周小玲　顏瓊嫻　童海鷗　周傳社　湯少勛　韓雪峰　譚支良*

(1.中國科學(xué)院亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所，亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)過程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南省畜禽健康養(yǎng)殖工程技術(shù)中心，農(nóng)業(yè)部中南動(dòng)物營養(yǎng)與飼料科學(xué)觀測實(shí)驗(yàn)站，長沙410125；2.中國科學(xué)院大學(xué)，北京100049；3.塔里木大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，阿拉爾843300；4.湖南省植物功能成分利用協(xié)同創(chuàng)新中心，長沙410128；5.湖南畜禽安全生產(chǎn)協(xié)同創(chuàng)新中心，長沙410128)

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青稞秸稈對(duì)生長期藏綿羊體增重及免疫指標(biāo)的影響

周小玲1,2,3顏瓊嫻1,4*童海鷗1,4周傳社1,5湯少勛1,5韓雪峰1,4譚支良1,5*

(1.中國科學(xué)院亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所，亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)過程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南省畜禽健康養(yǎng)殖工程技術(shù)中心，農(nóng)業(yè)部中南動(dòng)物營養(yǎng)與飼料科學(xué)觀測實(shí)驗(yàn)站，長沙410125；2.中國科學(xué)院大學(xué)，北京100049；3.塔里木大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，阿拉爾843300；4.湖南省植物功能成分利用協(xié)同創(chuàng)新中心，長沙410128；5.湖南畜禽安全生產(chǎn)協(xié)同創(chuàng)新中心，長沙410128)

本試驗(yàn)用青稞秸稈替代燕麥干草作為唯一粗飼料來源，研究其對(duì)生長期藏綿羊體增重及免疫功能的影響。選擇18只4～5月齡健康河谷型藏綿羊，隨機(jī)分為2組，即：青稞組(青稞秸稈300 g/d+精料300 g/d)和燕麥組(燕麥干草300 g/d+精料300 g/d)。試驗(yàn)期4周，第1周為預(yù)試期，第2～4周為正試期。正試期結(jié)束后，按公母各占1/2原則，各組分別選取6只羊屠宰采樣。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：青稞組與燕麥組藏綿羊的體重、日增重、脾臟重和脾臟指數(shù)均差異不顯著(P>0.05)；青稞組與燕麥組藏綿羊血清中免疫球蛋白(Ig)G、IgA、IgM、溶菌酶含量和酸性磷酸酶活性均差異不顯著(P>0.05)，但青稞組中溶菌酶含量有高于燕麥組的趨勢(P=0.083)；青稞組與燕麥組血清、胸腺和脾臟白細(xì)胞介素(IL)-2、IL-4、IL-6、IL-10和干擾素γ(IFN-γ)含量均差異不顯著(P>0.05)。綜合來看，與燕麥干草相比，飼喂青稞秸稈不會(huì)降低生長期藏綿羊的體增重及免疫性能，且有提高機(jī)體非特異性免疫因子(溶菌酶)含量的潛力，可作為藏綿羊的粗飼料來源。

青稞秸稈；體增重；免疫指標(biāo)；藏綿羊

粗飼料是青藏高原地區(qū)畜牧業(yè)發(fā)展中的主要制約因素，近年來青稞籽實(shí)資源的開發(fā)利用產(chǎn)生大量青稞秸稈，開發(fā)本地大宗青稞秸稈資源的飼用價(jià)值可緩解尖銳的草畜矛盾。但目前在高原農(nóng)區(qū)青稞秸稈大部分被廢棄或用作燃料，僅少部分作為牧區(qū)冬春季飼草資源開發(fā)利用[1-2]。青稞秸稈纖維較普通麥草更加細(xì)小，纖維長度較一般麥草短，較普通麥草更加適口[3]，在秸稈類粗飼料中營養(yǎng)價(jià)值中等且較全面[4-6]，作為青藏高原地區(qū)的大宗粗飼料具有較廣闊的應(yīng)用前景。

青稞籽實(shí)中β-葡聚糖含量為3.66%～8.62%，而青稞秸稈中β-葡聚糖含量也較高，尤其是西藏地區(qū)的青稞秸稈中高可達(dá)0.096%[7]。β-葡聚糖的活性結(jié)構(gòu)是由葡萄糖單位組成的多聚糖，它們大多數(shù)通過β-1,3和β-1,4糖苷鍵結(jié)合。許多研究認(rèn)為，β-葡聚糖的作用與腸上皮細(xì)胞和腸道相關(guān)的淋巴組織的免疫功能及活性有關(guān)，它能夠促進(jìn)小腸的蠕動(dòng)，提高結(jié)腸中益生菌的數(shù)量[8-11]；活化巨噬細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞等，因此能提高白細(xì)胞介素(IL)、細(xì)胞分裂素和特殊抗體含量，全面刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)，影響機(jī)體免疫機(jī)能[12]。

燕麥干草是青藏高原地區(qū)反芻動(dòng)物中普遍應(yīng)用的優(yōu)質(zhì)飼草，質(zhì)地柔軟，營養(yǎng)價(jià)值高[13-14]。且同青稞秸稈類似，燕麥干草中也含有豐富的β-葡聚糖[15]。Long等[16]報(bào)道，補(bǔ)飼青稞秸稈可提高放牧牦牛的生產(chǎn)性能。但相關(guān)研究不多，且尚無青稞秸稈對(duì)藏綿羊免疫機(jī)能影響的報(bào)道。因此，本試驗(yàn)旨在比較青稞秸稈和燕麥干草對(duì)生長藏綿羊體重、免疫器官發(fā)育及免疫性能的影響，為青稞秸稈的深度開發(fā)利用提供數(shù)據(jù)支撐。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選擇18只4～5月齡體況良好的河谷型藏綿羊[(16.13±2.33) kg]，隨機(jī)分為2組，即：青稞組(青稞秸稈300 g/d+精料300 g/d)和燕麥組(燕麥干草300 g/d+精料300 g/d)。試驗(yàn)期共計(jì)4周，第1周為預(yù)試期，第2～4周為正試期。

1.2飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)羊單欄飼養(yǎng)，日喂2次(09:00和16:00)，每次喂量相同。待精料食盡后，再飼喂切短至3～5 cm的粗料，次日晨飼前收集剩料，自由飲水。參照我國《肉羊飼料標(biāo)準(zhǔn)》(NY/T 816—2004)營養(yǎng)需要配制粉狀配合飼料，飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.3體重、日增重測定

于正試期第1天和正試期最后1天晨飼前空腹稱重，計(jì)算日增重。

1.4樣品采集與分析

正試期間采集飼料樣品，混勻后用于測定干物質(zhì)、粗脂肪、粗蛋白質(zhì)、酸性洗滌纖維、粗灰分、鈣和磷含量，測定參照張麗英[17]的方法。

正試期最后1天晨飼前經(jīng)頸靜脈采集血液，3 500 r/min(相對(duì)離心力1 100×g)離心10 min分離血清后，-20 ℃冷凍保存，用于測試免疫球蛋白(Ig)、溶菌酶含量，酸性磷酸酶(acid phosphatase，ACP)活性和免疫相關(guān)細(xì)胞因子含量；正試期結(jié)束后第2天，根據(jù)公母各占1/2原則，2組分別選擇6只，共12只進(jìn)行屠宰采樣，經(jīng)頸部放血后，分離胸腺和脾臟組織，稱重并采集組織樣于液氮中速凍，后-80 ℃冷凍保存，測定免疫相關(guān)細(xì)胞因子含量。

脾臟指數(shù)=脾臟重量(g)/體重(kg)。

表1　飼糧組成及營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))

1)每千克預(yù)混料含有 One kg of premix contained the following：VA 90 000 IU，VD 20 000 IU，MgSO4·H2O 340 g，F(xiàn)eSO4·7H2O 5 g，CuSO4·5H2O 2 g，MnSO4·H2O 6 g，ZnSO4·H2O 10 g，Na2SeO30.03 g，KI 0.08 g，CoCl·6H2O 0.06 g。

2)營養(yǎng)水平為實(shí)測值。Nutrient levels were measured values.

1.4.1血清Ig含量測定

采用酶聯(lián)免疫分析(ELISA)法(MB-530酶標(biāo)儀，深圳匯松科技發(fā)展有限公司)，按照試劑盒(武漢華美生物工程有限公司)說明書測定血清中IgG、IgA和IgM含量。

1.4.2血清溶菌酶含量和酸性磷酸酶活性測定

溶菌酶含量測定采用ELISA法(MB-530酶標(biāo)儀，深圳匯松科技發(fā)展有限公司)，按照試劑盒(武漢華美生物工程有限公司)說明書測定；酸性磷酸酶活性采用微板法(Infinite M200 PRO酶標(biāo)儀，瑞士TECAN)，按照試劑盒(南京建成生物工程研究所)說明書測定。

1.4.3血清和免疫器官細(xì)胞因子含量測定

采用ELISA法(MB-530酶標(biāo)儀，深圳匯松科技發(fā)展有限公司)，按照試劑盒(武漢華美生物工程有限公司)說明書測定血清、胸腺和脾臟中的IL-2、IL-4、IL-6、IL-10和干擾素γ(IFN-γ)含量。

1.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

經(jīng)Dixon和Grubbs檢驗(yàn)法剔除極端數(shù)據(jù)后，用SPSS 19.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用一般線性模型(GLM)，處理為固定因子，動(dòng)物體重為協(xié)變量，在Alpha=0.05下對(duì)處理效應(yīng)進(jìn)行顯著性分析。

2　結(jié)　果

2.1體重、日增重、脾臟重量及脾臟指數(shù)

由表2可見，青稞組與燕麥組藏綿羊的終末體重、日增重、脾臟重量和脾臟指數(shù)差異不顯著(P>0.05)。

表2　青稞秸稈和燕麥干草對(duì)藏綿羊體重、日增重、脾臟重量及脾臟指數(shù)的影響

2.2血清Ig、溶菌酶含量和酸性磷酸酶活性

由表3可見，青稞組與燕麥組中藏綿羊血清中IgG、IgA、IgM、溶菌酶含量和酸性磷酸酶活性均無顯著差異(P>0.05)，但青稞組中溶菌酶含量有高于燕麥組的趨勢(P=0.083)。

表3　青稞秸稈和燕麥干草對(duì)藏綿羊血清免疫球蛋白、溶菌酶含量和酸性磷酸酶活性的影響

2.3血清、胸腺和脾臟中細(xì)胞因子含量

由表4可見，青稞組與燕麥組的血清、胸腺和脾臟中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10和IFN-γ含量差異均不顯著(P>0.05)。從數(shù)值上比較，在胸腺中，青稞組藏綿羊細(xì)胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IL-10和IFN-γ的含量都高于燕麥組；而在脾臟中，青稞組中上述各細(xì)胞因子含量全都低于燕麥組。

3　討　論

3.1青稞秸稈和燕麥干草對(duì)體重、日增重、脾臟重量及脾臟指數(shù)的影響

青稞秸稈和燕麥干草可以作為青藏高原地區(qū)主產(chǎn)的大宗飼草料。Long等[16]研究發(fā)現(xiàn)補(bǔ)飼青稞秸稈可減少冷季放牧母牦牛體重的損失量；Long等[18]補(bǔ)飼青稞秸稈可使母牦牛產(chǎn)犢率提高19%，改善母牦牛性激素水平；但青稞秸稈在綿羊中飼喂價(jià)值的研究尚未見報(bào)道。經(jīng)實(shí)測，本試驗(yàn)所用青稞秸稈粗蛋白質(zhì)含量1.42%，低于燕麥干草(4.34%)，青稞秸稈中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維含量分別為70.9%和45.8%，高于燕麥干草(分別為59.7%和38.7%)，但粗脂肪含量較接近，青稞秸稈為1.2%，燕麥干草為1.7%，與其他研究測定的各營養(yǎng)成分值接近[4-6]，總體上燕麥營養(yǎng)價(jià)值較優(yōu)。但此試驗(yàn)在每只羔羊補(bǔ)喂精料300 g/d條件下，以青稞秸稈或燕麥干草作為唯一粗飼料來源，發(fā)現(xiàn)對(duì)藏綿羊體重和日增重均無顯著差異，表明青稞秸稈可作為生長期藏綿羊的粗飼料來源。

表4　青稞秸稈和燕麥干草對(duì)藏綿羊血清、胸腺和脾臟細(xì)胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IL-10和IFN-γ含量的影響

免疫器官的重量可作為免疫功能的評(píng)價(jià)指標(biāo)，而臟器指數(shù)常反映器官的生理功能狀態(tài)。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，飼喂青稞秸稈或燕麥干草的藏綿羊脾臟重及脾臟指數(shù)均無顯著差異。β-葡聚糖作為一種功能性多糖，大部分不能被消化吸收，單胃動(dòng)物中主要在大腸內(nèi)被微生物菌群不同程度地發(fā)酵利用，之后主要以糞便的形式代謝排出體外，但少部分可經(jīng)吸收進(jìn)入肝臟、心臟、腎臟等組織[9]，少量β-葡聚糖并不能影響機(jī)體的整體免疫功能[19]。但β-葡聚糖的免疫功能研究多見于豬、禽、鼠及水產(chǎn)動(dòng)物[10-11,20]，在反芻動(dòng)物中較少。且β-葡聚糖在反芻動(dòng)物中的消化吸收和代謝機(jī)制尚未深入研究，盡管其在青稞秸稈或燕麥干草含量都較高，但推測粗飼料中以β-葡聚糖形式吸收的數(shù)量較少，因而在本試驗(yàn)中，青稞秸稈與燕麥干草對(duì)藏羊脾臟發(fā)育的影響未呈現(xiàn)出顯著差異。

3.2青稞秸稈和燕麥干草對(duì)血清Ig、溶菌酶含量和酸性磷酸酶活性的影響

IgG和IgM是介導(dǎo)體液免疫的主要效應(yīng)分子，IgA是介導(dǎo)黏膜免疫反應(yīng)產(chǎn)生的主要效應(yīng)分子，這3類抗體水平是反映機(jī)體免疫狀況的重要指標(biāo)，而酸性磷酸酶和溶菌酶主要反映機(jī)體的非特異性免疫狀況。周懌等[21-22]在斷奶犢牛飼糧中添加75 mg/kg的酵母β-葡聚糖可顯著增加犢牛血清中IgG和IgM含量，但對(duì)IgA含量無顯著影響，且隨著飼糧中β-葡聚糖含量的增加，犢牛血清中溶菌酶含量逐漸升高;在羔羊中添加酵母β-葡聚糖可提高血清IgG含量[23]，可調(diào)節(jié)母羊乳腺中的非特異性免疫[24]。沙蔥多糖也可提高肉羊腸道分泌型免疫球蛋白A(slgA)含量，改善腸道黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)和菌群狀況，完善腸道黏膜免疫系統(tǒng)，增強(qiáng)肉羊機(jī)體免疫功能[25]。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，與燕麥組相比，青稞組的藏綿羊血清中IgG、IgA、IgM、溶菌酶含量和酸性磷酸酶活性均無顯著變化，與上述研究結(jié)果不一致，推測這可能是由于粗飼料β-葡聚糖含量比上述研究的低，多糖類型和結(jié)構(gòu)也存在差異，引起的免疫學(xué)效應(yīng)不同。但相比燕麥組，青稞組溶菌酶含量有提高的趨勢，溶菌酶可通過水解細(xì)菌細(xì)胞壁肽聚糖中的β-1,4糖苷鍵，導(dǎo)致菌體細(xì)胞壁溶解而殺死細(xì)菌，抑制外源微生物生長，從而可直接提高藏綿羊抗菌和抗病毒的能力。此外溶菌酶在反芻動(dòng)物復(fù)胃中可轉(zhuǎn)化為具有消化功能的酶[26]，協(xié)助復(fù)胃中菌體溶解得到菌體蛋白等，可改善藏綿羊營養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)，并間接提高機(jī)體適應(yīng)能力。

3.3青稞秸稈和燕麥干草對(duì)血清、胸腺和脾臟中細(xì)胞因子含量的影響

β-葡聚糖可激活淋巴細(xì)胞，通過釋放促免疫細(xì)胞因子而參與免疫應(yīng)答，刺激B淋巴細(xì)胞中調(diào)促炎癥細(xì)胞因子腫瘤壞死因子α(TNF-α)、IL-6和IL-8等[19]。在羔羊飼糧中添加酵母β-葡聚糖可提高血清INF-γ含量[23]。但本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，用青稞秸稈替代燕麥干草不會(huì)影響胸腺和脾臟中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10和IFN-γ的含量。但僅從數(shù)值上來看，青稞組中藏綿羊胸腺IL-2、IL-4、IL-6、IL-10和IFN-γ的含量都高于燕麥組，而脾臟中青稞組則全都低于燕麥組，可能預(yù)示青稞秸稈與燕麥干草對(duì)不同免疫器官細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的調(diào)控機(jī)制不同，推測這可能與兩者中所含的β-葡聚糖結(jié)構(gòu)不同有關(guān)[27-28]，需作進(jìn)一步深入研究。

4　結(jié)　論

飼喂青稞秸稈替代燕麥干草不影響生長期藏綿羊的體增重及免疫性能，且有提高藏綿羊非特異性免疫因子(溶菌酶)含量的潛力。與適宜精飼料搭配，青稞秸稈可作為藏綿羊產(chǎn)業(yè)體系粗飼料來源。

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(責(zé)任編輯王智航)

Effects of Highland Barley Straw on Body Weight Gain and Immune Indexes in Growing Tibetan Sheep

ZHOU Xiaoling1,2,3YAN Qiongxian1,4*TONG Haiou1,4ZHOU Chuanshe1,5TANG Shaoxun1,5HAN Xuefeng1,4TAN Zhiliang1,5*

(1. Key Laboratory for Agro-Ecological Processes in Subtropical Region, Hunan Provincial Engineering Research Center for Healthy Livestock and Poultry Production, South-Central Experimental Station of Animal Nutrition and Feed Science in Ministry of Agriculture, Institute of Subtropical Agriculture, Chinese Academy of Sciences, Changsha 410125, China; 2. University of Chinese Academy of Science,Beijing 100049, China; 3. College of Animal Science, Tarim University, Alaer 843300, China;4. Hunan Co-Innovation Center for Utilization of Botanical Functional Ingredients,Changsha 410128, China; 5.Hunan Co-Innovation Center of Animal Production Safety,Changsha 410128, China)

Highland barley straw was used to substitute oat hay for the study on the effects on body weight gain and immune indexes in growing Tibetan sheep. Eighteen healthy 4- to 5-month old Valley Tibetan sheep were selected and randomly divided into 2 groups, which were highland barley group (highland barley straw 300 g/d+concentrate 300 g/d) and oat group (oat hay 300 g/d + concentrate 300 g/d). Test period lasted for 4 weeks, the 1st week was pre-test period, the 2nd to 4th weeks were formal test period. After formal test period, according to the principle of half-and-half of ewe and ram, six sheep per group were selected to slaughter and sample. The results showed as follows: body weight, daily gain, spleen weight and spleen index in Tibetan sheep between highland barley group and oat group were not significantly different (P>0.05); serum immunoglobulin (Ig) G, IgA, IgM and lysozyme contents acid, and phosphatase activity showed no significant difference between two groups (P>0.05), but lysozyme content in highland barley group had a trend to be improved compared with that in oat group (P=0.083); interleukin (IL)-2, IL-4, IL-6, IL-10 and interferon γ (IFN-γ) contents in serum, thymus and spleen in two groups were not significantly different (P>0.05). As a whole, compared to oat hay, feeding highland barley straw to Tibetan sheep can’t reduce body weight gain and impair immune function, and it has the potential to improve the content of lysozyme as a non-specific immune factor in serum. Highland barley straw can be used as a source of roughage for Tibetan sheep.[ChineseJournalofAnimalNutrition, 2016, 28(10)：3192-3198]

highland barley straw; body weight gain; immune index; Tibetan sheep

s： YAN Qiongxian, assistant professor, E-mail： yanqx14@isa.ac.cn； TAN Zhiliang, professor, E-mail： zltan@isa.ac.cn

10.3969/j.issn.1006-267x.2016.10.022

2016-04-25

中國科學(xué)院科技服務(wù)網(wǎng)絡(luò)計(jì)劃(KFJ-EW-STS-071)

周小玲(1983—)，女，四川內(nèi)江人，副研究員，博士研究生，研究方向?yàn)樾螽a(chǎn)品品質(zhì)及營養(yǎng)調(diào)控。E-mail： zxldky@126.com

顏瓊嫻，助理研究員，E-mail： yanqx14@isa.ac.cn；譚支良，研究員，博士生導(dǎo)師，E-mail： zltan@isa.ac.cn

S826

A

1006-267X(2016)10-3192-07