīng)用。本實驗是基于老年體檢患者作為主要研究對象，因此根據(jù)自身實驗特點選擇采集外周血的方法進(jìn)行Aβ42及Aβ40的檢測。

在AD的諸多致病機制中，Aβ沉積形成的SP病理改變是引起AD臨床癥狀的重要環(huán)節(jié)，因此大量研究以Aβ作為首選標(biāo)志物。但是基于Aβ的許多研究結(jié)果不盡相同。如Noguchi M、Tarawneh R等檢測AD患者腦脊液中Aβ42水平，發(fā)現(xiàn)與健康人比較AD患者Aβ42明顯下降[3,4]；Ertekin—Taner N等研究發(fā)現(xiàn)AD患者腦脊液Aβ40水平明顯升高[5]；Lewczuk P 等研究發(fā)現(xiàn)AD患者血漿中Aβ42較正常對照組明顯下降[6]。而另外一些研究則相反，如由APP 突變引起的家族性AD血漿中總Aβ和Aβ42水平升高[7]；彭丹濤等證實，家族性AD患者血漿Aβ42水平較對照組顯著升高，隨著疾病的進(jìn)展Aβ42水平又逐漸降低[8]；而Hampel H 等發(fā)現(xiàn)AD患者與健康人外周血Aβ42、Aβ40水平變化無顯著性差異[9]。在本研究中也選用Aβ的兩種主要形式Aβ42及Aβ40作為主要檢測指標(biāo)，檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)相對于健康老人，AD患者外周血Aβ42明顯下降約3.63倍，Aβ40明顯升高約1.65倍，且這種變化具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。表明基于流行病學(xué)調(diào)查確診的AD患者，Aβ42、Aβ40作為檢測指標(biāo)有助于AD的診斷，具有重要的臨床意義。

針對部分研究結(jié)果的不一致，有學(xué)者提出相對于單獨使用Aβ42、Aβ40變化水平，采用Aβ42/Aβ40比值變化且比單純Aβ42下降更顯著，則能更好的診斷AD[10]，對于AD疾病的預(yù)防、發(fā)展、治療更具有提示作用。文獻(xiàn)顯示AD患者腦脊液中Aβ42/ Aβ40比值較健康對照組明顯下降[11,12]。在本研究中，我們得出相同結(jié)論，與健康對照組比較，AD患者Aβ42/ Aβ40比值明顯下降約5.78倍，且比單純Aβ42水平下降更為明顯，表明采用Aβ42/ Aβ40比值聯(lián)合Aβ42更有助于AD的診斷。

3.2 關(guān)于Aβ級聯(lián)假說致病機制的討論

Aβ級聯(lián)假說是AD致病的重要假說之一。Aβ是淀粉樣前體蛋白( Amyloid precursor protein，APP)經(jīng)β-分泌酶和γ-分泌酶水解后形成。Aβ主要有2種亞形，一種是由40個氨基酸殘基組成的蛋白片段，即Aβ40。另一種是由42-43個氨基酸殘基組成的蛋白片段，即Aβ42。因Aβ42比Aβ40多兩個疏水性氨基酸，從而更易聚集形成SP[13]。同時Aβ具有三種存在形式：可溶性單體、寡聚體及不溶性纖維狀斑塊。研究證實，可溶性Aβ單體是無毒的，一旦相互聚集形成Aβ寡聚體即具有神經(jīng)毒性，Aβ寡聚體進(jìn)一步形成淀粉樣斑塊，即可引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)的退行性改變[14]。由此，研究認(rèn)為Aβ的存在狀態(tài)決定其致病性。在本實驗中，我們發(fā)現(xiàn)AD患者Aβ42水平明顯下降，而Aβ40水平明顯升高，是否表明在AD的致病過程中，由于Aβ42的疏水性而更易于形成寡聚體或淀粉樣斑塊而導(dǎo)致臨床癥狀的產(chǎn)生；而Aβ40其毒性作用更多的體現(xiàn)在溶解狀態(tài)。作為Aβ的兩大主要成分Aβ42和Aβ40通過不同途徑、不同機制而最終導(dǎo)致AD的病理性改變和認(rèn)知功能障礙。最近大量學(xué)者也提出關(guān)于Aβ級聯(lián)假說的修正學(xué)說，認(rèn)為Aβ狀態(tài)、分布、性質(zhì)改變才是導(dǎo)致AD的真正原因，但是其確切機制還有待于進(jìn)一步研究。

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Changes of Aβ42and Aβ40in peripheral blood from patients with Alzheimer’s disease

LINa,KANGJian-hua,YANGLi-shun.

(TianjinBeichenDistrictChineseMedicineHospital,Tianjin300400,China)

Objective To observe changes of peripheral Aβ42and Aβ02in patients with Alzheimer’s disease(AD) and to investigate their clinical meanings.Methods A total of 105 AD patients in selected as the observed subjects by epidemiological investigation in Beichen District,Tianjin City,meanwhile random sampling 42 healthy age-matched as control group.Level of the Aβ42and Aβ40was detected by ELISA.Results The level of Aβ42in peripheral blood was respectively (23.46±17.07)ng/ml、(6.46±8.27) ng/ml，Compared to the controls，the level of Aβ42in the patients decreased significantly(P<0.05);the level of Aβ40in peripheral blood was respectively(11.24±13.02)ng/ml、(18.50±16.35) ng/ml,Compared to the controls，the level of Aβ40in the patients increased significantly(P<0.05).the rate of Aβ42/Aβ40was respectively 2.08、0.36， the ratio was decreased in AD groups.Conclusion Based on our epidemiological investigation in Beichen District,Tianjin City,the level of Aβ42in peripheral blood was decreased,Aβ40was increased and Aβ42/ Aβ40was decreased in AD patients.

Alzheimer’s disease；Amyloid β-protein；Aβ42；Aβ40;Aβ42/Aβ40

天津市北辰區(qū)科技發(fā)展計劃項目(bcws2012-10)

1007-4287(2016)10-1664-03

R742.8+9

A

2015-06-16)

*通訊作者