劉宗諭,王碧航,李 丹,范麗梅

(1.吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)部臨床醫(yī)學(xué)院，吉林 長春130021；2.吉林大學(xué)第二醫(yī)院，吉林 長春130041)

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重樓皂苷的提取及其在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)研究

劉宗諭1,王碧航1,李 丹1,范麗梅2*

(1.吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)部臨床醫(yī)學(xué)院，吉林 長春130021；2.吉林大學(xué)第二醫(yī)院，吉林 長春130041)

目的 探討重樓皂苷的提取及其在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)研究。方法 首先建立重樓皂苷的含量測定方法，以這個方法為基礎(chǔ)間接測量重樓皂苷的百分比含量，按照統(tǒng)計學(xué)方差分析的方法找出最優(yōu)的提取工藝，即20倍體積的40%乙醇超聲提取60 min。使用大孔樹脂吸附法洗脫純化皂苷；建立重樓皂苷藥代動力學(xué)的模型，模型要具備避免內(nèi)源干擾、靈敏度好的特點，通過實驗大鼠為載體，分別在大鼠的尾靜脈注射重樓皂苷提取物，記錄不同時間大鼠血藥的濃度，經(jīng)過模型演算和統(tǒng)計學(xué)分析數(shù)據(jù)研究重樓皂苷在體內(nèi)的代謝水平，以及藥物的生物利用度。結(jié)果 重樓皂苷Ⅰ和Ⅱ在大鼠體內(nèi)的血液清除速度足夠快，但生物利用度較低，符合一室、二室開放藥代動力學(xué)的模型。結(jié)論 本實驗得出的藥代參數(shù)可以作為臨床治療的科學(xué)理論數(shù)據(jù)基礎(chǔ)來使用，根據(jù)不同的藥物清除時間和藥物作用于體內(nèi)的時間，調(diào)整給藥時間，保證治療的效果，減少藥物的副作用，確保藥效的持續(xù)性和穩(wěn)定性。

重樓皂苷；提?。淮笫?；藥代動力學(xué)

(ChinJLabDiagn,2016,20:1640)

重樓皂苷是一種化學(xué)物質(zhì)，具有藥效強、應(yīng)用范圍廣、抗腫瘤的作用，中醫(yī)范疇研究顯示還具有清熱解毒、止血化淤、消炎止痛的功效，跌打損傷常用其做藥物配伍[1]。甾體皂苷是重樓藥效的重要基礎(chǔ)化學(xué)成分，是藥效發(fā)揮的主要載體，這在以往的研究中已有多數(shù)報道，近幾年，對于重樓皂苷的提取、抗癌治療的研究逐漸增加，采用實驗動物對藥效和藥物代謝的實驗研究。藥代動力學(xué)的參數(shù)能夠為日后該藥物在臨床的應(yīng)用提供更為科學(xué)的指導(dǎo)和治療[2]，本文通過實驗大鼠注射重樓皂苷，探討重樓提取物中重樓皂苷Ⅰ、Ⅱ的含量情況即藥效作用，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

實驗動物大鼠來自吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院實驗動物中心。

1.2 實驗儀器、材料和試劑

數(shù)顯恒溫水浴鍋、高速臺式離心機、低速自動平衡離心機、氮氣吹掃儀、液相色譜-三重四級桿質(zhì)譜聯(lián)用儀、離心管、乙腈、甲醇、二氯甲烷、三氯甲烷、醋酸銨等。

1.3 方法

1.3.1 重樓皂苷含量測定和提取 定量重樓皂苷標(biāo)準(zhǔn)品與準(zhǔn)備好的純甲醇充分溶解在10 ml的容量瓶中，充分混合搖勻置于冰箱中冷藏，根據(jù)重樓皂苷Ⅰ、Ⅱ制成的標(biāo)準(zhǔn)液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線[3]；稱取干藥材(重樓曬干提取)100 g，然后打粉機打碎過篩，將篩好的藥材放置干燥處備用。提取方法有超聲提取、加熱回流提取、重量不足采用乙醇補重。使用正交實驗取得最優(yōu)化的參數(shù)[4]，離心管離心取上清液后烘干蒸發(fā)、稱重，重量以最終的數(shù)值為準(zhǔn)。

1.3.2 建立皂苷藥代動力學(xué)模型[5]為防止大鼠藥物中毒，需要對皂苷進行浸膏富集，得到含量較高的皂苷用于實驗大鼠，通過正丁醇萃取、大孔樹脂吸附。

1.3.3 大鼠尾靜脈注射重樓皂苷提取物 將提取的重樓藥材碾壓粉碎同40%的乙醇溶液以1∶20進行混合調(diào)勻，過濾干燥得重樓浸膏[6]。使用大孔板來富集浸膏，洗脫、純化。離心后萃取上清液備用。選擇6只健康的大鼠，平均體重為190±20 g，雌雄比例為1∶1，在大鼠的尾靜脈注射給藥，劑量為50 mg/kg，給藥后的3 min、10 min、1 h、2 h、4 h、8 h不同時間點取大鼠眼眶后靜脈叢血0.3 ml，置入放有肝素的試管離心后留取血漿于-20℃放置備用。

2 結(jié)果

取制好的大鼠血漿100 μl，按照不同時間點測定的大鼠的血藥濃度做好記錄并繪制曲線，將所測的數(shù)值代入到編好的計算機程序中計算藥代參數(shù)，再根據(jù)建好的藥物動力學(xué)模型對參數(shù)進行處理分析。所測的截點血藥濃度數(shù)值詳見表1、表2；計算后的參數(shù)水平詳見表3、表4。

表1 重樓皂苷Ⅰ的血藥濃度

注：ND為血藥濃度下限

表2 重樓皂苷Ⅱ的血藥濃度

注：ND為血藥濃度下限

3 討論

重樓皂苷提取工藝需要進行正交試驗設(shè)計考察，通過對方法、表格設(shè)計、方案設(shè)計與實施等步驟進行質(zhì)控考察，最終確定了皂苷的提取方法為20倍的40%乙醇超聲提取[7]。大孔樹脂板對皂苷的吸附作用從而富集高含量的重樓提取物這一過程中用到的正丁醇萃取法也是經(jīng)過了試驗驗證得出的首選方法，研究顯示[8]，70%乙醇對重樓皂苷提取效率最高，但是大孔樹脂對這種方法萃取的藥材洗脫能力并不理想，而使用正丁醇提取的話，大孔樹脂與其配合洗脫效果最佳，洗脫后含量高達25%-35%[9]。對于中藥材的洗脫分離這一環(huán)節(jié)的把握是整個皂苷提取工藝中最重要的部分，因為它直接影響藥材的療效和穩(wěn)定性。西藥已經(jīng)開始廣泛應(yīng)用大孔樹脂技術(shù)[10]，中藥對此尚處于研究試驗階段，技術(shù)還不夠成熟，但實驗的效果還是令人滿意，所以被越來越多的使用。大孔樹脂具有操作簡單、節(jié)能省材的特點。

表3 重樓皂苷Ⅰ的主要藥代動力學(xué)參數(shù)

表4 重樓皂苷Ⅱ的主要藥代動力學(xué)參數(shù)

針對實驗大鼠建立藥物動力學(xué)模型可以排除實驗的干擾和實驗中的選擇偏倚等問題，提高參數(shù)的穩(wěn)定性[11]，增加數(shù)值計算的靈敏性，從而保證重樓皂苷的回收率、精密度等線性關(guān)系良好，該法用于大鼠藥代動力學(xué)研究十分可靠[12]。通過實驗大鼠尾靜脈注射重樓皂苷提取物溶液后的藥物代謝動力學(xué)參數(shù)來看[13]，重樓皂苷Ⅰ和Ⅱ全部符合了二室開放的藥代動力學(xué)模型，兩者的血液清除速率也較快，重樓皂苷Ⅰ速度更為快速些，說明重樓皂苷Ⅱ在體內(nèi)作用時間更長。本實驗得出的藥代參數(shù)可以作為臨床治療使用的科學(xué)理論數(shù)據(jù)基礎(chǔ)，根據(jù)不同的清除時間和作用于體內(nèi)的藥物代謝時間，來調(diào)整給藥時間，維持治療的效果，減少藥物副作用，保證藥效的持續(xù)性以及穩(wěn)定性。重樓皂苷自身具有難溶于水的屬性，所以生理鹽水溶解后的濃度很低[14]，需要研究其他溶液與重樓皂苷溶解以達到提高溶質(zhì)含量的目的。

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Extraction polyphyllin and pharmacokinetic studies in rats

LIUZhong-yu,WANGBi-hang,LIDan,etal.

(JilinUniversityBethuneSchoolofMedicine,Changchun130021,China)

Objective To investigate the extraction polyphyllin and pharmacokinetic studies in rats.Methods The method for determination Firstly polyphyllin to this indirect measurement method based on the percentage content polyphyllin to find out the optimal extraction process in accordance with the method of statistical analysis of variance,which is 20 times the volume of 40% ethanol ultrasonic extraction 60 min.Eluting saponins macroporous resin adsorption;establish polyphyllin pharmacokinetic model,the endogenous model to avoid interference with sensitivity and good,as the carrier by rats,respectively,and then the tail vein of rats,bioavailability stomach were injected and poured polyphyllin extract concentrations recorded at different times of rat blood through model calculations and statistical analysis of research data polyphyllin metabolism in the body,and drugs.Results Polyphyllin Ⅰ and Ⅱ in rats blood clearance is fast enough,but low bioavailability,consistent with a room,two-compartment pharmacokinetic model.Conclusion The experiment results of the pharmacokinetric parameters can be used as a scientific theoretic basis for clinical treatment of the data,according to the different drug clearance time and drug effects in the body time,to adjust the timing of administration, ensure the treatment effect, reduce the side effect of drugs,to ensure the continuity and stability of efficacy.

polyphyllin;extraction;rats;pharmacokinetics

吉林省產(chǎn)業(yè)技術(shù)研究與開發(fā)項目(2013C026-4)

1007-4287(2016)10-1640-03

R969.1

A

2015-12-02)

*通訊作者