鹿雙雙，李奇潤，榮　蓉，盧選成

［1.中國疾病預(yù)防控制中心實驗動物中心，北京 昌平 102206；2.拜耳（四川）動物保健有限公司，四川 成都 610225］

東北華北地區(qū)部分豬場弓形蟲血清抗體檢測與分析

鹿雙雙1，李奇潤2，榮蓉1，盧選成1

［1.中國疾病預(yù)防控制中心實驗動物中心，北京 昌平 102206；2.拜耳（四川）動物保健有限公司，四川 成都 610225］

為查明東北、華北地區(qū)豬場的弓形蟲流行病情況，針對該地區(qū)22個豬場的657份樣本采用間接ELISA的方法進行豬弓形蟲抗體檢測。結(jié)果表明，豬場弓形蟲陽性率100%，豬群陽性率在30%到100%之間，其中2胎以上母豬陽性率明顯高于后備母豬及1胎母豬，保育豬陽性率普遍較低或為零。選擇其中224個陽性豬血清利用尿素變性技術(shù)進行親和力指數(shù)測定，測定結(jié)果說明僅有約9%的豬群為第一次弓形蟲感染，大多數(shù)豬群都是多次反復(fù)感染。

弓形蟲；豬；親和力指數(shù)

弓形蟲病（Toxoplasmosis）是由剛地弓形蟲引起的一種人畜共患寄生蟲病。弓形蟲最早是由法國的Nicolle和Manceaux在梳趾鼠的肝臟單核細(xì)胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)［1-3］。在我國已發(fā)現(xiàn)豬、羊、牛、雞等均有弓形蟲感染或發(fā)病，其中以豬弓形蟲感染最嚴(yán)重。家貓、山獅、野貓、豹、猞猁等都可產(chǎn)生卵囊，嚙齒類動物感染弓形蟲后，多數(shù)呈急性經(jīng)過或?qū)е滤劳觯?-8］。在我國豬弓形蟲病多發(fā)生在夏秋季節(jié)，母豬易感，經(jīng)產(chǎn)母豬和育肥豬尤為易感。豬群感染弓形蟲后主要表現(xiàn)為：母豬流產(chǎn)、死胎、木乃伊胎、返情。乳豬發(fā)病急促，體溫升高等。對東北、華北部分豬場進行弓形蟲病流行病學(xué)調(diào)查，便于及時掌握該地區(qū)豬弓形蟲病的流行情況，為綜合防控提供依據(jù)。

1　材料與方法

1.1血樣采集2015年4-6月，從東北和華北地區(qū)選擇規(guī)模化豬場22個，其中黑龍江豬場5個，遼寧4個，河北10個，山西3個。采用前腔靜脈采血的方法，每頭豬采血3～5 mL，共收集657個血液樣本。5 000 r/min離心5 min，收集血清，進行檢測。

1.2弓形蟲的血清抗體陽性率檢測ELISA抗體檢測試劑盒，購自深圳市綠詩源生物技術(shù)有限公司。利用間接酶聯(lián)免疫吸附實驗（間接ELISA）來檢測豬血清中的弓形蟲抗體。豬弓形蟲蛋白被包被在96孔板上。樣品被加在孔中，弓形蟲抗體與包被的弓形蟲蛋白結(jié)合，未結(jié)合的物質(zhì)可被洗掉，再加上酶標(biāo)二抗，洗去未結(jié)合的二抗，加上底物反應(yīng)，包含豬弓形蟲抗體的樣品會顯色。

尿素變性技術(shù)，可檢測Tg-IgG抗體親和力。宿主在初次接觸抗原產(chǎn)生的特異性IgG的親和力隨著免疫時間的推移會逐漸升高，在包被好TOX抗原的酶標(biāo)板中加入陽性豬血清，用尿素處理除去過去產(chǎn)生的低親和力抗原抗體復(fù)合物，而近期產(chǎn)生的高親和力抗體不受影響。IgG抗體親和力指數(shù)（Avidity index，AI）測定目前被認(rèn)為是區(qū)分原發(fā)和復(fù)發(fā)感染的較好方法。

2　結(jié)果分析

2.1不同地區(qū)豬場弓形蟲血清抗體陽性率檢測結(jié)果分析從表1可以看出，在4-5月份檢測東北和華北地區(qū)豬弓形蟲陽性率，東北地區(qū)明顯低于京津冀和山西地區(qū)，這可能與東北地區(qū)氣候較冷有關(guān)。

表1　不同地區(qū)豬弓形蟲流行病學(xué)調(diào)查

2.2不同階段豬群弓形蟲血清抗體陽性率結(jié)果分析從表2可以看出，隨著豬群年齡的增長，弓形蟲感染率明顯升高。在母豬的后備母豬感染率最低，經(jīng)產(chǎn)母豬隨著胎次升高感染率逐漸增大。產(chǎn)房仔豬感染率較低，幾乎為0，保育豬感染率也較低，不足7%。

2.3親和力指數(shù)結(jié)果分析見表3。

從表3可以看出，弓形蟲IgG親和力指數(shù)大多在50%以上，低于30%的僅有9%，說明大多數(shù)豬群都是反復(fù)感染，首次弓形蟲感染的豬群比例很小，因此，要定期做好豬場弓形蟲的凈化工作。

表2　不同階段豬群弓形蟲感染率

表3　親和力指數(shù)結(jié)果分析

從表4可以看出，各個階段的豬群AI大于50%的比例明顯較高，并且隨著豬群年齡的增大，Tg-IgG親和力指數(shù)高于50%的比例也越大，說明大多數(shù)豬群都存在弓形蟲的反復(fù)感染。

表4　不同階段豬群親和力指數(shù)結(jié)果

3　討論

由于東三省和華北地區(qū)在4-6月份氣溫偏低，因此，此次弓形蟲病流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果陽性率較文獻報道要低。這可能與氣候和地區(qū)有一定關(guān)系，但豬場陽性率表明所調(diào)查豬場均存在弓形蟲感染。使用過磺胺間甲氧嘧啶的豬場弓形蟲陽性率明顯低于其他豬場。

在臨床實踐中，很多豬場豬瘟等免疫效果不理想可能與弓形蟲的亞臨床感染造成豬免疫抑制有關(guān)。親和力指數(shù)結(jié)果表明，經(jīng)產(chǎn)母豬大多數(shù)都是弓形蟲反復(fù)感染，因此在經(jīng)產(chǎn)母豬上要使用磺胺類藥物定期凈化弓形蟲。親和力指數(shù)30%是一個很重要的指標(biāo)，低于30%說明弓形蟲抗體親和力較低，為首次感染，因此，在這些豬群進行預(yù)防性用藥也是有必要的。本試驗初步掌握了東北、華北地區(qū)豬場弓形蟲病的流行情況，為豬弓形蟲病的綜合防控提供了依據(jù)。

［1］Nicolle C，Manceaux L.Sunune infection a crops deleishman（ou organisms）du gondii［J］.C R Hebd Seances Acad Sci，1908，147：736-766.

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S852.72+3

B

0529-6005（2016）04-0107-02

2015-11-12

衛(wèi)生計生公益性行業(yè)基金生物實驗中的人畜共患病安全問題及其對策研究（201302006）

鹿雙雙（1989-），女，研究實習(xí)員，碩士，從事獸醫(yī)以及實驗室管理工作，E-mail：lsscau@126.com

盧選成，E-mail：luxc@chinacdc.cn