謝　彤　杜麗娜　徐建亞　沈存思　汪受傳　單進(jìn)軍

(南京中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)兒科學(xué)研究所，江蘇省兒童呼吸疾病(中醫(yī)藥)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南京，210023)

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基于脂質(zhì)代謝網(wǎng)絡(luò)的虎杖抗呼吸道合胞病毒肺炎代謝組學(xué)研究

謝彤杜麗娜徐建亞沈存思汪受傳單進(jìn)軍

(南京中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)兒科學(xué)研究所，江蘇省兒童呼吸疾病(中醫(yī)藥)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南京，210023)

目的：探討虎杖用于干預(yù)呼吸道合胞病毒(Respiratory Syncytial Virus，RSV)誘導(dǎo)BALB/c小鼠肺炎的脂質(zhì)代謝網(wǎng)絡(luò)的變化。方法：選取18只BALB/c小鼠，隨機(jī)分為空白組、RSV肺炎組、虎杖組3組，RSV肺炎組、虎杖組滴鼻給予RSV病毒誘導(dǎo)產(chǎn)生肺炎，虎杖組灌胃給予虎杖提取物給予治療，空白對(duì)照組灌胃給予生理鹽水作為對(duì)照。實(shí)驗(yàn)結(jié)束，取血漿測(cè)定其血漿中的脂質(zhì)代謝物質(zhì)。建立基于高效液相-線性離子阱-靜電場(chǎng)軌道雜交質(zhì)譜(HPLC-LTQ-Orbitrap-MS)的脂質(zhì)代謝組學(xué)技術(shù)，表征3組小鼠血漿中脂質(zhì)代謝輪廓的變化，通過單因素方差分析篩選差異性化合物(P<0.0.5)，并對(duì)其差異化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)確定，闡明其可能調(diào)節(jié)的脂質(zhì)代謝網(wǎng)絡(luò)。結(jié)果：多變量數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，3組小鼠的血漿脂質(zhì)代謝輪廓區(qū)分明顯，受調(diào)控的脂質(zhì)分子主要為磷脂酰膽堿、三酰甘油成分和磷酸化神經(jīng)酰胺。代謝通路分析結(jié)果顯示，虎杖主要調(diào)節(jié)了磷脂代謝。結(jié)論：虎杖提取物通過調(diào)節(jié)磷脂代謝發(fā)揮抗RSV肺炎的作用。

脂質(zhì)代謝組學(xué)；虎杖；呼吸道合胞病毒肺炎；液質(zhì)聯(lián)用

呼吸道合胞病毒(Respiratory Syncytial Virus，RSV)感染是小兒常見下呼吸道感染性疾病。研究數(shù)據(jù)表明，2005年世界范圍內(nèi)感染RSV的兒童超過3.38千萬例，其中至少有6.6萬～19.9萬患兒死亡[1]。目前，對(duì)于RSV肺炎的治療尚無理想安全的藥物。中醫(yī)藥治療小兒肺炎，療效明顯，無不良反應(yīng)。

虎杖為蓼科植物虎杖(PolygonumCuspidatumSieb.et Zucc.)的干燥根莖和根，具有清熱解毒、利濕活血、止咳化痰的功效。臨床上通常作為配伍藥物用于治療小兒呼吸道感染性疾病。如南京中醫(yī)藥大學(xué)汪受傳教授的清肺口服液，在麻黃杏仁甘草石膏湯的基礎(chǔ)上加減藥味，配伍虎杖，用于治療小兒肺炎，療效顯著[2]?；⒄戎械闹饕煞职邹继J醇、虎杖苷，屬于非黃酮類多酚類化合物，現(xiàn)代藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明非黃酮類多酚化合物發(fā)揮抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、抗喘等生物活性[3]。

脂質(zhì)代謝組學(xué)是目前新興的組學(xué)技術(shù)手段，許多疾病的發(fā)生發(fā)展與脂質(zhì)代謝有著密不可分的聯(lián)系。神經(jīng)系統(tǒng)疾病如阿爾茲海默癥患者體內(nèi)縮醛磷脂(Plasmalogens)的代謝存在異常[4]，肝臟代謝性疾病如對(duì)乙酰氨基酚誘導(dǎo)產(chǎn)生的肝毒性伴隨著明顯的肉毒堿水平異常[5]。近年來的研究也發(fā)現(xiàn)，呼吸系統(tǒng)疾病與脂質(zhì)代謝存在密切聯(lián)系[6]。由于與中醫(yī)藥具有相似的整體性，近年來代謝組學(xué)在中醫(yī)藥研究中越來越受到重視[7]。為了闡明虎杖對(duì)RSV感染的干預(yù)作用，我們通過建立脂質(zhì)代謝組學(xué)分析測(cè)定方法，從脂質(zhì)網(wǎng)絡(luò)代謝角度闡明虎杖可能干預(yù)的機(jī)制。

1　材料

1.1儀器與試劑非靶標(biāo)脂質(zhì)成分的檢測(cè)采用線性離子阱-高分辨靜電場(chǎng)軌道雜交質(zhì)譜(LTQ-Orbtraip XL，Thermo fisher，America)，高效液相色譜儀(U3000，DIONEX，America)，數(shù)據(jù)采集通過Thermo Xcalibur 2.2 SP1.48軟件(Thermo fisher，America)；高速冷凍離心機(jī)(Beckman，America)；SpeedVac離心濃縮儀(Thermo fisher)。配制流動(dòng)相和樣品處理所用甲醇、乙腈均為質(zhì)譜級(jí)(99.8%，Merck，Germany)，脂質(zhì)提取所用甲基叔丁基醚(Methyl tert-butyl ether，MTBE，ROE，America)、異丙醇為質(zhì)譜級(jí)(99.8%，ROE，America)，水為自制去離子水(Millipore，America)。

1.2動(dòng)物、細(xì)胞和病毒清潔級(jí)BALB/c小鼠購自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司，18只，雌性，體重16～18 g，許可證號(hào)為：SCXK(滬)2012-0002。人喉癌上皮細(xì)胞(Hep-2細(xì)胞)由中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞資源中心提供。呼吸道合胞病毒A亞型Log株由武漢國家典型培養(yǎng)物保藏中心提供。

2　方法

2.1藥物的制備虎杖購自安徽亳州中藥飲片廠，批號(hào)為111208。經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院劉圣金博士鑒定，符合2015年版《中華人民共和國藥典》一部中相關(guān)規(guī)定?；⒄扰R床給藥劑量為0.25 g/kg，按照體表面積換算為小鼠的給藥劑量為2.25 g/kg，BALB/c小鼠的灌胃劑量為0.1 mL/10 g，因此虎杖的濃度為0.225 g/mL。

虎杖提取物采用水提醇沉的提取方法。虎杖40 g，400 mL蒸餾水煎煮2次，合并兩次藥液，減壓濃縮至400 mL，放冷至40 ℃以下，緩慢加入乙醇使得含醇量達(dá)到70%，靜置，濾過，減壓回收乙醇至無醇味，定容至178 mL，即藥材的生藥量為0.225 g/mL。

2.2病毒擴(kuò)增及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)病毒擴(kuò)增參考文獻(xiàn)[8]。18只BALB/c小鼠隨機(jī)分成3組，正常組、RSV感染組、虎杖組，每組6只，適應(yīng)環(huán)境7d后開始正式實(shí)驗(yàn)。RSV感染組和虎杖組滴鼻感染RSV病毒液100 TCID5050 μL/只，正常組滴鼻給予50 μL/只無血清DMEM高糖培養(yǎng)基。連續(xù)滴鼻3d，1次/d?；⒄冉M首次滴鼻感染2 h后灌胃給予虎杖提取液，連續(xù)6 d，1次/d。正常組合模型組每天等量給予生理鹽水。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后取血，用于脂質(zhì)代謝組學(xué)研究，肺組織用于病理切片實(shí)驗(yàn)。

2.3脂質(zhì)提取20 μL血漿加入225 μL預(yù)冷甲醇(含內(nèi)標(biāo)蛇床子素1.125 μg)沉淀蛋白，渦旋20 s，后用1 mL預(yù)冷的MTBE提取，渦旋20 s，后加入125 μL水使其分層，4 ℃ 12 500 r/min離心5 min，取上層富含脂溶性的脂質(zhì)成分400 μL，于SpeedVac蒸空濃縮儀中揮干。揮干后的殘余樣品用甲醇/甲苯溶劑(v/v，9∶1)60 μL復(fù)溶，渦旋5 min，4 ℃ 20 000 r/min高速離心5 min后，取上清進(jìn)樣。

2.4色譜分離條件和質(zhì)譜檢測(cè)條件色譜分離條件：血漿中脂質(zhì)成分的分離采用色譜柱Kinetex C18(2.1 mm×100 mm，2.6 μm)，柱溫設(shè)定為55 ℃。流動(dòng)相為A為水/異丙醇(v/v，80/20)含5 mM甲酸銨和0.1%甲酸；流動(dòng)相B為異丙醇/乙腈(v/v，90/10)含5 mM甲酸銨和0.1%甲酸。流速：0.3 mL/min；采用梯度洗脫分離血漿中的脂質(zhì)分子：0—1 min，30% B；2—7 min，30%～80% B；7—23 min，80%～90% B；23—24 min,90% B；24—30 min,90%～10% B。

質(zhì)譜檢測(cè)參數(shù)：采用電噴霧電離離子源(Electrospray Ionization，ESI)對(duì)化合物進(jìn)行霧化，噴霧電壓：3.5kV；離子源溫度：350 ℃；毛細(xì)管溫度：350 ℃；鞘氣流速：275 kPa；輔助氣流速：104 kPa。脂質(zhì)分子通過正離子模式檢測(cè)。高分辨質(zhì)譜的質(zhì)量軸在使用前通過標(biāo)準(zhǔn)混合物調(diào)諧以使儀器達(dá)到正常狀態(tài)。脂質(zhì)代謝組學(xué)半定量數(shù)據(jù)的獲取采用全掃描的掃描模式，掃描范圍：m/z200～1 000，分辨率設(shè)定為30 000。脂質(zhì)成分的定性分析采用高分辨的精確質(zhì)量數(shù)，結(jié)合MSn碎裂分析。MSn質(zhì)譜的觸發(fā)方式為動(dòng)態(tài)數(shù)據(jù)依賴分析模式(Data-dependent acquisition mode)，選取上一級(jí)最高峰進(jìn)行碰撞誘導(dǎo)碎裂解離(Collision Induced Dissociation，CID)碎片掃描，碰撞能量設(shè)定為30%。

2.5數(shù)據(jù)處理得到的原始數(shù)據(jù)采用Xcalibur 2.2軟件進(jìn)行峰對(duì)齊，通過內(nèi)標(biāo)歸一化進(jìn)行半定量，得到的數(shù)據(jù)矩陣導(dǎo)入SIMCA-P 13.0軟件(Umetrics，Sweden)進(jìn)行多變量統(tǒng)計(jì)分析。通過偏最小二乘-判別分析(Orthogonal Partial Least Squares-Discriminant Analysis，OPLS-DA)對(duì)空白組、RSV肺炎組和虎杖組進(jìn)行模式識(shí)別和區(qū)分。通過SPSS 13.0進(jìn)行單因素方差分析(One ANOVAs Analysis)確定差異性代謝物，得到的差異性代謝物通過高分辨的m/z值搜索數(shù)據(jù)庫METLIN metabolite database(https://metlin.scripps.edu/index.php)，確定其可能的歸屬，并通過碎裂途徑確定差異代謝物的可能結(jié)構(gòu)。最后查找KEGG數(shù)據(jù)庫，分析虎杖干預(yù)RSV肺炎的脂質(zhì)代謝通路，闡明其可能干預(yù)的機(jī)制。

3　結(jié)果

3.1肺組織病理檢查肺組織樣品進(jìn)行蘇木精-伊紅染色，觀察病理切片，結(jié)果顯示，正常組小鼠肺組織內(nèi)肺泡、肺內(nèi)支氣管分支及間質(zhì)組成結(jié)構(gòu)清晰；RSV肺炎模型組BALB/c小鼠表現(xiàn)出肺泡壁輕度氣腫，并伴隨充血，肺氣腫表現(xiàn)為局部肺泡腔增大，肺泡壁變薄，毛細(xì)血管數(shù)量減少；虎杖組肺組織結(jié)構(gòu)正常，結(jié)構(gòu)清晰，同正常組相似，肺泡壁存在輕度氣腫，伴隨輕度充血。病理結(jié)果顯示，RSV滴鼻誘導(dǎo)肺炎模型成功，而虎杖提取液能夠該善RSV誘導(dǎo)的肺炎癥狀。

表1　小鼠RSV肺炎病理評(píng)分表(Mean±SD)

3.2脂質(zhì)代謝組學(xué)方法的建立為了能夠全面地測(cè)定血漿中的脂質(zhì)成分，本實(shí)驗(yàn)優(yōu)化了血漿樣品的提取方法和色譜分離條件以及質(zhì)譜檢測(cè)條件，建立的脂質(zhì)代謝組學(xué)分析方法，該方法能夠檢測(cè)到血漿中游離脂肪酸(Free Fatty Acids，F(xiàn)FAs)、磷脂酰膽堿(glycerophosphocholines，PCs)、磷脂酰乙醇胺(glycerophosphoethanolamines，PEs)、三酰甘油(triradylglycerols，TGs)、甘油二酯(diradylglycerols，DGs)、神經(jīng)酰胺(ceramides，Cers)等脂質(zhì)分子。圖1為所建立的脂質(zhì)代謝組學(xué)得總離子流圖，通過圖1可以發(fā)現(xiàn)游離脂肪酸主要集中在0～5 min內(nèi)洗脫，溶血性磷脂酰膽堿(Lyso PCs)和溶血性磷脂酰乙醇胺(Lyso PEs)集中早5～13 min，磷脂酰膽堿和磷脂酰乙醇胺主要集中在13～20 min的時(shí)間內(nèi)洗脫，而三酰甘油和甘油二酯主要集中在20～25 min的時(shí)間內(nèi)洗脫。建立的脂質(zhì)代謝方法能夠較為全面的反映血漿中的主要脂質(zhì)類成分，能夠滿足虎杖抗RSV肺炎脂質(zhì)代謝網(wǎng)絡(luò)調(diào)控的相關(guān)研究。

圖1　脂質(zhì)代謝組學(xué)總離子流圖

3.3脂質(zhì)代謝組學(xué)表征半定量數(shù)據(jù)所得矩陣建立偏最小二乘判別分析模型(OPLS-DA)用于區(qū)分3個(gè)實(shí)驗(yàn)組小鼠的脂質(zhì)代謝輪廓圖，模型的擬合參數(shù)R2X=0.872，R2Y=0.933，Q2=0.748，說明擬合得到的模型較好。OPLS-DA模型得分圖見圖2。結(jié)果顯示，空白對(duì)照組、RSV肺炎模型組和虎杖組存在明顯的區(qū)分，說明3組小鼠的血漿脂質(zhì)代謝輪廓圖存在顯著差異。通過代謝組學(xué)結(jié)果能夠更加直觀、明確、綜合的反映了虎杖對(duì)于RSV肺炎小鼠的干預(yù)作用。

圖2　OPLS-DA得分圖

3.4差異化合物的分析通過OPLS-DA載荷圖和單因素方差分析找尋虎杖提取物可能調(diào)控的差異代謝物，共得到60個(gè)差異性的代謝產(chǎn)物，依據(jù)代謝產(chǎn)物的精確質(zhì)量數(shù)查詢METLIN metabolite database(https://metlin.scripps.edu/index.php)數(shù)據(jù)庫，對(duì)差異性脂質(zhì)分子進(jìn)行結(jié)構(gòu)歸屬，58個(gè)差異代謝產(chǎn)物中含有磷脂酰膽堿類/磷脂酰乙醇胺34個(gè)，三酰甘油類7個(gè)，神經(jīng)酰胺類4個(gè)，神經(jīng)鞘磷脂4個(gè)，未知化合物11個(gè)。進(jìn)一步，根據(jù)碎裂途徑，對(duì)化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，得到溶血性磷脂酰膽堿7個(gè)、磷脂酰膽堿類脂質(zhì)分子2個(gè)，三酰甘油類化合物2個(gè)以及磷酸化神經(jīng)酰胺4個(gè)。單因素方差結(jié)果顯示，模型組的各脂質(zhì)類成分相對(duì)于空白組顯著降低，而虎杖干預(yù)組則能夠顯著逆轉(zhuǎn)脂質(zhì)水平的降低(圖3)。

圖3　差異性化合物(*P<0.05,**P<0.01)

4　討論

近年來的研究發(fā)現(xiàn)，貝拉康坦(豬肺中提取的表面活性物質(zhì))能夠改善RSV患兒的細(xì)支氣管炎臨床癥狀[9]。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，肺泡表面活性物質(zhì)的主要成分1-棕櫚?；?2-油?；字８视?POPG)能夠抑制RSV誘導(dǎo)產(chǎn)生的細(xì)胞炎性反應(yīng)應(yīng)答和免疫應(yīng)答[10]。此外，通過RSV誘導(dǎo)棉鼠肺炎的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，COX-2抑制劑能夠顯著抑制RSV誘導(dǎo)的棉鼠的肺炎，提示脂質(zhì)遞質(zhì)參與了RSV的炎性反應(yīng)[11]。以上研究結(jié)果均充分說明，脂質(zhì)代謝參與了RSV誘導(dǎo)的肺炎。

本論文的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)有7個(gè)溶血性磷脂膽堿在模型RSV小鼠中表現(xiàn)出顯著的降低，包括LysoPC(18∶1)和LysoPC(16∶0)。溶血性磷脂膽堿是肺組織表面活性物質(zhì)的重要組成物質(zhì)，此外，在炎性反應(yīng)中具有重要的調(diào)節(jié)作用[12]。RSV肺炎模型組小鼠體內(nèi)磷脂酰膽堿和溶血性磷脂酰膽堿的共同降低，提示可能代謝轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的游離脂肪酸，并進(jìn)一步引發(fā)機(jī)體產(chǎn)生一系列的酸中毒現(xiàn)象。通過脂質(zhì)代謝數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，虎杖提取物能夠逆轉(zhuǎn)磷脂酰膽堿水平的降低，說明虎杖通過調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝發(fā)揮保護(hù)作用。在我們的實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)的另一類重要的脂質(zhì)分子是磷酸化的神經(jīng)酰胺，RSV肺炎模型組小鼠的磷酸化神經(jīng)酰胺表現(xiàn)為顯著降低。目前發(fā)現(xiàn)，具有生物活性的信號(hào)分子，磷酸化神經(jīng)酰胺(Ceramide 1-phosphate，C1P)是一種調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和生長發(fā)育的重要鞘脂類活性代謝產(chǎn)物，具有促進(jìn)細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞遷移、調(diào)節(jié)炎性反應(yīng)等作用[13-14]。C1P參與了細(xì)胞的炎性反應(yīng)應(yīng)答，能夠刺激胞質(zhì)型磷脂酶A2(cytosolic phospholipase A2，cPLA2)，進(jìn)一步促進(jìn)花生四烯酸和前列腺素的合成和釋放[15]。本實(shí)驗(yàn)中，磷酸化神經(jīng)酰胺在模型RSV小鼠組顯著降低，而虎杖提取液能夠逆轉(zhuǎn)其水平的降低，說明虎杖可能通過干預(yù)磷酸化神經(jīng)酰胺代謝發(fā)揮抗炎的作用。通過我們脂質(zhì)代謝組學(xué)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，說明虎杖提取物可能對(duì)磷脂類代謝調(diào)控從而發(fā)揮其抗RSV的作用，這為臨床治療小兒RSV肺炎提供了藥理學(xué)依據(jù)。

[1]Nair H，Nokes DJ，Gessner BD，et al.Global burden of acute lower respiratory infections due to respiratory syncytial virus in young children：a systematic review and meta-analysis[J].Lancet，2010，375(9725):1545-1555.

[2]汪受傳，朱先康，韓新民，等.小兒病毒性肺炎中醫(yī)證治規(guī)律的初步研究[J].中國醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2003，18(12)：729-731.

[3]樊慧婷，丁世蘭，林洪生.中藥虎杖的藥理研究進(jìn)展[J].中國中藥雜志，2013，38(15):2545-2548.

[4]Brites P，Waterham HR，Wanders RJA.Functions and biosynthesis of plasmalogens in health and disease[J].Biochimica et Biophysica Acta(BBA)-Molecular and Cell Biology of Lipids，2004，1636(2):219-231.

[5]McGill MR，Li F，Sharpe MR，et al.Circulating acylcarnitines as biomarkers of mitochondrial dysfunction after acetaminophen overdose in mice and humans[J].Archives of toxicology，2014，88(2):391-401.

[6]杜麗娜，單進(jìn)軍，謝彤，等.代謝組學(xué)在兒科呼吸系統(tǒng)疾病中的應(yīng)用[J].中華中醫(yī)藥雜志，2015,30(8):2941-2943.

[7]毛厭草，單進(jìn)軍，吳皓，等.代謝組學(xué)在中藥及其復(fù)方領(lǐng)域中的研究進(jìn)展[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，30(2):197-200.

[8]杜麗娜，單進(jìn)軍，謝彤，等.基于液相質(zhì)譜聯(lián)用的黃芩水提液抗病毒效應(yīng)的脂質(zhì)組學(xué)研究[J].中華中醫(yī)藥雜志，2015，30(5):1728-1733.

[9]Tibby SM，Hatherill M，Wright SM，et al.Exogenous surfactant supplementation in infants with respiratory syncytial virus bronchiolitis[J].American journal of respiratory and critical care medicine，2000，162(4 Pt 1):1251-1256.

[10]Numata M，Chu HW，Dakhama A，et al.Pulmonary surfactant phosphatidylglycerol inhibits respiratory syncytial virus-induced inflammation and infection[J].Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，2010，107(1):320-325.

[11]Richardson JY，Ottolini MG，Pletneva L，et al.Respiratory syncytial virus(RSV)infection induces cyclooxygenase 2：a potential target for RSV therapy[J].Journal of immunology，2005，174(7):4356-4364.

[12]Cui L，Lee YH，Kumar Y，et al.Serum metabolome and lipidome changes in adult patients with primary dengue infection[J].PLoS neglected tropical diseases，2013，7(8):e2373.

[13]Simanshu DK，Kamlekar RK，Wijesinghe DS，et al.Non-vesicular trafficking by a ceramide-1-phosphate transfer protein regulates eicosanoids[J]，Nature，2013，500(7463):463-467.

[14]Lim J，Kim Y，Heo J，Kim KH，et al.Priming with ceramide-1 phosphate promotes the therapeutic effect of mesenchymal stem/stromal cells on pulmonary artery hypertension[J].Biochemical and biophysical research communications，2016，473(1):35-41.

[15]Presa N，Gomez-Larrauri A，Rivera IG，et al.Regulation of cell migration and inflammation by ceramide 1-phosphate[J].Biochimica et biophysica acta，2016，1861(5):402-409.

(2016-09-09收稿責(zé)任編輯：洪志強(qiáng))

Metabonomics Study on the Effect of Polygonum Cuspidatumon Anti-respiratory Syncytial Virus(RSV)Basing on Lipid Metabolism

Xie Tong，Du Lina，Xu Jianya，Shen Cunsi，Wang Shouchuan，Shan Jinjun

(Jiangsu Key Laboratory of Pediatric Respiratory Disease，Institute of Pediatrics，Nanjing UniversityofTraditionalChineseMedicine，Nanjing210023，China)

Objective:To observe the effect of Polygonum cuspidatum on the lipid metabolism changes of BALB/c mice caused by anti-respiratory syncytial virus.Methods:Eighteen BALB/c mice were grouped into three groups randomly，blank control group，RSV group，and Polygonum cuspidatem group.RSV group and Polygonum cuspidatem group were infected by RSV through nasal inhalation.Bland control group experienced intragastric administration of normal saline.Plasma were taken after the experiment to measure its lipid metabolism materials.And the lipids were extracted by Methyl tert-butyl ether(MTBE)and then were introduced into HPLC-LTQ-Orbitrap for lipidomic analysis.OPLS-DA model were calculated for cluster of the three groups，and discriminated lipids were detected by One Way ANOVA(P<0.05).The structure of the discriminated lipids were determined，explaining the regulation oflipid metabolism.Results:The score plot of the OPLS-DA model provided the obvious discrimination of the three groups，suggesting the lipid metabolism regulated were phosphatidylcholine,triacylglycerol and phosphorylated ceramide.The further One Way ANOVA analysis suggested that the levels of the lyso glycerophosphocholines(Lyso PCs)and phosphated ceramides were significantly decreased when RSV were inoculated intranasally，while the Polygonum cuspidatum can increased this changes.Conclusion:Polygonum cuspidatum potents the anti-RSV effect by regulating the lipid metabolism.

Lipidomic analysis；Polygonum cuspidatum；RSV Pneumonia；Liquid mass spectrometry

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(編號(hào)：81303295，81373688)；江蘇省自然科學(xué)基金青年基金項(xiàng)目(編號(hào)：BK20130959)；江蘇省高校自然科學(xué)研究面上項(xiàng)目(編號(hào)：13KJB360005)

謝彤(1985—)，南京中醫(yī)藥大學(xué)助理研究員，研究方向：代謝組學(xué)與中醫(yī)藥，E-mail：sunnyxyl1021@163.com

單進(jìn)軍(1979—)，南京中醫(yī)藥大學(xué)副研究員，研究方向：代謝組學(xué)與中醫(yī)藥，E-mail：dfsjj@163.com

R285.5

A doi：10.3969/j.issn.1673-7202.2016.09.006