汪 鋒，宋曉燕，胡玉崇，賀慧杰，武 慧，張 帆，釵麗干

(內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院 1.病理科；2.婦產(chǎn)科，內(nèi)蒙古 呼和浩特010017)

?

Versican、CTGF、TGFβ1在子宮內(nèi)膜樣腺癌及子宮內(nèi)膜上皮內(nèi)瘤變中的表達(dá)和意義

汪 鋒1，宋曉燕1，胡玉崇2，賀慧杰1，武 慧1，張 帆1，釵麗干1

(內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院 1.病理科；2.婦產(chǎn)科，內(nèi)蒙古 呼和浩特010017)

目的 探討多功能蛋白聚糖(Versican)、結(jié)締組織生長因子(CTGF)、轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGFβ1)在子宮內(nèi)膜樣腺癌(EA)及子宮內(nèi)膜上皮內(nèi)瘤變(EIN)中的表達(dá)及三者相關(guān)性。方法 采用免疫組織化學(xué)方法對76例EA和35例EIN中Versican、CTGF、TGFβ1的表達(dá)情況進(jìn)行了分析，闡述其在EA及EIN中的表達(dá)特征及相互關(guān)系。結(jié)果 在76例EA中Versican、CTGF、TGFβ1陽性表達(dá)率分別為75%，65.8%，69.7%，在35例EIN中陽性表達(dá)率分別為42.9%，37.1%，37.1%。Versican、CTGF、TGFβ1在EA陽性表達(dá)率明顯高于EIN陽性表達(dá)率，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，Versican與TGFβ1在EA中表達(dá)率具有相關(guān)性(P<0.05)，CTGF與TGFβ1在EA中表達(dá)率也具有相關(guān)性(P<0.05)。結(jié)論 子宮內(nèi)膜上皮內(nèi)瘤變是子宮內(nèi)膜樣腺癌的癌前病變，Versican、CTGF、TGFβ1的異常表達(dá)可能與子宮內(nèi)膜樣腺癌的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)，Versican、CTGF、TGFβ1在這一過程中具有明顯的相關(guān)性。

子宮內(nèi)膜樣腺癌；子宮內(nèi)膜上皮內(nèi)瘤變；Versican；結(jié)締組織生長因子；轉(zhuǎn)化生長因子β1

(ChinJLabDiagn,2016,20:1658)

子宮內(nèi)膜癌是常見的婦科惡性腫瘤，近年來其發(fā)病率逐漸增高，在部分國家已經(jīng)超過子宮頸癌成為最常見的女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，僅美國每年就有47130例新發(fā)病例，8010例死于子宮內(nèi)膜癌[1]。2014年，第4版WHO將子宮內(nèi)膜不典型增生(AH)與子宮內(nèi)膜上皮內(nèi)瘤變(EIN)并列命名為AH/EIN[2]。分子遺傳學(xué)研究顯示，EIN具有與子宮內(nèi)膜樣腺癌相類似的細(xì)胞遺傳學(xué)改變，進(jìn)一步證實其為子宮內(nèi)膜樣腺癌的前期病變。Versican是一種軟骨素硫酸鹽蛋白聚糖，可與多種因子結(jié)合，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與基質(zhì)的相互作用，促進(jìn)細(xì)胞增生并誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)。TGFβ是EMT的重要細(xì)胞因子。TGFβ是CTGF的上游調(diào)節(jié)介質(zhì)。本文重點研究Versican、CTGF、TGFβ1在子宮內(nèi)膜樣腺癌及其癌前病變子宮內(nèi)膜上皮內(nèi)瘤變中的表達(dá)及相互關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源

收集內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院病理科2012年8月至2015年12月子宮內(nèi)膜樣腺癌手術(shù)標(biāo)本76例?；颊吣挲g32-72歲，平均年齡54.6歲。子宮內(nèi)膜上皮內(nèi)瘤變診刮標(biāo)本35例，患者年齡30-69歲，平均年齡50.2歲。所有標(biāo)本均經(jīng)10%福爾馬林固定，石蠟包埋后行4 μm厚切片。參照2014年，第4版《WHO女性生殖器官腫瘤分類》診斷標(biāo)準(zhǔn)對病例進(jìn)行回顧性分析，由兩名副主任醫(yī)師以上人員對病理診斷及組織學(xué)分級進(jìn)行確認(rèn)。

1.2 方法

兔抗人Versican、CTGF、TGFβ1抗體均為北京博奧森生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，二抗亦購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司。采用鏈霉菌素-生物素(SP)免疫組織化學(xué)染色方法檢測。

1.3 結(jié)果判斷

隨機(jī)選擇5個高倍視野，每個視野計數(shù)100個瘤細(xì)胞，計數(shù)陽性細(xì)胞百分比。評分標(biāo)準(zhǔn)使用目前已被廣泛接受的免疫反應(yīng)評分(IRS)系統(tǒng)。該評分系統(tǒng)包括陽性染色細(xì)胞數(shù)和染色強(qiáng)度兩部分評價：(1)陽性染色細(xì)胞數(shù)≤5%為0分，5%-25%為1分，26%-50%為2分，51%-75%為3分，>75%為4分。(2)染色強(qiáng)度無色為0分，染色強(qiáng)度淡黃色為1分，黃色為2分，褐色為3分。將同一組織的兩部分評分結(jié)果相乘即得出該組織標(biāo)本的免疫反應(yīng)評分，0分為無表達(dá)“﹣”，1-4分為弱陽性“+”，5-8分為中等陽性“++”，9-12分為強(qiáng)陽性“+++”。在本研究中，為了便于分組統(tǒng)計分析，將無表達(dá)和弱陽性定義為陰性表達(dá)；將中等陽性和強(qiáng)陽性定義為陽性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

數(shù)據(jù)統(tǒng)計使用SPSS V13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行處理，顯著性檢驗采用χ2檢驗，相關(guān)性檢驗采用Spearman相關(guān)分析；檢驗水準(zhǔn)為α=0.05.

2 結(jié)果

2.1 TGFβ1在EA及EIN中的表達(dá)

TGFβ1表達(dá)于子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞胞質(zhì)，在76例EA中TGFβ1陽性表達(dá)率為69.7%，在35例EIN中陽性表達(dá)率37.1%，兩者比較差異具有顯著性(P<0.05)。見表1。

表1 TGFβ1在子宮內(nèi)膜樣腺癌及子宮內(nèi)膜上皮內(nèi)瘤變中表達(dá)的比較

2.2 Versican在EA及EIN中的表達(dá)

Versican表達(dá)于子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞胞質(zhì)，在76例EA中Versican陽性表達(dá)率為75%，在35例EIN中陽性表達(dá)率42.9%，兩者比較差異具有顯著性(P<0.05)。見表2。

表2 Versican在子宮內(nèi)膜樣腺癌及子宮內(nèi)膜上皮內(nèi)瘤變中表達(dá)的比較

2.3 CTGF在EA及EIN中的表達(dá)

CTGF主要表達(dá)于子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞胞質(zhì)及胞膜，間質(zhì)細(xì)胞亦有表達(dá)，在76例EA中CTGF陽性表達(dá)率為65.8%，在35例EIN中陽性表達(dá)率37.1%，兩者比較差異具有顯著性(P<0.05)。見表3。

表3 CTGF在子宮內(nèi)膜樣腺癌及子宮內(nèi)膜上皮內(nèi)瘤變中表達(dá)的比較

2.4 TGFβ1與Versican在EA中表達(dá)的相關(guān)性

在76例EA中Versican、TGFβ1陽性表達(dá)率分別為75%，69.7%，在子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達(dá)有協(xié)同變化的趨勢，表現(xiàn)為隨著一種蛋白的表達(dá)增強(qiáng)，另一種蛋白其表達(dá)也增高，采用Spearman相關(guān)分析，r=0.546,P<0.01，表明兩者的表達(dá)呈正相關(guān)。見表4。

表4 TGFβ1與Versican在子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中表達(dá)的相關(guān)性

2.5 TGFβ1與CTGF在EA中表達(dá)的相關(guān)性

在76例EA中CTGF、TGFβ1陽性表達(dá)率分別為65.8%，69.7%，采用Spearman相關(guān)分析，r=0.672,P<0.01，表明兩者的表達(dá)呈正相關(guān)。見表5。

表5 TGFβ1與CTGF在子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中表達(dá)的相關(guān)性

3 討論

研究發(fā)現(xiàn)[3，4]，上皮細(xì)胞在一些因素的作用下，失去細(xì)胞極性，丟失細(xì)胞間緊密連接和黏附連接，獲得浸潤和游走遷移能力，變成了具有間質(zhì)細(xì)胞形態(tài)和特性的細(xì)胞，這被稱為EMT。由于EMT是上皮細(xì)胞獲得遷移能力的有效方式，成為占惡性腫瘤90%以上的上皮細(xì)胞癌浸潤轉(zhuǎn)移的一個重要途徑。TGFβ[5]是一種多功能的細(xì)胞因子，在EMT中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用，TGFβ是最主要的信號通路之一。研究表明[6]TGFβ能夠誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞發(fā)生EMT。本研究中，在76例EA中TGFβ1陽性表達(dá)率為69.7%，在35例EIN中陽性表達(dá)率37.1%，兩者比較差異具有顯著性(P<0.05)。同樣說明 TGFβ1在子宮內(nèi)膜樣腺癌發(fā)生發(fā)展及癌組織浸潤中可能具有較為重要的作用。

軟骨素硫酸鹽蛋白聚糖Versican在多種惡性腫瘤中高表達(dá)，它在腫瘤中的作用是調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、黏附、侵襲、遷移、血管生成，以及腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移[7]。本研究發(fā)現(xiàn)versican在子宮內(nèi)膜樣腺癌中表達(dá)較其癌前病變子宮內(nèi)膜上皮內(nèi)瘤變中明顯增多，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

本研究發(fā)現(xiàn)，在人的子宮內(nèi)膜樣腺癌中versican與TGFβ1的表達(dá)具有相關(guān)性，提示versican與TGFβ在子宮內(nèi)膜樣腺癌發(fā)生發(fā)展中可能存在相互作用。Gao等[8]研究發(fā)現(xiàn)，小鼠乳腺癌模型多功能蛋白聚糖介導(dǎo)的TGFβ途徑阻滯可能會激發(fā)EMT，進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞增生，最終導(dǎo)致轉(zhuǎn)移部位腫瘤迅速生長。與本研究結(jié)論相一致。

CTGF具有促血管形成、促有絲分裂等許多生理功能[9]。許多研究表明，CTGF的表達(dá)與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。但在子宮內(nèi)膜癌中有關(guān)CTGF報道很少，本研究發(fā)現(xiàn)CTGF主要表達(dá)于子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞胞質(zhì)及胞膜，間質(zhì)細(xì)胞亦有表達(dá)，在76例EA中CTGF陽性表達(dá)率為65.8%，在35例EIN中陽性表達(dá)率37.1%，兩者比較差異具有顯著性(P<0.05)，說明CTGF與子宮內(nèi)膜樣腺癌的發(fā)生發(fā)展存在一定的關(guān)系。

TGFβ1是CTGF的上游調(diào)節(jié)介質(zhì)，實驗發(fā)現(xiàn)[10]CTGF蛋白、TGFβ1蛋白的陽性表達(dá)率在正常宮頸組織、CINII-Ⅲ組織、宮頸鱗癌組織中呈逐步遞增的趨勢，Spearman等級相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)二者在宮頸鱗癌中的表達(dá)呈正相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，TGFβ1與CTGF在子宮內(nèi)膜樣腺癌中蛋白表達(dá)具有相關(guān)性，說明兩者在子宮內(nèi)膜樣腺癌中可能存在相同的關(guān)聯(lián)性。

總之，EMT是上皮細(xì)胞癌浸潤轉(zhuǎn)移的一個重要途徑。TGFβ是上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的重要因子，與其相關(guān)的CTGF及versican兩個因子，在子宮內(nèi)膜樣腺癌中蛋白表達(dá)存在較為明顯的相關(guān)性，對子宮內(nèi)膜樣腺癌發(fā)生發(fā)展可能有著重要的意義。

[1]Siegel R，Naishadham D，Jemal A．Cancer statistics，2013[J]．CA Cancer J Clin，2013，63：11．

[2]Zaino R，Matias-Guiu X，Carinelli SG，et al．Tumours of the uterine corpus．Epithelial tumours and precursors[M]//Kurman RJ，Carcangiu ML，Herrington CS，et al．WHO classification of tumours of female reproductive organs．4th ed．Lyon：IARC Press，2014：125．

[3]Miealizzi DS，F(xiàn)arabaugh SM，F(xiàn)ord HL．Epithelial-mesenchymal transition in cancer:parallels between normal development and tumor progression[J]．J Mammary Gland Biol Neoplasia，2010，15：117.

[4]Hayashida T，Jinno H，Kitagawa Y，et al．Cooperation of cancer stem cell properties and epithelial-mesenchymal transition in the establishment of breast cancer metastasis[J]．Journal of oncology，2011，2011：591427．

[5]Wendt MK，Allington TM，Schiemann WP．Mechanisms of the epithelial-mesenchymal transition by TGF-beta[J]．Future Oncol，2009，5：1145．

[6]李 鵬，王志啟，趙麗君，等.轉(zhuǎn)化生長因子β誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的研究[J].中華婦產(chǎn)科雜志，2014,49(8)：628.

[7]Ricciardelli C，Sakko AJ,Ween MP，et al．The biological role and regulation of versican levels in cancer[J]．Cancer and Metastasis Reviews，2009，28(1/2)：233．

[8]Gao D，Joshi N，Choi H，et al．Myeloid progenitor cells in the premetastatic lung promote metastases by inducing mesenchymal to epithelial transition[J]．Cancer Res，2012，72(6)：1384．

[9]Kular L，Pakradouni J，Kitabgi P，et al.The CCN family：A new class of inflammation modulators[J].Biochimie，2011，93(3)：377.

[10]Zhu Qiaoling，Wu Yilin.Expression and clinical significance of connective tissue growth factor and transforming growth factor beta 1 in cervical squamous carcinoma tissues[J].J Pract Obst Gynecol，2014，30(8)：600.

Expression and significance of Versican、CTGF、TGFβ1 in endometrioid adenocarcinoma and endometrial intraepithelial neoplasia

WANGFeng，SONGXiao-yan，HUYu-chong，etal.

(DepartmentofPathology,InnerMongoliaPeople’sHospital,Huhhot010017,China)

Objective To explore the expression and correlation of versican、connective tissue growth factor(CTGF)and transforming growth factor beta1(TGFβ1) in endometrioid adenocarcinoma and endometrial intraepithelial neoplasia.Methods The expression of vesican、CTGF and TGFβ1 was examined by Streptavidin-biotin peroxidase(SP) immunohistochemical method in 76 cases of endometrioid adenocarcinoma and 35 cases of endometrial intraepithelial neoplasia respectively.The results of versican、CTGF and TGFβ1 in endometrioid adenocarcinoma and endometrial intraepithelial neoplasia were analyzed with statistic package SPSS 13.0.Results Positive rate of versican、CTGF and TGFβ1 have significant difference between endometrioid adenocarcinoma and endometrial intraepithelial neoplasia.Positive rate of versican、CTGF and TGFβ1 was 75%、65.8% and 69.7% respectively significantly higber in endometrioid adenocarcinoma than in endometrial intraepithelial neoplasia respectively which was 42.9%，37.1%，37.1% respectively(P<0.05).The expression of versican was positively correlated with TGFβ1 in endometrioid adenocarcinoma(P<0.05).The expression of CTGF was positively correlated with TGFβ1 also in endometrioid adenocarcinoma(P<0.05).Conclusion The endometrial intraepithelial neoplasia was regarded as the precancerous lesion of endometrioid adenocarcinoma.The abnormal expression of versican、CTGF and TGFβ1 had obvious association with the pathogenesis of endometrioid adenocarcinoma.

endometrioid adenocarcinoma;endometrial intraepithelial neoplasia;versican;connective tissue growth factor;transforming growth factor beta1

內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院院內(nèi)基金普通項目(201419)

1007-4287(2016)10-1658-04

R737.33

A

2016-03-01)