周江，黃艷美，龔越飛，季倩祎

［1.義烏市產(chǎn)品（商品）質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，浙江義烏 322000；2.浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第四醫(yī)院，浙江義烏 322000］

超高效液相色譜法測定美白、祛痘化妝品中4種禁用激素

周江1，黃艷美2，龔越飛1，季倩祎1

［1.義烏市產(chǎn)品（商品）質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，浙江義烏 322000；2.浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第四醫(yī)院，浙江義烏 322000］

建立了超高效液相色譜同時(shí)測定美白、祛痘化妝品中4種糖皮質(zhì)激素氫化可的松、曲安奈德醋酸酯、氯倍他索丙酸酯、倍他米松雙丙酸酯的方法。樣品采用甲醇渦旋超聲提取，色譜柱采用Waters ACQUITY UPLC BEH C18柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm），流動(dòng)相為乙腈-水溶液，梯度洗脫，流量為0.5 mL/min，用PDA檢測器檢測，檢測波長為240 nm。方法檢出限以3倍空白噪音計(jì)，氫化可的松、曲安奈德醋酸酯、氯倍他索丙酸酯、倍他米松雙丙酸酯的檢出濃度分別為0.12，0.18，0.30，0.30 mg/kg。在質(zhì)量濃度為1.0～40.0 mg/L時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)工作曲線相關(guān)系數(shù)r＞0.999 8，4種激素的回收率為85.3%～102.8%，測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.1%～5.0%（n=6）。該方法前處理簡單，分離效果好，且靈敏度高，速度快，能滿足美白、祛痘化妝品中4中糖皮質(zhì)激素的檢測需要。

糖皮質(zhì)激素；美白、祛痘化妝品；超高效液相色譜

美白、祛痘化妝品一直以來深得女性青睞，為了提高產(chǎn)品的美白、祛痘效果，有些不法商家在化妝品中違禁添加糖皮質(zhì)激素類物質(zhì)。2015年8月22日國家食品藥品監(jiān)督管理總局關(guān)于11批次面膜類化妝品不合格的通告（2015年第56號(hào)）中，通報(bào)11批次面膜類產(chǎn)品存在非法添加糖皮質(zhì)激素，被檢測出的激素有氯倍他索丙酸酯（Clobetasol 17-propionate）、倍他米松雙丙酸酯（Betamethasone dipropionate）、曲安奈德醋酸酯（Triamcinolone acetonide acetate）和氫化可的松（Hydrocortisone）［1］。

糖皮質(zhì)激素可抑制纖維細(xì)胞增生、減少5-羥色胺形成，因而對皮膚具有一定的嫩白作用［2］。但長期使用糖皮質(zhì)激素可能產(chǎn)生激素依賴，一旦停用，用藥局部則出現(xiàn)紅斑、炎性水腫，還可能伴有紅色丘疹及膿皰等。許多患者還會(huì)出現(xiàn)不同程度的表皮萎縮、色素減退或色素沉著、毛細(xì)血管擴(kuò)張等癥狀［3］。因此《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》（2007）［4］和歐盟化妝品法規(guī)（EC）NO1223/2009［5］均將其列為禁用物質(zhì)。

化妝品中糖皮質(zhì)激素檢測方法主要有液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法［6］、薄層層析法［6］、液相色譜法［7-15］、分光光度法［16］。而關(guān)于使用超高效液相色譜法對氯倍他索丙酸酯、倍他米松雙丙酸酯、曲安奈德醋酸酯和氫化可的松這4種物質(zhì)進(jìn)行檢測的文獻(xiàn)比較少。相對于普通高效液相色譜法，超高效液相色譜法在分析速度、分離度和靈敏度方面有更好的表現(xiàn)。筆者采用超高效液相色譜法對這4種糖皮質(zhì)激素進(jìn)行測定，目的是建立一種簡單、快速、準(zhǔn)確檢測糖皮質(zhì)激素的方法。

1　實(shí)驗(yàn)部分

1.1主要儀器與試劑

超高效液相色譜（UPLC）儀：Waters Acquity型，帶PDA檢測器，Empower 色譜工作站，美國Waters公司；

渦旋混勻器：MS 3digital型，德國IKA集團(tuán)；

高速離心機(jī)：H1650型，長沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司；

超聲波清洗器：AS3210型，天津奧特賽恩斯儀器有限公司；

糖皮質(zhì)激素：氯倍他索丙酸酯、倍他米松雙丙酸酯、曲安奈德醋酸酯和氫化可的松，純度為97%～98%，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司；

甲醇、乙腈：色譜純，德國Merck公司；

乙酸：優(yōu)級(jí)純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；

乙酸銨：分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；

糖皮質(zhì)激素單標(biāo)溶液：1 000 mg/L，準(zhǔn)確稱取各激素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)10 mg于10 mL容量瓶中，用甲醇定容；

糖皮質(zhì)激素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確移取各糖皮質(zhì)激素單標(biāo)溶液1.0 mL于10 mL容量瓶中，用甲醇定容，得各組分質(zhì)量濃度均為100 mg/L的糖皮質(zhì)激素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液；

化妝品樣品：維C保濕活膚營養(yǎng)霜，義烏市浪漫化妝品有限公司；

實(shí)驗(yàn)用水為超純水，由Mili-Q Water system（MILLIPORE公司，美國）制備，電阻率不小于18.2 MΩ·cm。

1.2標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

分別取0.1，0.2，0.5，1.0，4.0 mL糖皮質(zhì)激素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，用甲醇定容至10 mL，配制成質(zhì)量濃度分別為1.0，2.0，5.0，10.0，40.0 mg/L的系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3色譜條件

色譜柱：Waters ACQUITY UPLC BEH C18柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）；保護(hù)柱：VanGuard保護(hù)柱；檢測器：PDA檢測器；檢測波長：240 nm；流動(dòng)相：乙腈-水；梯度洗脫程序：乙腈-水初始體積比為20∶80，乙腈所占比例在5 min內(nèi)線性增長至80%，從5～6 min線性增長至100%，6 min后恢復(fù)為初始配比，保持2 min；流量：0.5 mL/min；進(jìn)樣體積：5 μL；柱溫：30℃。

1.4樣品預(yù)處理

準(zhǔn)確稱取約0.5 g樣品于具塞比色管中，用甲醇定容至10 mL，渦旋2 min，常溫超聲提取20 min，以10 000 r/min離心5 min，取上清液過0.22 μm濾膜備用。

2　結(jié)果與討論

2.1樣品提取條件的選擇

美白、祛痘化妝品主要形態(tài)有膏霜、乳液、溶液狀等，考慮到膏霜、乳液狀樣品不宜分散，筆者采用渦旋超聲提取方式對樣品進(jìn)行提取。樣品先通過渦旋分散，再通過超聲提取，能提高提取效率。同時(shí)考察不同的提取劑（甲醇、乙腈、無水乙醇）、不同渦旋時(shí)間（1，2，4 min）和不同提取時(shí)間（10，20，25 min）等提取條件的提取效果。試驗(yàn)結(jié)果表明，以甲醇為提取劑，渦旋2 min，超聲20 min時(shí)，待測成分提取完全。

2.2色譜條件的選擇

2.2.1色譜柱

分別考察了ACQUITY UPLC BEH C18（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）色譜柱和ACQUITY UPLC HSS T3 C18（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）色譜柱，結(jié)果表明，4種激素在兩種色譜柱中均能獲得理想的分離效果，筆者選用（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）色譜柱進(jìn)行分析。

2.2.2洗脫條件

分別對乙腈-水、甲醇-水、甲醇-乙酸銨溶液和甲醇-乙酸溶液等流動(dòng)相進(jìn)行考察，結(jié)果表明乙腈-水作為流動(dòng)相更有利于待測物的分離?？紤]到激素種類較多且極性差較大，等度洗脫容易產(chǎn)生干擾，不利于各激素的分離。采用乙腈-水梯度洗脫的方法，并對梯度條件進(jìn)行優(yōu)化，6 min內(nèi)可完成分離檢測。

2.2.3檢測波長

利用PDA檢測器掃描，氫化可的松、曲安奈德醋酸酯、氯倍他索丙酸酯、倍他米松雙丙酸酯的最大吸收波長分別為245，240，239，239 nm，因此綜合考慮選取240 nm作為檢測波長。

2.3色譜分離效果

在1.3色譜條件下，4種糖皮質(zhì)激素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖見圖1。由圖1可知，氫化可的松、曲安奈德醋酸酯、氯倍他索丙酸酯、倍他米松雙丙酸酯分離良好。該方法保留時(shí)間重現(xiàn)性好，結(jié)合光譜圖能夠?qū)z出峰進(jìn)行有效識(shí)別。陽性樣品色譜圖見圖2。由圖2可知，本方法干擾少，能夠有效分離4種激素，對于干擾可通過比較光譜圖進(jìn)行鑒別。

圖1　4種糖皮質(zhì)激素混合標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖

圖2　陽性樣品色譜圖

2.4線性方程

分別將1.0，2.0，5.0，10.0，40.0 mg/L糖皮質(zhì)激素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液依次進(jìn)樣，以各組分的色譜峰面積為縱坐標(biāo)、各組分的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，標(biāo)準(zhǔn)工作曲線線性方程見表1。各組分線性范圍均為1.0～40.0 mg/L，由表1可知，在此濃度范圍內(nèi)，線性相關(guān)系數(shù)均大于0.999 8。

表1　標(biāo)準(zhǔn)工作曲線線性方程和相關(guān)系數(shù)

2.5檢出限和定量限

根據(jù)《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》（2007）對檢出限和定量下限的定義，檢出限以3倍空白噪音、定量限以10倍空白噪音計(jì)算。各激素的檢出限、定量限及取0.5 g樣品時(shí)的檢出濃度和最低定量濃度見表2。由表2可知，本方法的檢出限遠(yuǎn)低于薄層分析法的檢出限［6］，可有效滿足檢測要求。

表2　4種糖皮質(zhì)激素的檢出濃度、定量濃度 mg/kg

2.6加標(biāo)回收和精密度試驗(yàn)

在0.5 g化妝品中，按高中低3個(gè)水平添加糖皮質(zhì)激素標(biāo)準(zhǔn)樣品，添加量分別為100，50，20 μg，每組分別重復(fù)添加6次?；厥章屎途芏葴y定結(jié)果見表3。由表3可知，4種糖皮質(zhì)激素加標(biāo)回收率為85.3%～102.8%，測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.1%～5.0%，表明本法測量精密度和準(zhǔn)確度均較高。

表3　加標(biāo)回收和精密度試驗(yàn)結(jié)果

3　結(jié)語

采用甲醇渦旋超聲提取，超高效液相色譜法同時(shí)測定美白、祛痘化妝品中4種糖皮質(zhì)激素，該方法樣品前處理簡單，被測組分之間及其與樣品基質(zhì)之間分離效果好，檢測靈敏度高，6 min完成測定，適于化妝品中4中糖皮質(zhì)激素的快速測定。

［1］ 國家食品藥品監(jiān)督管理總局.國家食品藥品監(jiān)督管理總局關(guān)于11批次面膜類化妝品不合格的通告（2015年第56號(hào)）［R/OL］.［2015-08-22］.http：//www.sda.gov.cn/WS01/CL0087/127700.html.

［2］ 鄭星泉，周淑玉，周世偉.化妝品衛(wèi)生檢驗(yàn)手冊［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2003： 294.

［3］ 陸洪光.面部糖皮質(zhì)激素依賴性皮炎［J］.臨床皮膚科雜志，2006，35（10）： 682-684.

［4］ 中華人民共和國衛(wèi)生部.化妝品衛(wèi)生規(guī)范［M］.北京：軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社，2007： 34.

［5］ The European Parliament and of the Council. Regulation（EC） No 1223/2009［J］. Official Journal of the European Union，2009：L342/91.

［6］ GB/T 24800.2-2009 化妝品中四十一種糖皮質(zhì)激素的測定液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜法和薄層層析法［S］.

［7］ 趙曉亞，林雁飛，胡小鐘，等.反相高效液相色譜法同時(shí)測定化妝品中的9 種糖皮質(zhì)激素［J］.分析試驗(yàn)室，2009，28（2）： 111-115.

［8］ 王超，馬強(qiáng)，王星.反相高效液相色譜法同時(shí)測定化妝品中的16種激素［J］.色譜，2006，24（6）： 654-655.

［9］ 徐春祥，倉義鵬，車文軍，等.高效液相色譜法測定洗發(fā)產(chǎn)品中5種違禁添加藥物［J］.日用化學(xué)工業(yè)，2009，39 （6）： 442-444.

［10］ 何笑榮，鄒定，劉文芳，等.高效液相色譜法-二極管陣列檢測器同時(shí)分析測定11種糖皮質(zhì)激素［J］.中國醫(yī)學(xué)院藥學(xué)雜志，2008，28（2）： 109-111

［11］ 吳大南，鄭和輝，李潔.高效液相色譜法檢測化妝品中6種糖皮質(zhì)激素［J］.中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2006，16（3）： 309-310.

［12］ 李娟，商少明，陳新，等.固相萃取-高效液相色譜法同時(shí)測定化妝品中［J］.分析試驗(yàn)室.2013，32（5）： 77-80.

［13］ 馬強(qiáng)，王超，王星，等.超高效液相色譜法同時(shí)測定化妝品中的15種激素［J］.色譜，2007，25（4）： 541-545.

［14］ 劉家溍，席紹峰， 郭長虹，等.超高效液相色譜法快速測定生發(fā)育法產(chǎn)品中丙酸氯倍他索［J］.廣東化工，2013，40（11）：187-188.

［15］ 吳大南，鄭和輝，王萍，等.超高效液相色譜法檢測化妝品中8種糖皮質(zhì)激素［J］.中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2008，18（2）： 197-198.

［16］ 劉軍.分光光度法測定化妝品中甾體激素含量［J］.中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2000，10（5）： 571-572.

大賣場童裝檢出致癌染料

在湖北武漢市質(zhì)監(jiān)局最近進(jìn)行的童裝產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測中，14%樣品不合格，有的樣品竟檢出高含量可分解致癌芳香胺染料，被列為嚴(yán)重不合格。質(zhì)監(jiān)人士提醒家長：購買童裝時(shí)要聞一聞是否有刺激性氣味或異味，如有，可能是產(chǎn)品殘留的化學(xué)品，應(yīng)謹(jǐn)慎購買。

此次風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測樣品總計(jì)50個(gè)，主要來自武漢各實(shí)體店（包括批發(fā)市場、超市、商場專柜）和電商網(wǎng)店（淘寶網(wǎng)、天貓商城、京東商城），主要監(jiān)測指標(biāo)為可分解致癌芳香胺染料、甲醛含量、pH值、耐汗?jié)n色牢度等。

可分解芳香胺的毒性和致癌性遠(yuǎn)強(qiáng)于甲醛。因?yàn)榧兹┯写碳ば詺馕?，易分辨，而且易溶于水，消費(fèi)者買回紡織品后，一般用水洗一下就可去除大部分甲醛；但可分解芳香胺染料制成衣服后，不但不溶于水，而且無色無味，從紡織品外觀上無法分辨，只有通過技術(shù)檢驗(yàn)才能發(fā)現(xiàn)，而且無法消除，這種染料在與人的皮膚接觸后，可引發(fā)多種惡性疾病、吸收致癌。

其它不合格樣品的不合格項(xiàng)主要為色牢度指標(biāo)不合格即易掉色、耐汗?jié)n色牢度不合格等。質(zhì)監(jiān)人士提醒，家長購買童裝時(shí)，應(yīng)查看商品及包裝上是否有中文標(biāo)注，以及安全類別、產(chǎn)品質(zhì)量等級(jí)、質(zhì)量檢驗(yàn)合格證。購買嬰幼兒服裝應(yīng)選擇注明嬰幼兒用品的產(chǎn)品，以輕軟保暖、淺色、親膚的純棉制品較好。新購買的貼身衣物最好洗了再穿，不僅衛(wèi)生，還可以洗掉產(chǎn)品浮色及其它化學(xué)殘留物。

（林）

歐盟加強(qiáng)汽車檢測和認(rèn)證制度避免尾氣排放丑聞重演

德國大眾汽車尾氣排放丑聞不僅嚴(yán)重打擊了消費(fèi)者對歐洲汽車業(yè)的信心，也暴露出歐盟及其成員國在汽車檢測和認(rèn)證制度方面存在很多漏洞。主管就業(yè)、投資和增長的歐盟委員會(huì)副主席卡泰寧在新聞發(fā)布會(huì)上說，大眾汽車尾氣排放丑聞?wù)f明歐盟目前有關(guān)汽車業(yè)的法規(guī)過于寬松，“德國大眾的所作所為迫切地說明需要做出改變，我們要確保不再發(fā)生此類事件，這關(guān)系到歐洲的競爭，關(guān)系到消費(fèi)者，關(guān)系到我們的環(huán)境?！?/p>

歐盟委員會(huì)當(dāng)天提出的全面改革方案名為“歐盟各類汽車認(rèn)證框架”，目的是確保汽車制造商嚴(yán)格遵守所有歐盟有關(guān)汽車安全、環(huán)境和生產(chǎn)方面的要求?？ㄌ幷f：“根據(jù)新建議，未來汽車的檢驗(yàn)將更加獨(dú)立，并且要加強(qiáng)對已經(jīng)進(jìn)入流通領(lǐng)域的汽車的監(jiān)督。在單一市場中，貨物可以自由流通，因此每個(gè)人都必須遵守規(guī)則?！?/p>

（國際在線）

國家咖啡檢測重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室在普洱開建

從云南省出入境檢驗(yàn)檢疫局獲悉，經(jīng)過地方政府和檢驗(yàn)檢疫局積極籌備，國家咖啡檢測重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（普洱）在普洱市正式開工建設(shè)。

國家咖啡檢測重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（普洱）建成后，將填補(bǔ)我國咖啡產(chǎn)品專業(yè)實(shí)驗(yàn)室的空白，為普洱咖啡產(chǎn)業(yè)檢驗(yàn)檢疫、仲裁、科研、人員培訓(xùn)和對外技術(shù)交流搭建起多功能服務(wù)平臺(tái)，為咖啡產(chǎn)品的對外貿(mào)易提供有力的技術(shù)支撐。

（林）

Determination of Four Prohibited Substances in Whitening or Acne Cosmetics by Ultra-performance Liquid Chromatography

Zhou Jiang1， Huang Yanmei2， Gong Yuefei1， Ji Qianyi1
［1. Yiwu Product （Commodity） Quality Supervision and Test Institute， Yiwu 322000， China；2. The Fourth Affiliated Hospital， Zhejiang University School of Medicine， Yiwu 322000， China］

An ultra-performance liquid chromatography method was established for simultaneously determination of four glucocorticoids： hydrocortisone， triamcinolone acetonide acetate， clobetasol 17-propionate and betamethasone dipropionate in whitening or acne cosmetics. After methanol extraction， glucocorticoids were separated on Waters ACQUITY UPLC BEH C18Column （100 mm×2.1 mm， 1.7 μm） by gradient elution using acetonitrile-water as the mobile phase at a flow rate of 0.5 mL/min， and detected by PDA detector at detecting wavelength of 240 nm. The detection limits as S/N=3 were 0.12， 0.18， 0.30， 0.30 mg/kg for hydrocortisone， triamcinolone acetonide acetate， clobetasol 17-propionate and betamethasone dipropionate， respectively. Within a glucocorticoid concentration range of 1.0-40.0 mg/L， the average recoveries for glucocorticoids were 85.3%-102.8%， the correlation coefficients of linear calibration curve were all more than 0.999 8， the relative standard deviations were 2.1%-5.0%（n=6）. The pretreatment is simple and the separation is quick and effective. The method is satisfactory for determination of four glucocorticoids in whitening or acne cosmetics.

glucocorticoids； whitening or acne cosmetics； ultra performance liquid chromatography

O657.7

A

1008-6145（2016）02-0052-04

10.3969/j.issn.1008-6145.2016.02.015

聯(lián)系人：周江；E-mail： 8849409@qq.com

2016-01-11