劉冰，王玲玲，童貝，馮久慧，生威，張燕，王碩

（食品營(yíng)養(yǎng)與安全教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津科技大學(xué)食品工程與生物技術(shù)學(xué)院，天津300457）

沙丁胺醇免疫層析試紙條的應(yīng)用研究

劉冰，王玲玲，童貝，馮久慧，生威，張燕，王碩*

（食品營(yíng)養(yǎng)與安全教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津科技大學(xué)食品工程與生物技術(shù)學(xué)院，天津300457）

用膠體金和納米金-聚苯胺-納米金微球（GPG）分別標(biāo)記制備的沙丁胺醇多克隆抗體，噴涂在玻璃纖維墊上，將包被抗原和羊抗兔二抗分別固定到硝酸纖維素膜上作為檢測(cè)線（T-Line）和質(zhì)控線（C-Line），干燥后組裝試紙條，建立免疫層析分析方法?？疾闄z測(cè)試紙條的靈敏度和穩(wěn)定性，并應(yīng)用于動(dòng)物源性食品（豬肉、牛肉、羊肉和豬肝）中沙丁胺醇?xì)埩舻目梢暬瘷z測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，沙丁胺醇膠體金標(biāo)記免疫層析分析方法的樣品檢出限為5μg/L，沙丁胺醇GPG標(biāo)記免疫層析分析方法的樣品檢出限為10μg/L。

沙丁胺醇；膠體金；納米金-聚苯胺-納米金微球；免疫層析試紙條

沙丁胺醇（Salbutamol，SAL），又名咳喘寧、舒喘寧、索布胺等，是β-腎上腺素受體激動(dòng)劑的一種，臨床上最初被用于治療和預(yù)防呼吸系統(tǒng)疾病和支氣管哮喘［1-2］。將沙丁胺醇作為生長(zhǎng)促進(jìn)劑飼喂動(dòng)物，會(huì)導(dǎo)致部分藥物殘留在動(dòng)物體內(nèi)。沙丁胺醇對(duì)于患有心腦血管疾病的人危害較大，對(duì)于糖尿病患者，容易導(dǎo)致乳酸中毒。研究表明，沙丁胺醇會(huì)損害母豬的生殖系統(tǒng)［3-4］。我國(guó)禁止將沙丁胺醇及其鹽、酯應(yīng)用于所有食用動(dòng)物中［5］。歐盟（European Union）禁止沙丁胺醇等β-興奮劑的所有用途［6］。

目前關(guān)于動(dòng)物組織中沙丁胺醇的檢測(cè)方法比較多，膠體金免疫層析技術(shù)在沙丁胺醇?xì)埩艨焖贆z測(cè)方面得到了廣泛應(yīng)用［7-9］。曾紅惠等［7］建立了HPLC法同時(shí)檢測(cè)肉制品中的沙丁胺醇、克倫特羅和萊克多巴胺。Degroodt JM等［8］建立了免疫親和層析（IAC）-高效液相色譜法檢測(cè)肝臟中的沙丁胺醇?xì)埩?。試?yàn)采用0.01mol/L的鹽酸提取樣品，經(jīng)IAC法對(duì)提取液進(jìn)行凈化。得到SAL的定量限為1μg/kg，建立的標(biāo)注曲線在0.2 ng/mL～10 ng/mL范圍內(nèi)線性良好，回收率為67％～80％。Ventura R等［9］建立了超高效液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)尿液中的沙丁胺醇進(jìn)行直接定量檢測(cè)。吳巧麗等［10］采用GICA方法檢測(cè)動(dòng)物組織和飼料中的沙丁胺醇?xì)埩?。采用金增?qiáng)技術(shù)，金顆粒聚集的越多，檢測(cè)信號(hào)就越強(qiáng)。在酸性介質(zhì)中，采用氯金酸水溶液氧化苯胺，使苯胺單體發(fā)生氧化聚合，氯金酸被還原成膠體金，包埋在聚苯胺中，形成納米金-聚苯胺復(fù)合物。再向聚合物中添加粒徑為20 nm左右的膠體金溶液，通過(guò)物理吸附形成納米金-聚苯胺-納米金微球（GPG）。該材料被Cui YL等［11］應(yīng)用于電化學(xué)免疫傳感器中檢測(cè)促甲狀腺激素。材料具有良好的電化學(xué)性能和較大的表面積，能結(jié)合更多的HRP標(biāo)記二抗，從而提高信號(hào)強(qiáng)度。對(duì)促甲狀腺激素的檢出限為0.005μIU/mL。試驗(yàn)以沙丁胺醇作為目標(biāo)物，比較膠體金和GPG標(biāo)記材料所建立的免疫層析分析方法。

1　材料與方法

1.1材料與儀器

沙丁胺醇抗血清：天津科技大學(xué)食品營(yíng)養(yǎng)與安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室自制；沙丁胺醇（SAL）瑪雅試劑；羊抗兔二抗、氯金酸、檸檬酸三鈉、牛血清白蛋白（OVA）、鹽酸克倫特羅（CL）、異丙腎上腺素（ISOP）、萊克多巴胺（RAC）、特布他林（TER）均購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；硝酸纖維素膜（135NC膜）購(gòu)自美國(guó)Millipore公司；樣品墊、結(jié)合墊、吸水紙以及PVC底板均購(gòu)自上海金標(biāo)科技有限公司；豬肉、牛肉、羊肉、豬肝均購(gòu)自天津某超市。

蛋白純化儀：美國(guó)BIO-RAD公司；紫外分光光度計(jì)：美國(guó)Varian公司；透射電子顯微鏡：日本電子光學(xué)公司；真空干燥箱：天津三水儀器有限公司；雙維往復(fù)劃膜儀、全自動(dòng)斬切機(jī)：上海金標(biāo)生物科技有限公司。

1.2方法

1.2.1沙丁胺醇包被抗原的制備

1.2.1.1沙丁胺醇半抗原的制備

準(zhǔn)確稱取沙丁胺醇200mg（0.836mmol），置于100mL圓底燒瓶中，加入12mL無(wú)水乙醇（使用前經(jīng)過(guò)脫水處理）超聲處理使其完全溶解。稱取200mg（2.00mmol）丁二酸酐，在磁力攪拌條件下加入到上述溶液中，室溫反應(yīng)3 h～4 h，反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液旋干，將附著于燒杯內(nèi)壁上的固體刮下，用無(wú)水乙醇洗滌3次，過(guò)濾收集固體，真空干燥除去溶劑，盛裝于棕色瓶中，4℃冰箱保存?zhèn)溆茫?2］。

1.2.1.2沙丁胺醇包被抗原的制備

采用碳二亞胺法（EDC法）制備包被原。準(zhǔn)確稱取沙丁胺醇丁二酸衍生物5mg（0.015mmol），1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺（0.022mmol）4.2mg，用0.5mL 130mmol/L碳酸氫鈉緩沖液溶解，室溫下攪拌活化30min，此反應(yīng)液命名為A液。準(zhǔn)確稱取10mg卵清蛋白（OVA），用2mL碳酸氫鈉緩沖液（130mmol/L）溶解，在緩慢攪拌條件下，吸取A液300μL加入到蛋白溶液中（每2min加5μL，冰浴降溫），置于4℃冰箱中攪拌過(guò)夜。將反應(yīng)所得的偶聯(lián)物裝入透析袋中，4℃條件下用磷酸緩沖液（PB）透析3 d，取出分裝，每1mL加入5μL 10％疊氮鈉，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2沙丁胺醇多克隆抗體的純化

采用ProteinA-sephoarse 4B親合層析柱對(duì)沙丁胺醇抗血清進(jìn)行純化處理，在4℃條件下采用PB緩沖液透析3 d，可以得到接近分析純的抗體。

1.2.3標(biāo)記材料的制備

1.2.3.1膠體金的制備

采用檸檬酸三鈉還原法制備膠體金。向制備膠體金的錐形瓶中加入足量的雙蒸水，于恒溫加熱磁力攪拌器上加熱至沸騰，約1min后，倒掉沸水。量取100mL雙蒸水倒入錐形瓶，用記號(hào)筆標(biāo)記水位，去除1mL水，加入1mL 1％的氯金酸溶液，混勻后加熱至沸騰。在攪拌條件下迅速向溶液中加入2.25mL 1％的檸檬酸三鈉溶液。計(jì)時(shí)約2min內(nèi)，溶液顏色發(fā)生變化，最終呈現(xiàn)穩(wěn)定的酒紅色。繼續(xù)煮沸15min，冷卻至室溫，加入雙蒸水定容至100mL，轉(zhuǎn)移到藍(lán)蓋瓶中，于4℃避光保存［15］。觀察所制備的膠體金溶液的顏色、透明度、分散狀態(tài)、有無(wú)沉淀等，以初步判定膠體金的質(zhì)量。利用透射電鏡對(duì)膠體金顆粒的超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行掃描，觀察膠體金的粒徑大小、粒徑分布是否均勻等［13-14］。

1.2.3.2GPG的制備及質(zhì)量鑒定

配制含有0.01mol/L和0.1mol/L苯胺的鹽酸溶液。比較苯胺的含量對(duì)反應(yīng)的影響。分別取10mL含0.01mol/L和0.1mol/L苯胺的HCl溶液于25mL圓底燒瓶中，在磁力攪拌條件下加入3mL，1mmol/LHAuCl4水溶液，室溫條件下反應(yīng)40min（充入N2保護(hù)，避光反應(yīng)）。將反應(yīng)液離心，收集沉淀（15 000 r/min，30min），加入3mL水復(fù)溶，沉淀洗滌3次。最終將沉淀重懸于1mL水中。將溶液移至小玻璃瓶?jī)?nèi)，逐滴加入3mL膠體金溶液，室溫下輕輕振搖過(guò)夜（沖入N2保護(hù)，避光反應(yīng)）。離心收集GPG（15000 r/min，30min），用1mL水重懸，于4℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆?。直接觀察所制備的納米金-聚苯胺-納米金微球（GPG）的顏色、透明度和分散狀態(tài)，以初步判定GPG的質(zhì)量。利用透射電子顯微鏡對(duì)GPG顆粒的結(jié)構(gòu)進(jìn)行掃描，觀察顆粒的粒徑大小以及分布狀態(tài)等［15］。

1.2.4標(biāo)記抗體方法的確定

1.2.4.1膠體金標(biāo)記抗體

取1mL膠體金于離心管中，用K2CO3調(diào)節(jié)pH值為9，加入20μL抗體，混勻后，于4℃靜置1 h。每管加入20μL20％的BSA溶液和10μL20％的PEG-20000溶液，室溫靜置20min。將靜置后的溶液于4℃，2000 r/min條件下離心15min，保留上清液，除去標(biāo)記過(guò)程中形成的聚合物。接下來(lái)將上清液于4℃，10 000 r/min條件下離心30min，保留沉淀，未標(biāo)記的抗體及金粒子存在于上清中。將沉淀用金標(biāo)工作液稀釋適當(dāng)倍數(shù)，4℃冰箱保存［16］。

1.2.4.2GPG標(biāo)記抗體

取1mLGPG溶液，冰浴超聲5min，用0.2mol/L的K2CO3溶液調(diào)節(jié)pH為8，混勻后加入20μLSAL抗體，快速混勻，置于4℃冰箱內(nèi)靜置過(guò)夜（14 h～16 h）。每毫升加入20μL 20％的BSA溶液和10μL 20％的PEG-20000溶液，混勻后室溫靜置20min。在11 063 r/min，4℃條件下離心20min，保留沉淀，棄去上清。沉淀用金標(biāo)抗體稀釋液稀釋。

用標(biāo)品稀釋液配制一系列濃度的沙丁胺醇標(biāo)準(zhǔn)品溶液：1、2、5、10μg/L，取100μL標(biāo)準(zhǔn)品溶液用于試紙條上樣，觀察試紙條顯色情況，以檢測(cè)線顏色與空白對(duì)照檢測(cè)線顏色有明顯差別時(shí)的最低標(biāo)準(zhǔn)品濃度作為試紙條檢出限。

1.2.6試紙條特異性的確定

本試驗(yàn)選取與沙丁胺醇結(jié)構(gòu)類似的五種β-興奮劑類獸藥：鹽酸克倫特羅（CLB）、異丙腎上腺素（ISOP）、特布他林（TER）、萊克多巴胺（RAC）和多巴酚丁胺（DOB），用建立的膠體金標(biāo)記免疫層析試紙條方法進(jìn)行檢測(cè)，以確定所建立的試紙條檢測(cè)方法的特異性。

1.2.7試紙條實(shí)際樣品的檢測(cè)

1.2.7.1樣品基質(zhì)處理方法

本實(shí)驗(yàn)選取市售的豬肉、牛肉、羊肉和豬肝作為實(shí)際樣品，具體基質(zhì)處理方法如下：取1 g均質(zhì)后的樣品于50mL離心管中，加入1mL 0.1mol/L的鹽酸溶液，超聲15min，再加入4mLPBS緩沖液，高速混旋3min，于6 137 r/min，10℃條件下離心10min，吸取上清液，用1mol/L氫氧化鈉溶液將pH值調(diào)至中性（若有沉淀，在6 861 r/min，10℃條件下離心10min），取上清液直接用于試紙條檢測(cè)。

1.2.7.2樣品添加回收試驗(yàn)

661 Prevalence of skin diseases among marine-training soldiers stationed in east coastal area and its influencing factors

樣品豬肉、牛肉、羊肉、豬肝經(jīng)試劑盒驗(yàn)證沙丁胺醇含量低于試劑盒檢出限，作為空白基質(zhì)進(jìn)行添加回收實(shí)驗(yàn)。豬肉、牛肉、羊肉、豬肝4種陰性樣品中分別添加0、5、10、50μg/kg的沙丁胺醇標(biāo)準(zhǔn)品，按照上述基質(zhì)處理方法處理后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，觀察回收結(jié)果。

2　結(jié)果與討論

2.1標(biāo)記材料的質(zhì)量鑒定

制備出的膠體金溶液為酒紅色，肉眼可見(jiàn)溶液澄清透明，狀態(tài)穩(wěn)定，表面無(wú)懸浮雜質(zhì)，溶液底部無(wú)聚沉顆粒，初步說(shuō)明制備的膠體金質(zhì)量良好。利用透射電子顯微鏡對(duì)膠體金顆粒的超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行掃描，結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1　標(biāo)記材料的透射電鏡掃描圖Fig.1 Transm ission electronm icroscopy（TEM）of labelled materials

從圖中可以看出，膠體金粒徑平均粒徑在18 nm左右，與理論值相符。膠體金顆粒呈現(xiàn)球形，粒徑均一。目視該GPG材料為黑色溶液，狀態(tài)較為均一，靜置一周后出現(xiàn)沉淀，但是搖勻后仍呈現(xiàn)均一狀態(tài)，不影響使用。從其透射電鏡掃描圖可見(jiàn)膠體金顆粒吸附在聚苯胺表面。

2.2試紙條檢出限的確定

配制一系列濃度的沙丁胺醇標(biāo)準(zhǔn)品溶液，采用優(yōu)化出的最佳條件組裝試紙條，隨著標(biāo)準(zhǔn)品濃度的升高，試紙條檢測(cè)線顏色逐漸變淺直至消線。標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次是0、1、2、5、10μg/L，膠體金標(biāo)記抗體的試紙條結(jié)果如圖2所示。

圖2　沙丁胺醇膠體金試紙條檢出限的確定Fig.2 The detection lim itof colloidalgold strips for SAL

當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品中沙丁胺醇的濃度為2μg/L時(shí)，膠體金試紙條檢測(cè)線明顯比陰性對(duì)照淺，當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品中沙丁胺醇的濃度達(dá)到10μg/L時(shí)，試紙條檢測(cè)線消失。經(jīng)過(guò)多次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，定義采用鋪墊組裝方式建立的膠體金標(biāo)記免疫層析試紙條的目視檢出限為2μg/L。標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次是0、2、5、10、20μg/L，膠體金及GPG標(biāo)記抗體的試紙條結(jié)果如圖3所示。

圖3　沙丁胺醇GPG試紙條檢出限的確定Fig.3 The detection lim itof GPG strips for SAL

當(dāng)沙丁胺醇標(biāo)準(zhǔn)品濃度為5μg/L時(shí)，GPG試紙條檢測(cè)線與空白對(duì)照檢測(cè)線顏色有明顯差別，當(dāng)沙丁胺醇標(biāo)準(zhǔn)品濃度為10μg/L時(shí)，試紙條檢測(cè)線消線。經(jīng)過(guò)多次重復(fù)試驗(yàn)，定義GPG標(biāo)記免疫層析試紙條的目視檢出限為5μg/L。

2.3試紙條特異性的確定

選擇了5種與沙丁胺醇結(jié)構(gòu)類似的β-興奮劑類獸藥（克倫特羅、特布他林、異丙腎上腺素、萊克多巴胺、多巴酚丁胺）進(jìn)行交叉反應(yīng)實(shí)驗(yàn)。當(dāng)克倫特羅的濃度為10μg/L時(shí)，試紙條檢測(cè)線消失，說(shuō)明該抗體與克倫特羅交叉反應(yīng)明顯，可同時(shí)用于克倫特羅的檢測(cè)。當(dāng)特布他林的濃度為200μg/L時(shí)，試紙條檢測(cè)線消失，說(shuō)明該抗體與特布他林存在交叉反應(yīng)。對(duì)于其他三種β-興奮劑和八種常見(jiàn)獸藥，當(dāng)其濃度達(dá)到1000μg/L時(shí)，試紙條的檢測(cè)線與質(zhì)控線顏色依然一致，說(shuō)明該抗體與其他3種β-興奮劑類獸藥和八種常見(jiàn)獸藥基本無(wú)交叉反應(yīng)。

2.4試紙條實(shí)際樣品的檢測(cè)

向豬肉、牛肉、羊肉、豬肝4種陰性樣品中分別添加沙丁胺醇標(biāo)準(zhǔn)品，用HCl/PBST進(jìn)行提取和稀釋即可消除基質(zhì)影響。對(duì)于膠體金標(biāo)記的試紙條，標(biāo)準(zhǔn)品添加濃度依次是0、5、10、50μg/L，4種樣品的試紙條結(jié)果如圖4所示。

圖4　4種樣品的添加回收試驗(yàn)結(jié)果Fig.4 The recovery experiments resultof four spiked samples

樣品當(dāng)添加濃度為5μg/L時(shí)，試紙條檢測(cè)線顏色與空白對(duì)照檢測(cè)線顏色有明顯差別，檢測(cè)線顏色隨著沙丁胺醇添加濃度的增大而逐漸變淺，說(shuō)明樣品提取方法有效。經(jīng)過(guò)多次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，最終確定所建立的膠體金標(biāo)記免疫層析試紙條方法在實(shí)際樣品中的檢出限為5μg/L。對(duì)于GPG標(biāo)記的試紙條，標(biāo)準(zhǔn)品添加濃度依次是0、10、25、50μg/L，4種樣品的試紙條結(jié)果如圖5所示。

圖5　4種樣品的添加回收試驗(yàn)結(jié)果Fig.5 The recovery experiments resultof four spiked sam ples

經(jīng)過(guò)多次試驗(yàn)，GPG標(biāo)記免疫層析試紙條方法在實(shí)際樣品中的檢出限為10μg/L。

3　結(jié)論

總而言之，論文選取膠體金和GPG兩種材料進(jìn)行抗體標(biāo)記，優(yōu)化建立免疫層析試紙條方法，并用于動(dòng)物源性食品中沙丁胺醇?xì)埩舻臋z測(cè)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)得出，膠體金標(biāo)記免疫層析試紙條方法檢出限為2.0μg/L，樣品檢出限為5μg/L，檢測(cè)時(shí)間為5min；GPG標(biāo)記免疫層析分析方法檢出限為5.0μg/L，樣品檢出限為10μg/L，檢測(cè)時(shí)間為5min。通過(guò)比較發(fā)現(xiàn)：傳統(tǒng)的膠體金在實(shí)驗(yàn)體系中靈敏度較高。GPG標(biāo)記抗體方法和用量與膠體金一樣，但最后GPG標(biāo)記抗體最佳稀釋倍數(shù)是6倍稀釋，膠體金是4倍稀釋，相比較而言，GPG標(biāo)記比膠體金節(jié)約抗體。目前免疫膠體金技術(shù)發(fā)展很快，也相當(dāng)成熟，實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用膠體金作為標(biāo)記物靈敏度略高，而GPG納米材料，批間差異小，穩(wěn)定性優(yōu)于膠體金。在今后的研究中，可以嘗試將膠體金與GPG復(fù)配使用，標(biāo)記不同的抗體。膠體金在硝酸纖維素膜上呈現(xiàn)紅色條帶，GPG在硝酸纖維素膜上呈現(xiàn)黑色條帶，用于多殘留檢測(cè)時(shí)，由于檢測(cè)線顏色不同，可以更加直觀清晰地觀察到檢測(cè)結(jié)果，實(shí)現(xiàn)多元化檢測(cè)。

［1］劉宣兵，龐玉芳，侯玉澤，等．沙丁胺醇的毒副作用及其殘留檢測(cè)［J］．上海畜牧獸醫(yī)通訊，2008，26（4）：83-85

［2］Zhang GP，Wang XN，Yang JF，et al．Development of an immunochromatographic lateral flow test strip for detection of beta-adrenergic agonistClenbuterol residues［J］．Journal of Immunological Methods，2006，312（1/2）：27-33

［3］邱陽(yáng)生，楊根海，何方洋．β-興奮劑沙丁胺醇及其檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展［J］．動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2002，23（4）：50-52

［4］中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部.農(nóng)業(yè)部第235號(hào)公告．動(dòng)物性食品中獸藥最高殘留限量［S］．北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2002：27

［5］Council Directive 96/22/EC．Concerning the prohibition on the use in stockfarming of certain substances having a hormonal or thyreostatic action and of beta-agonists and repealing Directives 81/602/ EEC，88/146/EECand 88/299/EEC［S］.Off JEuropean Communities，1996，L125，3-9

［6］Sheu SY，Lei YC，Tai YT，et al．Screening of salbutamol residues in swinemeat and animal feed by an enzyme immunoassay in Taiwan［J］．Analytica Chimica Acta，2009，654（2）：148-153

［7］曾紅惠，黎少映，馮耀基，等．HPLC法同時(shí)測(cè)定肉制品中沙丁胺醇、萊克多巴胺和克侖特羅［J］．醫(yī)學(xué)動(dòng)物防制，2009，25（12）：940-944

［8］Degroodt JM，Wyhowskide BB，Srebrnik S．Immunoaffinity-chromatography purication of salbutamol in liverand HPLC-fluorometric detection at trace residue level［J］．Zeitschrift fur Lebensmittel-Untersuchungund-Forschung，1992，195（6）：566-568

［9］Ventura R，Ramirez R，Monfort N，etal．Ultraperformance liquid chromatography tandem mass spectrometric method for direct quantification ofsalbutamol in urine samples in doping control［J］．Journal of Pharmaceuticaland BiomedicalAnalysis，2009，50（5）：886-890

［10］吳巧麗，葉春生．膠體金免疫層析技術(shù)快速檢測(cè)沙丁胺醇?xì)埩簦跩］．現(xiàn)代食品科技，2012，28（11）：1595-1599

［11］Cui YL，Chen HF，Hou L，et al．Nanogold-polyaniline-nanogold microspheres-functionalizedmolecular tags for sensitive electrochemicalimmunoassayofthyroid-stimulatinghormone［J］．Analytica Chimica Acta，2012，738（1）：76-84

［12］Thobhani S，Attree S，Boyd R，et al．Bioconjugation and characterisation of gold colloid-labelled proteins［J］．Journal of Immunological Methods，2010，356（1/2）：60-69

［13］Frens G．Controlled nucleation for the regulation of the particle size inmonodispersegold suspensions［J］．Nature（Physical Science），1973，241（105）：20-22

［14］Shi CG，Zhao SQ，Zhang K，et al．Preparation of colloidal gold immunochromatography strip for detection ofmethamidophos residue［J］．Journal of Environmental Sciences-China，2008，20（11）：1392-1397

［15］徐浩，延衛(wèi)，馮江濤．聚苯胺的合成與聚合機(jī)理研究進(jìn)展［J］．化工進(jìn)展，2008，27（10）：1561-1568

［16］Thobhani S，Attree S，Boyd R，et al．Bioconjugation and characterisation of gold colloid-labelled proteins［J］．Journal of Immunological Methods，2010，356（1/2）：60-69

Study on the Application of Immunochromatographic Test Strip for the Determ ination of Salbutamol

LIU Bing，WANG Ling-ling，TONG Bei，F(xiàn)ENG Jiu-hui，SHENG Wei，ZHANG Yan，WANG Shuo*
（Key Laboratory of Food Nurtrition and Safety Ministry of Education ofChina，The Schoolof Food Engineering and Biotechnology of Tianjin University ofScience and Technology，Tianjin 300457，China）

Colloidal gold and nanogold-polyaniline-nanogold microspheres（GPGs）were labeled purified salbutamolpolyclonalantibodies，respectively.And then theywere spraide on glass fibermat，the coating antigen and goatanti-rabbits econdary antibody were fixed to nitrocellulose membrane as test line and control line respectively.After drying assembled teststrip，the immunochromatographic strip for the determination ofsalbutamol were deceloped.The sensitivity and stability of the test strip were studied and it was applied in the visual detection of salbutamol residued in animal food（pork，beef，lamb and liver）.Itwas found that the detection limitof colloidalgold immunochromatographic teststripwere 5μg/L in samples，while the detection limitof immunochromatographic rapid teststrip labeled by GPGwere10μg/L.

salbutamol；colloidalgold；GPG；immunochromatographic teststrip

10.3969/j.issn.1005-6521.2016.18.028

質(zhì)檢公益性行業(yè)科研專項(xiàng)（201310146）

劉冰（1979—），女（漢），副教授，博士，研究方向：食品安全檢測(cè)。

王碩（1969—），男，教授，研究方向：食品安全檢測(cè)。

2015-11-04