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        柿單寧的體外降膽固醇作用

        2016-11-14 02:56:13葛珍珍李春美
        食品科學(xué) 2016年9期
        關(guān)鍵詞:酯酶單寧膽酸

        朱 維,鄒 波,葛珍珍,張 穎,李春美,*

        (1.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)技術(shù)學(xué)院,湖北 武漢 430070;2.廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶業(yè)與農(nóng)產(chǎn)品加工研究所,廣東 廣州 510610)

        柿單寧的體外降膽固醇作用

        朱 維1,鄒 波2,葛珍珍1,張 穎1,李春美1,*

        (1.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)技術(shù)學(xué)院,湖北 武漢 430070;2.廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶業(yè)與農(nóng)產(chǎn)品加工研究所,廣東 廣州 510610)

        采用分光光度法和氣相色譜法研究了柿單寧對胰脂酶活性和膽固醇酯酶活性的抑制作用,以及柿單寧與膽汁酸、膽固醇的結(jié)合能力。結(jié)果表明:柿單寧對胰脂酶具有顯著的抑制效果,其半數(shù)抑制濃度(half inhibitory concentration,IC50)為(0.445±0.021) mg/mL;抑制類型為非競爭性抑制,抑制常數(shù)Ki為0.406 mg/mL;柿單寧對膽固醇酯酶也具有顯著的抑制作用,其半數(shù)抑制濃度IC50為(0.442±0.017)mg/mL,抑制類型為非競爭性抑制,抑制常數(shù)Ki為0.488 mg/mL。不同質(zhì)量濃度的柿單寧對膽酸(cholic acid,CA)、脫氧膽酸(deoxycholic acid,DCA)都有一定的結(jié)合能力,10 mg/mL的單寧與CA、DCA的結(jié)合率分別為58%和94%;柿單寧對膽固醇膠束化溶液有較強(qiáng)的結(jié)合能力,0.20 mg/mL的單寧對其抑制率達(dá)到了67%。另外,在不同的pH值下,柿單寧對膽固醇都有一定的結(jié)合作用,其中pH 7.0時的結(jié)合能力明顯強(qiáng)于pH 2.0時的結(jié)合能力。總之,柿單寧可抑制胰脂酶活性和膽固醇酯酶活性,并與膽固醇和膽汁酸結(jié)合,減少胃腸道對脂肪的吸收,這可能是柿單寧在體內(nèi)發(fā)揮強(qiáng)降膽固醇作用的原因之一。

        柿單寧;胰脂酶;膽固醇酯酶;膽汁酸;膽固醇膠束化

        隨著生活水平的不斷提高,人們的飲食結(jié)構(gòu)也發(fā)生了巨大的變化,富含高能量的食物如肉制品、油炸食品已經(jīng)成為人們經(jīng)常食用的食物之一。而長期高能量食物的攝取和鍛煉的缺乏是導(dǎo)致脂質(zhì)代謝紊亂的主要因素之一[1]。減少脂質(zhì)吸收,促進(jìn)脂肪排泄,對于調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝有著重要的作用。

        眾多研究表明,多酚類化合物如蘋果原花青素,葡萄籽原花青素能有效的抑制胰脂酶活性[2-3],原花青素二聚體可通過抑制膽固醇膠束的形成從而抑制膽固醇的吸收、促進(jìn)其排泄[4],從而起到降脂作用。我國柿分布廣泛,栽培面積和產(chǎn)量均占世界之首。隨著人們生活水平的提高,柿的保健作用也被越來越多的人認(rèn)識。近年來的研究發(fā)現(xiàn),柿果[5-8]及其提取物[9-10]在高血脂動物模型中具有顯著的降脂效果。而且日本學(xué)者進(jìn)行的一項(xiàng)人群調(diào)查也證實(shí),柿單寧提取物對脂質(zhì)代謝異常病人具有顯著的干預(yù)作用[11]。以上研究表明,在我國極具資源優(yōu)勢的柿極有可能是一種干預(yù)脂質(zhì)代謝的優(yōu)良膳食因子。鑒于柿單寧聚合度大,在腸道內(nèi)難以被吸收的特點(diǎn),本實(shí)驗(yàn)在模擬的胃腸道環(huán)境中,對其降脂作用機(jī)制進(jìn)行了探討,旨在為促進(jìn)我國柿資源的綜合利用,提高產(chǎn)品附加值提供依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1 材料與試劑

        恭城月柿(Diospyros kaki Thunb.)購于武漢沙湖水果批發(fā)市場。

        豬胰脂酶、豬膽固醇酯酶、膽固醇、磷脂酰膽堿、牛黃膽酸鈉、棕櫚酸酯 美國Sigma公司;六氟異丙醇(hexafluoroisopropanol,HFIP)、三氟醋酐(trifluoro acetic anhydride,TFAA) 日本TCI公司;膽酸(cholic acid,CA)、脫氧膽酸(deoxycholic acid,DCA)上海Aladdin公司;甘油三酯、油酸、膽固醇測定試劑盒、聚乙烯醇(polyvinyl alcohol,PVA)、乙酸銅、吡啶、無水乙醚、甲苯 上海國藥集團(tuán)化學(xué)試劑公司;乙腈 美國Tedia公司;其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

        1.2 儀器與設(shè)備

        N-1001型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海愛郎科技有限公司;AB-8大孔樹脂 南開大學(xué)化工廠;冷凍干燥機(jī) 北京松源華興科技有限公司;NDK200-2型氮?dú)獯蹈蓛x杭州米歐儀器有限公司;MK3型酶標(biāo)儀 美國賽默飛世爾公司;UV-1800 型分光光度計 日本島津公司;PB-10型pH計 賽多利斯公司;Biofuge Stratos Sorvall 型臺式高速冷凍離心機(jī) 美國Thermo Fisher Scientific公司;HWS24型電熱恒溫水浴鍋 上海一恒科技有限公司;6890N氣相色譜儀 美國安捷倫科技有限公司。

        1.3 方法

        1.3.1 柿單寧的制備

        成熟澀柿(恭城月柿)采收于11月,采收后的柿果于100 ℃熱燙5 min使多酚氧化酶失活,之后置于-20 ℃冷凍保存?zhèn)溆?。柿單寧的制備方法參照食品化學(xué)柿子研究實(shí)驗(yàn)室工藝[12]并略加改動。以含體積分?jǐn)?shù)為1%的鹽酸甲醇溶液作為溶劑,料液比1∶8(m/V),于80 ℃冷凝回流提取3 次,每次40 min,合并提取液,35 ℃旋蒸濃縮,置于AB-8大孔樹脂吸附40 min,純水洗至苯酚-硫酸法檢測無糖[13]后,再用體積分?jǐn)?shù)為10%的乙醇水溶液去掉低分子質(zhì)量酚類化合物,最后用95%的乙醇洗脫,收集洗脫液,旋蒸濃縮去掉有機(jī)溶劑,冷凍干燥得到單寧樣品。柿單寧末端基團(tuán)含有兒茶素(catechin,C)、表沒食子兒茶素沒食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)和楊梅素,特別是非常罕見地以楊梅素作為末端基團(tuán);延伸端結(jié)構(gòu)為表沒食子兒茶素(epigallocatechin,EGC)、EGCG、表兒茶素(epicatechin,EC);分子中原翠雀定結(jié)構(gòu)含量高達(dá)58.68%;棓?;潭雀哌_(dá)72.4%;除了含有B型連接外還存在A型連接,重均分子質(zhì)量范圍為1.16×104~1.54×104。

        1.3.2 柿單寧對胰脂酶活性的影響

        胰脂酶催化甘油三酯水解生成游離脂肪酸和甘油,本實(shí)驗(yàn)以三油酸甘油酯為底物,測定胰脂酶在一定時間內(nèi)酶解三油酸甘油酯生成油酸的量。油酸在pH 6.0~6.2之間能與乙酸銅溶液形成綠色絡(luò)合物,該絡(luò)合物在710 nm波長處有一較強(qiáng)的吸收峰,因此根據(jù)該絡(luò)合物的吸光度計算油酸的生成量,從而計算胰脂酶活力。胰脂酶活力單位[14-15]:在實(shí)驗(yàn)條件下(pH 7.4、37 ℃)1 min釋放出1 μmol脂肪酸的酶量定義為1 個脂肪酶活力單位(U)。計算方法見下式。

        式中:X為脂肪酶活力/(U/mL);c為脂肪酸濃度/(μmol/mL);V為脂肪酸溶液的體積/mL;V'為酶液的用量/mL;t為作用時間/min。

        胰脂酶液:稱取7.5 mg胰脂酶,溶于10 mL pH 7.4的磷酸鹽緩沖液 (phosphate buffer solution,PBS)中,混勻后,于10 000×g條件下冷凍離心5 min,取上清液,置于4 ℃冰箱備用。酶液質(zhì)量濃度為0.75 mg/mL。

        底物乳化液:將三油酸甘油酯與4%的PVA溶液按一定的比例混合,配制質(zhì)量濃度為0.21 g/mL和0.14 g/mL的底物乳液,在漩渦混勻器上振蕩3 min,形成乳白色的PVA-油乳化液。

        胰脂酶的測定方法參考[14-16]進(jìn)行。取1.9 mL底物,0.5 mL樣品,0.5 mL酶液于15 mL離心管中,37 ℃恒溫振蕩15 min,立即加入4 mL甲苯,振蕩2 min,終止反應(yīng),同時萃取生成的脂肪酸,將其轉(zhuǎn)移至玻璃離心試管中,3 000 r/min離心10 min,取上層有機(jī)相加入乙酸銅顯色劑,振蕩3 min,即生成綠色絡(luò)合物。之后在3 000 r/min離心10 min,取上層液體檢測710 nm波長處的吸光度。以相同方法制備不含脂肪酶的空白溶液為對照組,每個濃度平行3 次。參照油酸標(biāo)準(zhǔn)工作曲線,計算脂肪酸的濃度。另外取不同質(zhì)量濃度的底物乳液,分別加入0.5 mL,0.75 mg/mL的胰脂酶和不同質(zhì)量濃度的柿單寧,測定酶反應(yīng)速率,按Dixon作圖法作圖求解抑制常數(shù),按Lineweaver-Burk的雙倒數(shù)作圖法作圖,確定抑制作用的類型。

        式中:v為反應(yīng)速率/(μmol/(min·mL));Km為米氏常數(shù)/(g/mL);[S]為底物質(zhì)量濃度/(g/mL);vmax為最大反應(yīng)速率/(μmol/(min·mL))。

        1.3.3 柿單寧對膽固醇酯酶活性的影響

        本實(shí)驗(yàn)以膽固醇棕櫚酸酯為底物,采用分光光度法測定膽固醇酯酶的活力[17]。不同質(zhì)量濃度的柿單寧加入到37 ℃預(yù)溫底物緩沖液(膽固醇棕櫚酸酯5.16 mmol/L,PBS 100 mmol/L,NaCl 100 mmol/L,pH 7.0),混合均勻,加入豬膽固醇酯酶(1 mg/mL,35 U/g)后開始計算反應(yīng)時間。采用游離膽固醇試劑盒檢測反應(yīng)生成的游離膽固醇。同理,另外取不同質(zhì)量濃度(0.032、0.064 g/mL)的底物緩沖液,分別加入膽固醇酯酶和不同質(zhì)量濃度的柿單寧,測定酶反應(yīng)速率,按Dixon作圖法作圖求解抑制常數(shù),按Lineweaver-Burk的雙倒數(shù)作圖法作圖,確定抑制作用的類型。

        1.3.4 柿單寧與膽固醇膠束化溶液、膽汁酸結(jié)合的能力

        參考Kirana等[18]的方法制備膽固醇膠束化溶液。分別取不同質(zhì)量濃度的柿單寧溶液與膽固醇膠束化溶液混合,于37 ℃反應(yīng)1 h,3 000 r/min離心10 min,取上清液,采用總膽固醇(total cholesterol,TC)測定試劑盒測定上清液中膽固醇的含量。

        通過一個典型的食品體系雞蛋蛋黃改變pH值模擬腸胃環(huán)境來檢測單寧結(jié)合膽固醇的能力[19]。在人類的膳食中,游離膽固醇的攝入主要來源于蛋黃與魚子,日常生活中,雞蛋的攝入量較多,且蛋黃本身成分復(fù)雜,為研究柿單寧在復(fù)雜的食品體系中是否具有較強(qiáng)的結(jié)合膽固醇的能力,本實(shí)驗(yàn)研究了柿單寧對蛋黃中膽固醇含量的影響。

        稱取部分新鮮蛋黃,加入9 倍體積(即料液比為1∶9(m/V))蒸餾水?dāng)嚢柚馏w系均勻,平均分成2 份,分別用6 mol/L的HCl和1 mol/L的NaOH調(diào)節(jié)pH值為2.0和7.0。另取若干100 mL的錐形瓶,每個錐形瓶加入15 mL蛋黃乳化液,然后加入不同質(zhì)量濃度的柿單寧(0.10~0.40 mg/mL),37 ℃搖床孵育2 h,轉(zhuǎn)速為80 r/min。孵育結(jié)束后3 000 r/min離心10 min,取上清液,TC測定試劑盒測定膽固醇含量。

        在腸道中柿單寧與膽汁酸結(jié)合,促進(jìn)膽汁酸的排泄,可以增加肝臟中膽固醇向膽汁酸轉(zhuǎn)化,減少血液中膽固醇的含量[8]。本實(shí)驗(yàn)采用體外模擬腸道環(huán)境,研究了柿單寧對膽酸和脫氧膽酸的結(jié)合能力。柿單寧與膽汁酸結(jié)合能力的測定參考Adisakwattana[20]和Imai[21]等的方法并略作改動:選用膽酸和脫氧膽酸,研究柿單寧與2 種膽汁酸的結(jié)合能力。將柿單寧分別加入到2 mmol/L的膽酸和脫氧膽酸溶液中(100 mmol/L PBS,pH 7.0),于37 ℃孵育90 min,6 mol/L的HCl調(diào)節(jié)pH值至3.0,室溫靜置10 min,3 000 r/min離心10 min,上層液體0.45 μm濾膜過濾以除去溶液中的不溶物,再用乙醚萃取2 次,合并有機(jī)層萃取液,用氮?dú)獯蹈蓛x吹干,加入HFIP和TFAA將膽酸或脫氧膽酸衍生化,氣相色譜法檢測膽汁酸的含量。氣相色譜條件如下:色譜柱HP-5彈性石英毛細(xì)管柱(30 m×0.32 mm,0.5 μm);載氣(N2)流速1.0 mL/min;程序升溫,60 ℃保持2 min,以10 ℃/min速率升至180 ℃,再以5 ℃/min速率升至235 ℃,保持15 min;進(jìn)樣溫度250 ℃;檢測溫度250 ℃;氫火焰離子化檢測器(hydrogen flame detector,F(xiàn)ID)檢測器;不分流進(jìn)樣,進(jìn)樣體積1 μL。

        1.4 數(shù)據(jù)分析

        數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析,實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次,結(jié)果以x±s表示,采用Origin 8.5和Excel軟件進(jìn)行線性擬合。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 柿單寧抑制胰脂酶活性

        食物中的甘油三酯在被吸收前必須被水解[22],而胰脂酶能將甘油三酯水解生成二酰甘油,隨后繼續(xù)水解生成甘油和游離脂肪酸,在脂肪的吸收中發(fā)揮著重要的作用[23]。為探討柿單寧抑制脂肪吸收的可能機(jī)制,實(shí)驗(yàn)對柿單寧對胰脂酶活性的影響進(jìn)行檢測。由圖1可知,柿單寧在質(zhì)量濃度為0.10、0.20、0.30、0.40、0.50 mg/mL時對胰脂酶的抑制作用呈劑量-依賴效應(yīng)關(guān)系,其半數(shù)抑制濃度(half inhibitory concentration,IC50)為(0.445±0.021) mg/mL,明顯高于葡萄籽提取物(IC50為(3.71±0.03) mg/mL)[24]。在反應(yīng)體系中給定底物濃度,加入定量胰脂酶,測定不同抑制劑濃度下酶反應(yīng)的吸光度,作圖得Dixon圖(圖1B)。根據(jù)圖中兩直線的交點(diǎn),得到抑制常數(shù)Ki=0.406 mg/mL。給定抑制劑濃度,定量胰脂酶,測定底物濃度不同時酶反應(yīng)的殘余酶活力,求出相應(yīng)的反應(yīng)速率,按Lineweaver-Burk的雙倒數(shù)法作圖(圖1C),兩條直線相交于橫軸上。從Dixon圖和Lineweaver-Burk圖的特征表明,柿單寧對胰脂酶的抑制類型是非競爭性抑制。此抑制類型與單寧結(jié)合蛋白質(zhì)的機(jī)理一致,單寧與蛋白質(zhì)的結(jié)合主要是通過單寧酚羥基群與蛋白質(zhì)的羰基發(fā)生氫鍵相互作用,以及單寧與蛋白質(zhì)通過疏水相互作用使酶與基質(zhì)隔離[25-26]。

        2.2 柿單寧抑制膽固醇酯酶活性

        膽固醇酯在吸收前需先水解成游離膽固醇,而膽固醇酯酶在水解過程發(fā)揮著重要作用[20],因此抑制膽固醇酯酶的活性,可在一定程度上限制膽固醇的吸收。柿單寧對膽固醇酯酶的抑制呈劑量-依賴效應(yīng)關(guān)系(圖2A),其IC50值為(0.442±0.017) mg/mL。根據(jù)Dixon圖(圖2B)中兩直線的交點(diǎn),得到抑制常數(shù)Ki=0.488 mg/mL。按Lineweaver-Burk的雙倒數(shù)法作圖(圖2C),得到兩條直線相交于橫軸上。從Dixon圖和Lineweaver-Burk圖的特征表明,柿單寧對膽固醇酯酶的抑制類型是非競爭性抑制。

        2.3 柿單寧抑制膽固醇膠束化、結(jié)合膽固醇

        由圖3A可知,柿單寧質(zhì)量濃度為0.10 mg/mL時對膽固醇膠束化的抑制率達(dá)到了55%,0.20 mg/mL的單寧對其抑制率達(dá)到了67%。與之相比,0.20 mg/mL沒食子酸對膽固醇膠束化的抑制率僅為27%[24]。這說明柿單寧能明顯抑制膽固醇膠束化溶液的形成。

        由圖3B可知,隨著柿單寧質(zhì)量濃度的增加,其對蛋黃中膽固醇的結(jié)合率也逐漸加升高。并且,柿單寧在pH 7.0時對蛋黃中膽固醇的結(jié)合能力強(qiáng)于pH 2.0時。

        2.4 柿單寧結(jié)合膽汁酸

        由圖4可知,柿單寧具有較強(qiáng)的結(jié)合膽酸和脫氧膽酸的能力,且呈劑量-依賴效應(yīng)關(guān)系,在柿單寧質(zhì)量濃度為5.0 mg/mL時,對膽酸和脫氧膽酸的結(jié)合率分別為26%和40%,當(dāng)柿單寧質(zhì)量濃度增加至10 mg/mL時,單寧對膽酸的結(jié)合率達(dá)到58%,對脫氧膽酸的結(jié)合率達(dá)到94%。與紅花多酚提取物相比[20],柿單寧對膽汁酸的結(jié)合能力更強(qiáng)。

        3 討 論

        酚類化合物的功能活性往往與其化學(xué)結(jié)構(gòu)、生物利用率和生物轉(zhuǎn)化相關(guān),高聚合度柿單寧在小腸內(nèi)很難被吸收[27],盡管柿單寧是一種高聚物,但在之前的研究表明柿單寧在高脂動物模型中具有較強(qiáng)的降血脂作用[28],因此,推測柿單寧的降脂作用可能與其干擾脂質(zhì)的吸收有關(guān)。為了證實(shí)本實(shí)驗(yàn)推測,采用體外實(shí)驗(yàn),研究柿單寧與脂質(zhì)吸收有關(guān)酶的抑制作用,并探討柿單寧和膽固醇、膽汁酸的結(jié)合能力,結(jié)果顯示,柿單寧可抑制胰脂酶、膽固醇酯酶活性,結(jié)合膽汁酸,抑制膽固醇膠束化形成。且其對胰脂酶的抑制作用比蘋果多酚(IC50=0.501 mg/mL)要強(qiáng),但比葡萄籽提取物(IC50=(3.71±0.03) mg/mL)要弱,與荷葉提取物的抑制效果(IC50=0.46 mg/mL)相當(dāng),而對膽固醇膠束化的抑制能力也比同濃度的銀杏提取物、桑葚提取物要強(qiáng)(10 mg/mL的銀杏提取物、桑葚提取物對膽固醇膠束化溶液的抑制率分別為27.26%、57.61%)[20]??傮w來說,體外實(shí)驗(yàn)證明柿單寧在體外具有較強(qiáng)的降膽固醇效果,這可以從一定程度上解釋柿單寧在動物體系中的強(qiáng)降脂作用,這也為柿子的開發(fā)利用提供了一定依據(jù)。

        原花青素的結(jié)構(gòu)如黃烷醇單體結(jié)構(gòu)、連接方式、聚合度和沒食子?;潭鹊扰c蛋白質(zhì)和酶的結(jié)合能力密切相關(guān)。有研究表明,原花青素沒食子化程度越高,聚合越大[29-31],對胰脂酶活性抑制作用越強(qiáng)。Nakai等[29]的研究表明,含有沒食子酸酯的EGCG和ECG比非酯化的C和EC對胰脂酶活性的抑制作用更強(qiáng)。此外,Kimura等[32]的研究表明,A型連接的原花青素對胰脂酶的抑制作用強(qiáng)于B型連接的原花青素。而柿單寧的沒食子?;潭雀撸酆隙却?,且含有大量A型連接構(gòu)型,其具有較強(qiáng)的抑制胰脂酶和膽固醇酯酶的能力可能歸因于其特殊的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。

        Ikeda[33]和Kirana[18]等的研究表明,原花青素中沒食子酸的含量是決定膽固醇膠束化溶解度的關(guān)鍵因素,而兒茶素沒食子酸酯化后,使得分子中含有疏水結(jié)構(gòu)域,擁有比游離兒茶素更強(qiáng)的與疏水脂質(zhì)雙分子層的親合力,更容易與膽固醇發(fā)生疏水結(jié)合,增加膽固醇的排泄[34]。最新研究表明,在pH 6.8時,磷脂酰膽堿的三甲胺群能與EGCG的沒食子?;l(fā)生離子-π鍵相互作用EGCG,從而形成EGCG-磷脂酰膽堿復(fù)合物,降低膽固醇膠束化溶液的溶解性[35]。這也可能是柿單寧在pH 7.0條件下具有比pH 2.0更強(qiáng)的結(jié)合膽固醇的能力的原因。此外,Osakabe等[36]的研究發(fā)現(xiàn),原花青素對膽固醇膠束化的沉淀作用與聚合度正相關(guān)。

        柿單寧可能在動物或人體腸道內(nèi)通過抑制胰脂酶、膽固醇酯酶活性,結(jié)合膽汁酸,抑制膽固醇膠束化形成,以及結(jié)合膽固醇至共沉淀起到體內(nèi)降膽固醇的效果。柿單寧由于含有較多A型連接的(表)兒茶素結(jié)構(gòu),具有較多的酚羥基,可以與蛋白質(zhì)通過氫鍵結(jié)合,從而封閉酶的活性部分,起到抑制酶活性的作用。而且,研究表明兒茶素結(jié)構(gòu)中疏水的沒食子?;梢酝ㄟ^疏水相互作用與疏水的膽固醇結(jié)合[33]。而90%的柿單寧是沒食子?;?,且含有較多A型連接。這也可以解釋柿單寧顯著結(jié)合膽固醇的能力。

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        Cholesterol-Lowering Effect of Persimmon Tannin in Vitro

        ZHU Wei1, ZOU Bo2, GE Zhenzhen1, ZHANG Ying1, LI Chunmei1,*
        (1. College of Food Science and Technology, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, China;2. Sericultural & Agri-food Research Institute, Guangdong Academy of Agricultural Sciences, Guangzhou 510610, China)

        This study investigated the inhibitory effect of persimmon tannin on pancreatic lipase and pancreatic cholesterol esterase activities. The binding capacity of persimmon tannin to cholesterol and bile acids was also determined by spectrophotometry and gas chromatography. The results indicated that persimmon tannin significantly inhibited the activity of pancreatic lipase with an IC50value of (0.445 ± 0.021) mg/mL in an un-competitive manner, and the inhibitory constant(Ki) was 0.406 mg/mL. Meanwhile, it also showed a strong inhibitory effect on pancreatic cholesterol esterase in an un-competitive manner with an IC50value of (0.442 ± 0.017) mg/mL and a Kivalue of 0.488 mg/mL. At the concentration of 10 mg/mL, the binding rates of persimmon tannin to cholic acid (CA) and deoxycholic acid (DCA) were 58% and 94%,respectively. Persimmon tannin also could inhibit cholesterol micellization effectively, and the percentage inhibition was found to be 67% when the concentration was 0.20 mg/mL. In addition, the cholesterol binding ability of persimmon tannin was stronger at pH 7.0 than pH 2.0. These results suggested that persimmon tannin might decrease lipid absorption through inhibiting the activities of pancreatic lipase and pancreatic cholesterol esterase, and binding cholesterol and bile acids. This may explain the strong cholesterol-lowering effect of persimmon tannin in vivo.

        persimmon tannin (PT); pancreatic lipase; pancreatic cholesterol esterase; bile acids; cholesterol micellization

        10.7506/spkx1002-6630-201609014

        TS201.4

        A

        1002-6630(2016)09-0071-06

        朱維, 鄒波, 葛珍珍, 等. 柿單寧的體外降膽固醇作用[J]. 食品科學(xué), 2016, 37(9): 71-76. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201609014. http://www.spkx.net.cn

        ZHU Wei, ZOU Bo, GE Zhenzhen, et al. Cholesterol-lowering effect of persimmon tannin in vitro[J]. Food Science, 2016,37(9): 71-76. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-201609014. http://www.spkx.net.cn

        2015-07-12

        教育部“新世紀(jì)優(yōu)秀人才支持計劃”項(xiàng)目(NCET-12-0865);公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(xiàng)(201203047)

        朱維(1990—),女,博士研究生,研究方向?yàn)槭称房茖W(xué)。E-mail:Katherine@webmail.hzau.edu.cn

        *通信作者:李春美(1973—),女,教授,博士,研究方向?yàn)樘烊划a(chǎn)物化學(xué)。E-mail:lichmyl@mail.hzau.edu.cn

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