李保娣 李紅育 張慧 于德山 何健

730000 蘭州,甘肅省疾病預(yù)防控制中心

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·論著·

2013-2015年度甘肅省流感病毒病原學(xué)特征分析

李保娣 李紅育 張慧 于德山 何健

730000 蘭州,甘肅省疾病預(yù)防控制中心

目的 分析甘肅省2013-2015年流行性感冒(流感)的流行特征，為今后的流感防控工作提供科學(xué)依據(jù)。方法 采集全省19家國家級(jí)流感監(jiān)測(cè)哨點(diǎn)醫(yī)院門診流感樣病例(influenza-like illness，ILI)的咽拭子，以熒光定量PCR方法檢測(cè)病毒核酸，核酸檢測(cè)陽性標(biāo)本用犬腎細(xì)胞(MDCK)進(jìn)行病毒分離培養(yǎng)鑒定。結(jié)果 對(duì)37 332份ILI咽拭子進(jìn)行流感病毒核酸檢測(cè)，陽性5 928份，陽性率為15.88%；2013年第14周-2016年第13周三個(gè)監(jiān)測(cè)年度流感病毒核酸陽性率依次為14.52%、12.36%和20.15%。按年齡組分析，<5歲嬰幼兒陽性率最低為12.78%，顯著低于其他年齡組；15-24歲陽性率最高為24.75%。對(duì)6 285份標(biāo)本進(jìn)行了流感病毒分離，分離到流感病毒1 630株，檢出率為25.93%，其中395株甲型H1N1、524株季節(jié)性H3N2、342株乙型Victorian系、367株乙型Yamagata系。結(jié)論 甘肅省流感病毒型別表現(xiàn)為交替流行規(guī)律，應(yīng)積極采取綜合性防控措施。

Fundprogram:NationalScienceandTechnologyMajorProjectforInfectiousDiseaseResearchofChina(2012ZX10004-208)

流行性感冒(流感)是由流感病毒引起的急性呼吸道傳染病，其傳播速度快，易在人群中引起大范圍流行、季節(jié)性流行及反復(fù)流行。2009年9月以來，甘肅省國家級(jí)流感監(jiān)測(cè)哨點(diǎn)醫(yī)院及網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室構(gòu)成了覆蓋全省所有市州的監(jiān)測(cè)體系。本研究旨在分析2013-2015年甘肅省流感病毒病原學(xué)特征，探討其流行規(guī)律，為全省流感預(yù)防控制提供參考。

1 材料與方法

1.1 病例定義 流感樣病例(influenza-likeillness，ILI)：發(fā)熱(體溫≥38 ℃)，伴咳嗽或咽喉疼痛等癥狀之一，缺乏其他實(shí)驗(yàn)室診斷依據(jù)者。

1.2 流感病例哨點(diǎn)監(jiān)測(cè) 全省19家國家級(jí)流感監(jiān)測(cè)哨點(diǎn)醫(yī)院報(bào)告ILI病例，采集ILI標(biāo)本，甘肅省疾病預(yù)防控制中心及各市州疾病預(yù)防控制中心進(jìn)行病原學(xué)檢測(cè)并錄入系統(tǒng)，暴發(fā)疫情監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)由疫情發(fā)生地疾病預(yù)防控制中心報(bào)告。

按照《全國流感監(jiān)測(cè)方案》(2010版)要求，采集發(fā)病3d之內(nèi)未使用抗病毒類藥物的ILI咽拭子，每年10月1日-次年3月31日每家哨點(diǎn)醫(yī)院每周采集10-15份，4-9月每月采集5-15份標(biāo)本。采集的咽拭子24h內(nèi)送至網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室，于4 ℃或-70 ℃以下保存，全過程避免標(biāo)本反復(fù)凍融。

1.3 病原學(xué)檢測(cè)

1.3.1 病毒RNA提取:用RneasyMiniKit(德國Qiagen公司)提取核酸，操作按試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3.2 流感病毒核酸檢測(cè):均使用Real-timePCR方法檢測(cè)，首先檢測(cè)甲型流感、乙型流感；甲型流感陽性再進(jìn)一步檢測(cè)甲型H1N1流感、季節(jié)性H1和H3流感；乙型流感陽性再進(jìn)一步進(jìn)行Victorian和Yamagata分型檢測(cè)。使用的引物和探針為中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所提供，擴(kuò)增試劑盒為德國Qiagen公司生產(chǎn)，所有操作均按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3.3 流感病毒分離鑒定:核酸檢測(cè)陽性標(biāo)本經(jīng)無菌處理后接種于狀態(tài)良好的MDCK細(xì)胞和(或)雞胚進(jìn)行流感病毒分離培養(yǎng)，然后用血凝(HA)和血凝抑制法(HI)鑒定流感病毒的型別及亞型。

1.4 主要儀器設(shè)備 實(shí)時(shí)熒光PCR儀(ABI7500/7300儀)、SIGMA3-18K離心機(jī)、倒置顯微鏡(奧林巴斯)等。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用Excel2010 和SAS9.1軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。不同樣本類型的陽性率比較用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 流感病毒核酸檢測(cè)結(jié)果 2013-2015年度共檢測(cè)ILI咽拭子標(biāo)本37 332份，流感病毒核酸檢測(cè)陽性5 929份，陽性率為15.88%；其中：乙型流感2 588份，占總陽性數(shù)的43.66%；季節(jié)性H3N2陽性1 724份，占29.08%；甲型H1N1為1 600份，占26.99%。按年統(tǒng)計(jì)，2015年陽性率最高(20.15%)，2013年次之(14.53%)，2014年陽性率最低(12.36%)，詳見表1、圖1。按標(biāo)本來源分，哨點(diǎn)醫(yī)院送檢的ILI標(biāo)本36 193份，陽性率15.41%；非哨點(diǎn)醫(yī)院送檢的ILI標(biāo)本856份，陽性率22.43%；暴發(fā)疫情報(bào)告病例送檢的ILI標(biāo)本283份，陽性率56.89%；詳見表2。

2013-2015年，甘肅省共報(bào)告流感/ILI暴發(fā)疫情23起，其中20起發(fā)生在中小學(xué)校及托幼機(jī)構(gòu)，占總疫情數(shù)的86.96%。所有疫情共檢測(cè)標(biāo)本283份，流感病毒核酸檢測(cè)陽性161份，陽性率為56.89%，其中96份乙型、42份季節(jié)性H3N2、22份甲型H1N1、1份混合型(季節(jié)性H3N2和乙型流感混合)。所有疫情共報(bào)告發(fā)病數(shù)718例，死亡2例，其中甲型H1N1流感暴發(fā)疫情6起、死亡2例，其他型流感暴發(fā)疫情17例。

表1 2013-2015年度甘肅省流感病毒核酸檢測(cè)結(jié)果

注：N:數(shù)量；L:占總陽性數(shù)的百分比

Note: N: number; L: percentage of total positive number

圖1 2013年4月-2016年3月甘肅省流感流行特征Fig.1 Influenza epidemic characteristics of Gansu province from April 2013 to March 2016

標(biāo)本來源Specimensource檢測(cè)數(shù)Testnumber陽性數(shù)Positivenumber陽性率Positiverate(%)甲型N1N1A(H1N1)季節(jié)性H3N2SeasonalH3N2乙型InfluenzaB混合型Mixedtype哨點(diǎn)醫(yī)院Sentinelhospital36193557615.4114851652242711ILI暴發(fā)疫情ILIoutbreak28316156.892242961非哨點(diǎn)醫(yī)院Nonsentinelhospital85619222.439330654合計(jì)total37332592915.8816001724258816

注：哨點(diǎn)醫(yī)院采集標(biāo)本陽性率顯著低于ILI暴發(fā)疫情的陽性率(χ2=364.593，P<0.01)

Note: Positive rate of sentinel hospitals was significantly lower than that of the outbreak of ILI (χ2=364.593,P<0.01)

表3 2013-2015年度甘肅省不同年齡人群ILI標(biāo)本核酸檢測(cè)

2.2 分年齡ILI的檢測(cè)結(jié)果 將ILI標(biāo)本按年齡分為5組(0-、5-、15-、25-和60-歲組)統(tǒng)計(jì)，0-4歲組流感病毒陽性率最低(12.78%)；5-14歲組流感病毒陽性率最高(24.75%)；60歲以上組陽性數(shù)最少，占總陽性數(shù)的3.85%。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，各年齡組ILI病例中病毒核酸陽性率與總體陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=663.013，P<0.01)；5-14歲組病例流感病毒核酸陽性率與其他年齡組陽性率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=96.972-622.864，P<0.01)；其余各年齡組流感病毒核酸陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.042-5.436，P>0.05)詳見表3。

2.3 流感病毒分離結(jié)果 2013-2015年甘肅省對(duì)6285份標(biāo)本進(jìn)行了流感病毒分離培養(yǎng)，分離到流感病毒1 630株，檢出率為25.93%；其中395株甲型H1N1、524株季節(jié)性H3N2、342株乙型Victorian系、367株乙型Yamagata系；有兩株待定型，其中1株為甲型H1N1和乙型Victorian系混合株。全甘肅省除敦煌市外其余15家網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室均具備病毒分離能力，2015年全省分離病毒數(shù)最多(765株)，檢出率為43.61%，三個(gè)監(jiān)測(cè)年度流感病毒檢出率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=468.055，P<0.01)，詳見表4。

表4 2013-2015年度甘肅省流感病原學(xué)監(jiān)測(cè)陽性率及病毒型別分布

2.4 病原學(xué)分布特征 2013-2015年分離到的流感陽性毒株數(shù)分別為356株、509株和765株。2013年4-10月僅檢出2例甲型H1N1，11-12月以乙型Yamagata系為主；隨后2014年1-5月甲型H1N1毒株增多，與乙型Yamagata系共同成為優(yōu)勢(shì)株，6-11月甘肅省未有陽性毒株檢出，12月份開始季節(jié)性H3N2突然增多直至2015年2月底一直為優(yōu)勢(shì)毒株；2015年3-5月乙型Yamagata系又重新取代季節(jié)性H3N2而成為優(yōu)勢(shì)株，6-11月全省亦未有陽性毒株檢出，至此，甲型H1N1在甘肅省內(nèi)連續(xù)19個(gè)月未檢出陽性，12月份檢出2例乙型Yamagata系；2016年1-3月，甲型H1N1、乙型流感同時(shí)作為優(yōu)勢(shì)株而持續(xù)增加，且乙型Victorian系比例均大于乙型Yamagata系，同時(shí)，季節(jié)性H3N2也經(jīng)常檢出，且在2月份檢出達(dá)到20株。

2009年甲型H1N1流感流行之后，甘肅省流感流行季節(jié)流感流行毒株主要以乙型和季節(jié)性H3N2型交替形式出現(xiàn)，其中乙型Victorian系和乙型Yamagata系也呈交替流行，直至2015監(jiān)測(cè)年度后期，甲型H1N1型流感毒株又重新出現(xiàn)并與其他型系毒株共同流行。

3 討論

2009年以來，甘肅省為應(yīng)對(duì)流感防控新形勢(shì)，形成了覆蓋全省所有地州市的高效、敏感的流感監(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)。從2013-2015年ILI年齡分布來看，甘肅省流感發(fā)病例數(shù)最高的人群是0-4歲的嬰幼兒，其次為5-14歲的青少年兒童，這與我省前幾年監(jiān)測(cè)結(jié)果[1]相同，也與我國其他地區(qū)及歐美北方地區(qū)流感流行特征研究結(jié)果[2-4]相一致。高度重視醫(yī)療機(jī)構(gòu)ILI標(biāo)本的采樣質(zhì)量，可以一定程度提高ILI陽性率。

甘肅省為典型北方省份，夏秋季(5-9月份)流感樣病例數(shù)少，流感毒株檢出率低；每年11月份開始ILI呈上升趨勢(shì)，12月份和次年2月份流行達(dá)到高峰，呈明顯的季節(jié)性、單峰性流行，流行強(qiáng)度受當(dāng)年流感病毒活動(dòng)優(yōu)勢(shì)型別、人群免疫狀況等因素的影響；提示甘肅省冬春季12-2月份流感高峰前需加強(qiáng)流感監(jiān)測(cè)，特別加強(qiáng)學(xué)校等學(xué)齡兒童聚集場(chǎng)所的監(jiān)測(cè)工作，防止暴發(fā)疫情的發(fā)生。

2014年5月份之后甘肅省流感流行主要以B型和A(H3N2)型為主，到2016年1月份以后甲型H1N1再次流行，在2009年之前人群中流行的季節(jié)性H1N1流感從2010年之后再未檢測(cè)到，可能已經(jīng)被甲型H1N1流感毒株所替代。今后甘肅省流感監(jiān)測(cè)需嚴(yán)防甲型H1N1和其他流感舊毒株的再流行及新型毒株的出現(xiàn)。毒株的雞胚分離培養(yǎng)及暴發(fā)疫情處置需要完善。

傳統(tǒng)的數(shù)據(jù)收集和分析方法結(jié)合大數(shù)據(jù)在公共衛(wèi)生領(lǐng)域的應(yīng)用必然會(huì)改變現(xiàn)在疫病防控被動(dòng)的局面[5]。加強(qiáng)網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制，切實(shí)做好流感監(jiān)測(cè)工作，及時(shí)掌握流感的活動(dòng)情況，明確流行株并及早發(fā)現(xiàn)變異株，為季節(jié)性流感的流行、流感大流行的預(yù)警預(yù)測(cè)提供依據(jù)[6，7]。

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Analysis on the pathogenic characteristics of influenza viruses in Gansu Province，2013-2015

LiBaodi,LiHongyu,ZhangHui,YuDeshan,HeJian

GansuProvincialCenterforDiseaseControlandPrevention,Lanzhou730000,China

HeJian,Email: 1014770674@qq.com;LiHongyu,Email:hongyuligs@163.com

ObjectiveToofferascientificbasisfortheinfluenzapreventionandcontrol,weanalysedtheinfluenza(flu)characteristicsofGansuprovinceduringtheyearof2013to2015.MethodsWedetectedthesamplesoffluvirus,whichcollectedfromthethroatswabsofoutpatientswithinfluenza-likeillness(ILI)inthe19nationalinfluenzasurveillancesentinelhospitalsoftheGansuprovince,byfluorescencequantitativePCRtechnique,thepositivespecimenswereusedtoisolateandidentifytheviruswiththecaninekidneycells(MDCK).ResultsAftertheinfluenzavirusnucleicaciddetectionsof37 332ILIthroatswabs,wegot5 928positivesamples,andthepositiveratewas15.88%.Fromthe14thweekof2013tothe13thweekof2016,thepositiveratesoftheinfluenzavirusnucleicacidwereinturnasfollowing:14.52%, 12.36%and20.15%respectively.Accordingtoagegroups,theresultsshowedthatthelowestpositiverateof12.78%wasfromthebabiesbelow5yearsold,whichwassignificantlylowerthanthatoftheotheragegroups.Thehighestpositiverateof24.75%wascamefromthegroupof15-24yearsold. 1 630influenzaviruswasisolatedfrom6 285specimens,thepositiveratewas25.93%,whichincluding395A(H1N1), 524seasonalH3N2, 342BVictorianvirusand367BYamagatavirus.ConclusionsTheepidemictypesofinfluenzavirusinGansuprovinceperformintheruleofalternativespreading.Soitisnecessarytotakeactivemeasurestopreventandcontrolhumaninfectionwiththeinfluenzavirus.

Influenzavirus;Crowdmonitoring;Virusculture;Polymerasechainreaction

何健，Email：1014770674@qq.com；李紅育，Email：hongyuligs@163.com

10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2016.05.008

流感病毒；人群監(jiān)測(cè)；病毒培養(yǎng)；聚合酶鏈反應(yīng)

國家“十二五”艾滋病和病毒性肝炎等重大傳染病防治科技重大專項(xiàng)(2012ZX10004-208)

2016-05-20)