周江，黃艷美，龔越飛，季倩祎

［1.義烏市產品（商品）質量監(jiān)督檢驗研究院，浙江義烏 322000；2.浙江大學醫(yī)學院附屬第四醫(yī)院，浙江義烏 322000］

超高效液相色譜法測定美白、祛痘化妝品中4種禁用激素

周江1，黃艷美2，龔越飛1，季倩祎1

［1.義烏市產品（商品）質量監(jiān)督檢驗研究院，浙江義烏 322000；2.浙江大學醫(yī)學院附屬第四醫(yī)院，浙江義烏 322000］

建立了超高效液相色譜同時測定美白、祛痘化妝品中4種糖皮質激素氫化可的松、曲安奈德醋酸酯、氯倍他索丙酸酯、倍他米松雙丙酸酯的方法。樣品采用甲醇渦旋超聲提取，色譜柱采用Waters ACQUITY UPLC BEH C18柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm），流動相為乙腈-水溶液，梯度洗脫，流量為0.5 mL/min，用PDA檢測器檢測，檢測波長為240 nm。方法檢出限以3倍空白噪音計，氫化可的松、曲安奈德醋酸酯、氯倍他索丙酸酯、倍他米松雙丙酸酯的檢出濃度分別為0.12，0.18，0.30，0.30 mg/kg。在質量濃度為1.0～40.0 mg/L時，標準工作曲線相關系數r＞0.999 8，4種激素的回收率為85.3%～102.8%，測定結果的相對標準偏差為2.1%～5.0%（n=6）。該方法前處理簡單，分離效果好，且靈敏度高，速度快，能滿足美白、祛痘化妝品中4中糖皮質激素的檢測需要。

糖皮質激素；美白、祛痘化妝品；超高效液相色譜

美白、祛痘化妝品一直以來深得女性青睞，為了提高產品的美白、祛痘效果，有些不法商家在化妝品中違禁添加糖皮質激素類物質。2015年8月22日國家食品藥品監(jiān)督管理總局關于11批次面膜類化妝品不合格的通告（2015年第56號）中，通報11批次面膜類產品存在非法添加糖皮質激素，被檢測出的激素有氯倍他索丙酸酯（Clobetasol 17-propionate）、倍他米松雙丙酸酯（Betamethasone dipropionate）、曲安奈德醋酸酯（Triamcinolone acetonide acetate）和氫化可的松（Hydrocortisone）［1］。

糖皮質激素可抑制纖維細胞增生、減少5-羥色胺形成，因而對皮膚具有一定的嫩白作用［2］。但長期使用糖皮質激素可能產生激素依賴，一旦停用，用藥局部則出現紅斑、炎性水腫，還可能伴有紅色丘疹及膿皰等。許多患者還會出現不同程度的表皮萎縮、色素減退或色素沉著、毛細血管擴張等癥狀［3］。因此《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》（2007）［4］和歐盟化妝品法規(guī)（EC）NO1223/2009［5］均將其列為禁用物質。

化妝品中糖皮質激素檢測方法主要有液相色譜-串聯質譜法［6］、薄層層析法［6］、液相色譜法［7-15］、分光光度法［16］。而關于使用超高效液相色譜法對氯倍他索丙酸酯、倍他米松雙丙酸酯、曲安奈德醋酸酯和氫化可的松這4種物質進行檢測的文獻比較少。相對于普通高效液相色譜法，超高效液相色譜法在分析速度、分離度和靈敏度方面有更好的表現。筆者采用超高效液相色譜法對這4種糖皮質激素進行測定，目的是建立一種簡單、快速、準確檢測糖皮質激素的方法。

1　實驗部分

1.1主要儀器與試劑

超高效液相色譜（UPLC）儀：Waters Acquity型，帶PDA檢測器，Empower 色譜工作站，美國Waters公司；

渦旋混勻器：MS 3digital型，德國IKA集團；

高速離心機：H1650型，長沙湘儀離心機儀器有限公司；

超聲波清洗器：AS3210型，天津奧特賽恩斯儀器有限公司；

糖皮質激素：氯倍他索丙酸酯、倍他米松雙丙酸酯、曲安奈德醋酸酯和氫化可的松，純度為97%～98%，上海安譜實驗科技股份有限公司；

甲醇、乙腈：色譜純，德國Merck公司；

乙酸：優(yōu)級純，國藥集團化學試劑有限公司；

乙酸銨：分析純，國藥集團化學試劑有限公司；

糖皮質激素單標溶液：1 000 mg/L，準確稱取各激素標準物質10 mg于10 mL容量瓶中，用甲醇定容；

糖皮質激素混合標準溶液：準確移取各糖皮質激素單標溶液1.0 mL于10 mL容量瓶中，用甲醇定容，得各組分質量濃度均為100 mg/L的糖皮質激素混合標準溶液；

化妝品樣品：維C保濕活膚營養(yǎng)霜，義烏市浪漫化妝品有限公司；

實驗用水為超純水，由Mili-Q Water system（MILLIPORE公司，美國）制備，電阻率不小于18.2 MΩ·cm。

1.2標準溶液的配制

分別取0.1，0.2，0.5，1.0，4.0 mL糖皮質激素混合標準溶液，用甲醇定容至10 mL，配制成質量濃度分別為1.0，2.0，5.0，10.0，40.0 mg/L的系列混合標準溶液。

1.3色譜條件

色譜柱：Waters ACQUITY UPLC BEH C18柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）；保護柱：VanGuard保護柱；檢測器：PDA檢測器；檢測波長：240 nm；流動相：乙腈-水；梯度洗脫程序：乙腈-水初始體積比為20∶80，乙腈所占比例在5 min內線性增長至80%，從5～6 min線性增長至100%，6 min后恢復為初始配比，保持2 min；流量：0.5 mL/min；進樣體積：5 μL；柱溫：30℃。

1.4樣品預處理

準確稱取約0.5 g樣品于具塞比色管中，用甲醇定容至10 mL，渦旋2 min，常溫超聲提取20 min，以10 000 r/min離心5 min，取上清液過0.22 μm濾膜備用。

2　結果與討論

2.1樣品提取條件的選擇

美白、祛痘化妝品主要形態(tài)有膏霜、乳液、溶液狀等，考慮到膏霜、乳液狀樣品不宜分散，筆者采用渦旋超聲提取方式對樣品進行提取。樣品先通過渦旋分散，再通過超聲提取，能提高提取效率。同時考察不同的提取劑（甲醇、乙腈、無水乙醇）、不同渦旋時間（1，2，4 min）和不同提取時間（10，20，25 min）等提取條件的提取效果。試驗結果表明，以甲醇為提取劑，渦旋2 min，超聲20 min時，待測成分提取完全。

2.2色譜條件的選擇

2.2.1色譜柱

分別考察了ACQUITY UPLC BEH C18（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）色譜柱和ACQUITY UPLC HSS T3 C18（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）色譜柱，結果表明，4種激素在兩種色譜柱中均能獲得理想的分離效果，筆者選用（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）色譜柱進行分析。

2.2.2洗脫條件

分別對乙腈-水、甲醇-水、甲醇-乙酸銨溶液和甲醇-乙酸溶液等流動相進行考察，結果表明乙腈-水作為流動相更有利于待測物的分離。考慮到激素種類較多且極性差較大，等度洗脫容易產生干擾，不利于各激素的分離。采用乙腈-水梯度洗脫的方法，并對梯度條件進行優(yōu)化，6 min內可完成分離檢測。

2.2.3檢測波長

利用PDA檢測器掃描，氫化可的松、曲安奈德醋酸酯、氯倍他索丙酸酯、倍他米松雙丙酸酯的最大吸收波長分別為245，240，239，239 nm，因此綜合考慮選取240 nm作為檢測波長。

2.3色譜分離效果

在1.3色譜條件下，4種糖皮質激素混合標準溶液的色譜圖見圖1。由圖1可知，氫化可的松、曲安奈德醋酸酯、氯倍他索丙酸酯、倍他米松雙丙酸酯分離良好。該方法保留時間重現性好，結合光譜圖能夠對檢出峰進行有效識別。陽性樣品色譜圖見圖2。由圖2可知，本方法干擾少，能夠有效分離4種激素，對于干擾可通過比較光譜圖進行鑒別。

圖1　4種糖皮質激素混合標準樣品色譜圖

圖2　陽性樣品色譜圖

2.4線性方程

分別將1.0，2.0，5.0，10.0，40.0 mg/L糖皮質激素混合標準溶液依次進樣，以各組分的色譜峰面積為縱坐標、各組分的質量濃度為橫坐標，進行線性回歸，標準工作曲線線性方程見表1。各組分線性范圍均為1.0～40.0 mg/L，由表1可知，在此濃度范圍內，線性相關系數均大于0.999 8。

表1　標準工作曲線線性方程和相關系數

2.5檢出限和定量限

根據《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》（2007）對檢出限和定量下限的定義，檢出限以3倍空白噪音、定量限以10倍空白噪音計算。各激素的檢出限、定量限及取0.5 g樣品時的檢出濃度和最低定量濃度見表2。由表2可知，本方法的檢出限遠低于薄層分析法的檢出限［6］，可有效滿足檢測要求。

表2　4種糖皮質激素的檢出濃度、定量濃度 mg/kg

2.6加標回收和精密度試驗

在0.5 g化妝品中，按高中低3個水平添加糖皮質激素標準樣品，添加量分別為100，50，20 μg，每組分別重復添加6次?；厥章屎途芏葴y定結果見表3。由表3可知，4種糖皮質激素加標回收率為85.3%～102.8%，測定結果的相對標準偏差為2.1%～5.0%，表明本法測量精密度和準確度均較高。

表3　加標回收和精密度試驗結果

3　結語

采用甲醇渦旋超聲提取，超高效液相色譜法同時測定美白、祛痘化妝品中4種糖皮質激素，該方法樣品前處理簡單，被測組分之間及其與樣品基質之間分離效果好，檢測靈敏度高，6 min完成測定，適于化妝品中4中糖皮質激素的快速測定。

［1］ 國家食品藥品監(jiān)督管理總局.國家食品藥品監(jiān)督管理總局關于11批次面膜類化妝品不合格的通告（2015年第56號）［R/OL］.［2015-08-22］.http：//www.sda.gov.cn/WS01/CL0087/127700.html.

［2］ 鄭星泉，周淑玉，周世偉.化妝品衛(wèi)生檢驗手冊［M］.北京：化學工業(yè)出版社，2003： 294.

［3］ 陸洪光.面部糖皮質激素依賴性皮炎［J］.臨床皮膚科雜志，2006，35（10）： 682-684.

［4］ 中華人民共和國衛(wèi)生部.化妝品衛(wèi)生規(guī)范［M］.北京：軍事醫(yī)學科學出版社，2007： 34.

［5］ The European Parliament and of the Council. Regulation（EC） No 1223/2009［J］. Official Journal of the European Union，2009：L342/91.

［6］ GB/T 24800.2-2009 化妝品中四十一種糖皮質激素的測定液相色譜/串聯質譜法和薄層層析法［S］.

［7］ 趙曉亞，林雁飛，胡小鐘，等.反相高效液相色譜法同時測定化妝品中的9 種糖皮質激素［J］.分析試驗室，2009，28（2）： 111-115.

［8］ 王超，馬強，王星.反相高效液相色譜法同時測定化妝品中的16種激素［J］.色譜，2006，24（6）： 654-655.

［9］ 徐春祥，倉義鵬，車文軍，等.高效液相色譜法測定洗發(fā)產品中5種違禁添加藥物［J］.日用化學工業(yè)，2009，39 （6）： 442-444.

［10］ 何笑榮，鄒定，劉文芳，等.高效液相色譜法-二極管陣列檢測器同時分析測定11種糖皮質激素［J］.中國醫(yī)學院藥學雜志，2008，28（2）： 109-111

［11］ 吳大南，鄭和輝，李潔.高效液相色譜法檢測化妝品中6種糖皮質激素［J］.中國衛(wèi)生檢驗雜志，2006，16（3）： 309-310.

［12］ 李娟，商少明，陳新，等.固相萃取-高效液相色譜法同時測定化妝品中［J］.分析試驗室.2013，32（5）： 77-80.

［13］ 馬強，王超，王星，等.超高效液相色譜法同時測定化妝品中的15種激素［J］.色譜，2007，25（4）： 541-545.

［14］ 劉家溍，席紹峰， 郭長虹，等.超高效液相色譜法快速測定生發(fā)育法產品中丙酸氯倍他索［J］.廣東化工，2013，40（11）：187-188.

［15］ 吳大南，鄭和輝，王萍，等.超高效液相色譜法檢測化妝品中8種糖皮質激素［J］.中國衛(wèi)生檢驗雜志，2008，18（2）： 197-198.

［16］ 劉軍.分光光度法測定化妝品中甾體激素含量［J］.中國衛(wèi)生檢驗雜志，2000，10（5）： 571-572.

大賣場童裝檢出致癌染料

在湖北武漢市質監(jiān)局最近進行的童裝產品質量安全風險監(jiān)測中，14%樣品不合格，有的樣品竟檢出高含量可分解致癌芳香胺染料，被列為嚴重不合格。質監(jiān)人士提醒家長：購買童裝時要聞一聞是否有刺激性氣味或異味，如有，可能是產品殘留的化學品，應謹慎購買。

此次風險監(jiān)測樣品總計50個，主要來自武漢各實體店（包括批發(fā)市場、超市、商場專柜）和電商網店（淘寶網、天貓商城、京東商城），主要監(jiān)測指標為可分解致癌芳香胺染料、甲醛含量、pH值、耐汗?jié)n色牢度等。

可分解芳香胺的毒性和致癌性遠強于甲醛。因為甲醛有刺激性氣味，易分辨，而且易溶于水，消費者買回紡織品后，一般用水洗一下就可去除大部分甲醛；但可分解芳香胺染料制成衣服后，不但不溶于水，而且無色無味，從紡織品外觀上無法分辨，只有通過技術檢驗才能發(fā)現，而且無法消除，這種染料在與人的皮膚接觸后，可引發(fā)多種惡性疾病、吸收致癌。

其它不合格樣品的不合格項主要為色牢度指標不合格即易掉色、耐汗?jié)n色牢度不合格等。質監(jiān)人士提醒，家長購買童裝時，應查看商品及包裝上是否有中文標注，以及安全類別、產品質量等級、質量檢驗合格證。購買嬰幼兒服裝應選擇注明嬰幼兒用品的產品，以輕軟保暖、淺色、親膚的純棉制品較好。新購買的貼身衣物最好洗了再穿，不僅衛(wèi)生，還可以洗掉產品浮色及其它化學殘留物。

（林）

歐盟加強汽車檢測和認證制度避免尾氣排放丑聞重演

德國大眾汽車尾氣排放丑聞不僅嚴重打擊了消費者對歐洲汽車業(yè)的信心，也暴露出歐盟及其成員國在汽車檢測和認證制度方面存在很多漏洞。主管就業(yè)、投資和增長的歐盟委員會副主席卡泰寧在新聞發(fā)布會上說，大眾汽車尾氣排放丑聞說明歐盟目前有關汽車業(yè)的法規(guī)過于寬松，“德國大眾的所作所為迫切地說明需要做出改變，我們要確保不再發(fā)生此類事件，這關系到歐洲的競爭，關系到消費者，關系到我們的環(huán)境?！?/p>

歐盟委員會當天提出的全面改革方案名為“歐盟各類汽車認證框架”，目的是確保汽車制造商嚴格遵守所有歐盟有關汽車安全、環(huán)境和生產方面的要求?？ㄌ幷f：“根據新建議，未來汽車的檢驗將更加獨立，并且要加強對已經進入流通領域的汽車的監(jiān)督。在單一市場中，貨物可以自由流通，因此每個人都必須遵守規(guī)則?！?/p>

（國際在線）

國家咖啡檢測重點實驗室在普洱開建

從云南省出入境檢驗檢疫局獲悉，經過地方政府和檢驗檢疫局積極籌備，國家咖啡檢測重點實驗室（普洱）在普洱市正式開工建設。

國家咖啡檢測重點實驗室（普洱）建成后，將填補我國咖啡產品專業(yè)實驗室的空白，為普洱咖啡產業(yè)檢驗檢疫、仲裁、科研、人員培訓和對外技術交流搭建起多功能服務平臺，為咖啡產品的對外貿易提供有力的技術支撐。

（林）

Determination of Four Prohibited Substances in Whitening or Acne Cosmetics by Ultra-performance Liquid Chromatography

Zhou Jiang1， Huang Yanmei2， Gong Yuefei1， Ji Qianyi1
［1. Yiwu Product （Commodity） Quality Supervision and Test Institute， Yiwu 322000， China；2. The Fourth Affiliated Hospital， Zhejiang University School of Medicine， Yiwu 322000， China］

An ultra-performance liquid chromatography method was established for simultaneously determination of four glucocorticoids： hydrocortisone， triamcinolone acetonide acetate， clobetasol 17-propionate and betamethasone dipropionate in whitening or acne cosmetics. After methanol extraction， glucocorticoids were separated on Waters ACQUITY UPLC BEH C18Column （100 mm×2.1 mm， 1.7 μm） by gradient elution using acetonitrile-water as the mobile phase at a flow rate of 0.5 mL/min， and detected by PDA detector at detecting wavelength of 240 nm. The detection limits as S/N=3 were 0.12， 0.18， 0.30， 0.30 mg/kg for hydrocortisone， triamcinolone acetonide acetate， clobetasol 17-propionate and betamethasone dipropionate， respectively. Within a glucocorticoid concentration range of 1.0-40.0 mg/L， the average recoveries for glucocorticoids were 85.3%-102.8%， the correlation coefficients of linear calibration curve were all more than 0.999 8， the relative standard deviations were 2.1%-5.0%（n=6）. The pretreatment is simple and the separation is quick and effective. The method is satisfactory for determination of four glucocorticoids in whitening or acne cosmetics.

glucocorticoids； whitening or acne cosmetics； ultra performance liquid chromatography

O657.7

A

1008-6145（2016）02-0052-04

10.3969/j.issn.1008-6145.2016.02.015

聯系人：周江；E-mail： 8849409@qq.com

2016-01-11