蔡婷，　徐顧榕，　林 凱，　宋菲菲，　張其圣，陳　功，　蔡義民，　張　慶，　向文良*

（1.西華大學(xué) 食品與生物工程學(xué)院，四川 成都610039；2.四川省食品發(fā)酵工業(yè)研究設(shè)計院，四川 成都 611130；3.日本國際農(nóng)業(yè)科學(xué)研究中心，日本 筑波30528686）

發(fā)酵用鮮辣椒中乳酸菌抗生素耐藥性與耐藥基因

蔡婷1，徐顧榕1，林 凱1，宋菲菲1，張其圣2，陳功2，蔡義民3，張慶1，向文良*1

（1.西華大學(xué) 食品與生物工程學(xué)院，四川 成都610039；2.四川省食品發(fā)酵工業(yè)研究設(shè)計院，四川 成都 611130；3.日本國際農(nóng)業(yè)科學(xué)研究中心，日本 筑波30528686）

以四川泡菜發(fā)酵用的新鮮二荊條辣椒表面上附著的乳酸菌為研究對象，分析其對四環(huán)素（TET）、鏈霉素（STR）和紅霉素（ERY）的耐藥性與耐藥基因。研究表明：用于發(fā)酵的鮮辣椒中，乳酸菌的含量約為2.18×104CFU/g，屬于Weissella cibaria（61.93%）、Lactococcus lactis（16.06%）、Enterococcus mundtii（5.50%）、Enterococcus faecalis（3.67%）、Enterococcus hirae（3.67%）、Leuconostoc mesenteroides（6.88%）和Leuconostoc holzapfelii（2.29%）。所有218株分離株均無ERY耐藥，但其中30株（13.76%）表現(xiàn)出TET和STR耐藥，包括10株W.cibaria（4.59%）、2株Lac.lactis（0.92%）、1株 E.mundtii（0.46%）、2株 Leu.mesenteroide（0.92%）和 1株Leu.holzapfelii（0.46%）STR耐藥菌株，9株W.cibaria（4.12%）、2株Lac.lactis（0.92%）、1株E.faecalis（0.46%）和2株E.hirae（0.92%）TET和STR二重耐藥菌株；除TET和STR二重耐藥菌株W.cibaria CT024中未檢出任何TET被檢基因外，其它耐藥株都有相應(yīng)1個或多個被檢基因被檢出。其中，在5種STR被檢耐藥基因中，strB的檢出率最高，達(dá)60.00%；aad6的檢出率最低，為16.67%。11種TET被檢耐藥基因中，tetB和tetC的檢出率最高，達(dá)到85.71%；tetZ的檢出率最低，為7.14%。同時，同種內(nèi)的不同菌株對STR或TET的耐藥性高低與耐藥基因的種類和數(shù)量多少無相關(guān)性。

鮮辣椒；乳酸菌；抗生素耐藥性；抗生素耐藥基因

抗生素耐藥性作為一種新型污染物于2006年由美國學(xué)者Pruden首先提出［1］，由于在環(huán)境介質(zhì)中的持久殘留以及在不同宿主間的傳播往往比抗生素本身危害更大，因此其對公共健康和食品安全構(gòu)成的威脅目前已成為植物學(xué)、土壤學(xué)、環(huán)境科學(xué)和食品科學(xué)等領(lǐng)域的研究熱點［2-4］。發(fā)酵蔬菜是一類以新鮮蔬菜為原料，在鹽存在條件下，經(jīng)乳酸菌等有益微生物發(fā)酵而成的一種食品。長期以來，發(fā)酵食品中的乳酸菌被認(rèn)為是安全的。但是近年來，隨著發(fā)酵食品中乳酸菌的抗生素耐藥性被大量發(fā)現(xiàn)，曾經(jīng)認(rèn)為是安全的發(fā)酵食品也出現(xiàn)了可轉(zhuǎn)移的抗生素耐藥性，為發(fā)酵食品的安全帶來了新的挑戰(zhàn)［5］。

蔬菜發(fā)酵技術(shù)是世界上最為古老的一種生物儲藏技術(shù)，是我國先民在生物技術(shù)領(lǐng)域?qū)κ澜绲囊淮筘暙I(xiàn)。辣椒發(fā)酵是辣椒加工的一種重要方式，在中國民間歷史悠久，發(fā)酵方式多樣［6］。鮮辣椒經(jīng)乳酸菌發(fā)酵后的辣椒制品，不僅具有脆嫩芳香、解膩開胃、酸辣鮮純正等獨特的風(fēng)味，而且其中富含的乳酸菌具有防便秘、降膽固醇、抗腫瘤以及調(diào)節(jié)人體各種生理機能等保健功效，因此深受消費者喜愛［7］。然而，近年來隨著抗生素耐藥性污染的加劇，中國常見的傳統(tǒng)發(fā)酵蔬菜產(chǎn)品中也發(fā)現(xiàn)了較高比例的抗生素耐藥菌株，為中國傳統(tǒng)發(fā)酵蔬菜的食品安全埋下了安全隱患［8-10］。過去人們通常認(rèn)為：發(fā)酵食品原料中抗生素的殘留是導(dǎo)致生產(chǎn)過程中耐藥菌產(chǎn)生的主要原因。然而，新的研究結(jié)果表明：環(huán)境介質(zhì)中的抗生素殘留水平除了對耐藥細(xì)菌的選擇以外，幾乎沒有環(huán)境毒性風(fēng)險［11］。因此，食品原料和加工環(huán)境中被污染的耐藥菌在食品生產(chǎn)過程中的增殖或耐藥性的水平傳播是食品生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的新的耐藥菌的主要原因。

辣椒表面的乳酸菌是辣椒自然發(fā)酵微生物的主要來源。盡管大多數(shù)與食物相關(guān)的乳酸菌“一般被認(rèn)為是安全的”［12］，但是近年來乳酸菌可轉(zhuǎn)移耐藥性的發(fā)現(xiàn)為乳酸菌的安全性敲響了警鐘。辣椒在種植過程中，環(huán)境中的耐藥菌不可避免會附著在辣椒表面，盡管濃度低，但是一旦它們進入發(fā)酵系統(tǒng)，就可能向其它微生物傳播抗生素耐藥性，造成耐藥菌群的擴大。基于此，作者以四川某泡菜企業(yè)用于發(fā)酵的新鮮二荊條辣椒表面附著的乳酸菌為研究對象，以辣椒種植過程中常用的農(nóng)用抗生素鏈霉素、四環(huán)素和紅霉素為選擇因子，分析其抗生素耐藥性，并檢測耐藥基因，以期為發(fā)酵辣椒選用安全的辣椒原料提供參考，確保發(fā)酵辣椒的食品安全。

1　材料與方法

1.1材料

辣椒：四川某泡菜企業(yè)用于發(fā)酵的新鮮二荊條辣椒，產(chǎn)地分布在西南、西北和東南省份；培養(yǎng)基：MRS與及改良的MRS瓊脂培養(yǎng)基 （含0.75%的CaCO3）［13］；鏈霉素（STR）、四環(huán)素（TET）和紅霉素（ERY）標(biāo)準(zhǔn)品：北京標(biāo)準(zhǔn)品中心。

1.2方法

1.2.1菌株分離與生化特征分析隨機選取上述產(chǎn)地新鮮辣椒各1 kg，混勻后裝入盛有3 000 mL無菌生理鹽水的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器Bagmixer均質(zhì)5min。取適量均質(zhì)液，10倍梯度稀釋后涂布于改良MRS瓊脂培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)48 h。選取菌落適宜的平板統(tǒng)計菌落數(shù)，并挑取有明顯溶鈣圈的菌落于MRS平板上劃線純化。純化菌株接種到MRS液體培養(yǎng)基中富集培養(yǎng)后，轉(zhuǎn)移至30%的無菌甘油凍藏管中，-20℃保藏備用。菌株的生理生化特征按《乳酸細(xì)菌分類鑒定及試驗方法》進行［13］。

1.2.2RAPD聚類分析菌株基因組DNA的提取和RAPD聚類分析參見Xiang［14］等的方法。PCR擴增引物為G1：5’-GAAGTCGTAACAAGG-3’和L1：5’-CAAGGCATCCACCGT-3’。PCR擴增條件：94℃變性1 min，55℃退火2 min，72℃ 延伸3 min，25個循環(huán)。擴增產(chǎn)物經(jīng)PAGE電泳后，條帶用LabImage 2.7.1識別并轉(zhuǎn)化成0/1矩陣，NTSYS PC 2.11做非加權(quán)組平均法（unweighted pair-group method with arithmeticmean，UPGMA）聚類分析［15-16］。

1.2.316S rRNA序列分析16S rRNA擴增與序列分析見Xiang［17］等的方法。PCR擴增引物為Eu27F：5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’和1490R：5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’。PCR條件：95℃預(yù)變性5 min，然后95℃變性1 min、50℃退火1 min、72℃延伸2 min，30個循環(huán)，最后72℃保持10 min。PCR產(chǎn)物連接到pGEM-T載體后克隆入感受態(tài)E.coli DH5α中，提取重組質(zhì)粒，測定16S rRNA序列。通過CLASSIFIER（RDPII，http：//rdp.cme.msu. edu./classifier/classifier.jsp）軟件，無嵌合體的16S rRNA序列與RDP數(shù)據(jù)庫中的模式菌株的進行相似性比較，確定菌株的分類學(xué)地位。

1.2.4抗生素耐藥性分析依據(jù)歐洲微生物藥物敏感委員會（http：//www.eucast.org）關(guān)于微生物對抗生 素 的 敏 感 閾 值X（http：//www.eucast.org/ mic_distributions/），分析菌株的抗生素耐藥性。當(dāng)分離菌株的最小抑菌質(zhì)量濃度 （Minimal Inhibitory Concentration，MIC）≤Xμg/mL時，為敏感菌株；反之，則為耐藥菌株。

MIC測定采用微量肉湯稀釋法［18］。分別將鏈霉素（STR）、四環(huán)素（TET）和紅霉素（ERY）配制成2 048μg/mL的貯存液，MRS液體培養(yǎng)基2倍梯度稀釋成使用液。STR質(zhì)量濃度為2～1 024μg/mL，TET和ERY質(zhì)量濃度為1～512μg/mL。向無菌的96孔板中加入198μL含不同質(zhì)量濃度抗生素的MRS液體培養(yǎng)基后，接種2μL菌株的培養(yǎng)液 （約1.0×107CFU/mL），37℃靜止培養(yǎng)24 h后，統(tǒng)計不同菌株的MIC。每組重復(fù)3次，并設(shè)置對照組。

1.2.5抗生素耐藥基因分析PCR檢測菌株的STR耐藥報告基因aph（3'）-IIIa、strA、strB、aadA和aad6［19-20］；TET耐藥報告基因 tetB、tetC、tetD、tetG、tetH、tetK、tetM、tetS、tetT、tetX和tetZ［21-23］；ERY耐藥報告基因ermA、ermB和mphA［22，24］。PCR程序：95℃預(yù)變性4 min，95℃變性30 s，待檢基因引物的退火溫度見表1。退火30 s，72℃延伸1min，30次循環(huán)后72℃延伸5 min。1.0 g/dL的瓊脂糖電泳檢測擴增產(chǎn)物，膠回收與上述報告基因的大小相同的片段。回收片段連接到pGEM-T載體后，克隆入感受態(tài)E.coli DH5α中，測定擴增片段序列，NCBI中利用BlastX程序比對擴增序列，進一步判斷分離株是否含有上述被檢耐藥基因。

2　結(jié)果與分析

2.1RAPD聚類與生化特征分析

乳酸菌是指發(fā)酵時能夠產(chǎn)生乳酸的一大類細(xì)菌，包括40個屬，近300個種。MRS平板分離乳酸菌時，利用其產(chǎn)生的乳酸溶解CaCO3形成溶鈣圈的特性，即可實現(xiàn)乳酸菌的初步分離。在當(dāng)前研究中，10 g鮮辣椒均質(zhì)液在稀釋度為10-1、接種200μL時，平板上有溶鈣圈的菌落共計218個，表明用于發(fā)酵的鮮辣椒原料中，附生乳酸菌的含量約為2.18×104CFU/g?；赗APD的UPGMA聚類分析發(fā)現(xiàn)：218株乳酸菌共分為7個群，見圖1。其中，菌株CT002代表的群最大（135株），約占61.93%；菌株CT081、CT110、CT142、CT147、CT217和CT218代表的群中，分別有12（5.50%）、8（3.67%）、8（3.67%）、15（6.88%）、5（2.29%）和35（16.06%）株乳酸菌。218株乳酸菌對糖和醇的利用特征進一步證實了RAPD分類的正確性，見表2。

表1　被檢抗生素耐藥基因的PCR引物序列、退火溫度和擴增片段大小Table 1　PCR primer，anneal tem perature and am plified fragment length of antibiotic resistance genes

圖1　發(fā)酵用的鮮辣椒中乳酸菌的RAPD聚類分析Fig.1　RAPD cluster analysis of LABs on the fresh hot pepper used to fermentation

2.216S rRNA序列分析

為進一步確定分離株的分類學(xué)地位，在上述7個乳酸菌群中，小于10株的群隨機選取5株、10～ 30株的群隨機選取10株、大于30株的群隨機選取15株，大于50株的群隨機選取25株，大于100株選取30株進行16S rRNA序列分析。結(jié)果表明：用于發(fā)酵的新鮮辣椒原料中，附生乳酸菌分為Weissella、Enterococcus、Leuconostoc和 Lactococcus屬，見表3。

CT002群屬于Weissella屬，抽檢菌株的16S rRNA序列與W.cibaria LMG 17699T的16S rRNA皆表現(xiàn)出100%相似性。同時，CT002群中的菌株對糖或醇的利用也與LMG 17699T表現(xiàn)一致，因此，CT002群中的乳酸菌被鑒定為W.cibaria。

CT081、CT110和CT142群皆屬于Enterococcus屬。3個群中，抽檢菌株的16S rRNA序列分別與E.mundtii ATCC 43186T、E.faecalis JCM 5803T和E.hirae DSM 20160T的16S rRNA相似99%。三個群中的菌株對糖和醇的利用也分別與各自群的相似菌株表現(xiàn)相同。因此，CT081、CT110和CT142群中的乳酸菌分別被鑒定為E.mundtii、E.faecalis和E.hirae。

CT147和CT217群中的菌株均屬于Leuconostoc屬。兩個群中，抽檢菌株的16S rRNA序列皆以100%相似性分別與Leu.mesenteroide ATCC 8293T和Leu.holzapfelii LMG 23990T的16S rRNA相似。兩群中的菌株對糖和醇的利用也分別與ATCC 8293T和LMG 23990T表現(xiàn)相同。因此，CT147和 CT217群中的乳酸菌分別被鑒定為 Leu. mesenteroide和Leu.holzapfelii。

表2　發(fā)酵用的鮮辣椒中乳酸菌的生理生化特征Table 2　Physiological and biochem ical characteristics of LABs on the fresh hot pepper used to fermentation

表3　發(fā)酵用的鮮辣椒中乳酸菌基于16S rRNA的分類學(xué)地位Table 3　M icrobial classification of LABs on the fresh hot pepper used to fermentation by 16S rRNA

CT218群屬于Lactococcus屬，抽檢菌株的16S rRNA序列與Lac.lactis NCDO 604T的16S rRNA序列相似性為99%。對糖和醇的利用，CT218群中的菌株與NCDO 604T表現(xiàn)一致。因此，CT218群中的的乳酸菌被鑒定為Lac.lactis。

2.3抗生素耐藥分析

依據(jù)歐洲微生物藥物敏感委員會關(guān)于上述乳酸菌對STR、TET和ERY的閾值X，比較分離株相應(yīng)的MIC，見表4。發(fā)現(xiàn)218株乳酸菌中有30株具有被檢抗生素的耐藥性，耐藥菌株比例為13.76%。其中，STR單一耐藥菌株16株 （7.34%），TET和 STR二重耐藥菌株14株（6.42%），無菌株表現(xiàn)ERY耐藥性。在30株STR和TET的單一或二重耐藥菌株中，同種的不同乳酸菌株對TET或STR的MIC值不同，表現(xiàn)出了耐藥性差異。W.cibaria CT032、CT065對STR的耐藥性最強，二者的MIC值是相應(yīng)的敏感閾值（64μg/mL）的16倍，達(dá)1 024μg/mL。

在135株W.cibaria中，有19株（8.70%）表現(xiàn)出了被檢抗生素的耐藥性。其中，有10株（4.59%）STR單一耐藥，9株 （4.13%）TET和STR的二重耐藥；在35株Lac.lactis中，有4株（1.83%）表現(xiàn)出了被檢抗生素的耐藥性。其中，2株 （0.92%）TET和STR二重耐藥，2株（0.92%）STR耐藥；在 12株E.mundtii、8株E.faecalis和8株E.hirae中，分別有1株（0.46%）STR耐藥、1株（0.46%）TET和STR二重耐藥和2株 （0.92%）TET和STR二重耐藥；在15株Leu.mesenteroide和5株Leu.holzapfelii中，分別有2株（0.92%）和1株（0.46%）STR單一耐藥。

表4　發(fā)酵用的鮮辣椒中STR、TET和ERY耐藥乳酸菌的M IC和抗生素耐藥性Table 4　M ICs and antibiotic resistance of the STR，TET and ERY resistant LABs on the fresh hot pepper used to fermentation　μg/mL

2.4抗生素耐藥基因分析

在30株STR和TET單一或二重耐藥菌株中，除STR和TET二重耐藥菌株W.cibaria CT024中未檢出TET被檢耐藥基因外，其它耐藥菌株都有相應(yīng)一個或多個被檢基因被檢出。W.cibaria CT024未檢出當(dāng)前的TET被檢耐藥基因，表明CT024中有其它TET耐藥基因存在。在STR耐藥菌株，strB的檢出率最高，達(dá)60.00%，其次是aph（3'）-IIIa，檢出率為53.30%。其它STR耐藥基因strA、aadA和aad6的檢出率分別為36.67%、20.00%和16.67%。TET耐藥菌株中，tetB和tetC檢出率最高，達(dá)到85.71%；tetS、tetX、tetK、tetT、tetH、tetM、tetD和tetZ的檢出率分別為62.29%、57.14%、50.00%、21.43%、21.43%、21.43%、14.29%和7.14%。W.cibaria CT003是當(dāng)前耐藥基因檢測種類出最多的菌株，包括5種STR基因，4種TET耐藥基因；W.cibaria CT024、W.cibaria CT030、W.cibaria CT032、W.cibaria CT096、W.cibaria CT203、Leu.holzapfelii CT217、E.hirae CT142、E.mundtii CT081、E.faecalis CT110和Lac.lactis CT218分別僅有一種STR耐藥基因。

在TET耐藥W.cibaria菌株中，11種TET被檢基因皆被部分檢出，但不同株的被檢基因種類不盡相同。在具有同樣MIC的STR耐藥W.cibaria菌株中，除CT03中5種被檢基因全部檢出外，其它菌株中皆被部分檢出，檢出基因的類型也不盡相同。Lac.lactis、E.hirae和Leu.mesenteroide中的不同耐藥菌株對STR和TET的耐藥基因分布也表現(xiàn)出了與W.cibaria類似的情況。上述結(jié)果表明：當(dāng)前被檢菌株中，同種內(nèi)的不同菌株對STR或TET的耐藥性的高低與相應(yīng)耐藥基因的種類和數(shù)量多少無相關(guān)性，見圖2。

圖2　發(fā)酵用的鮮辣椒中STR和TET耐藥乳酸菌的STR和TET耐藥基因分布Fig.2　STR and TET resistance gene distribution of STR and TET resistant LABs on the fresh hot pepper used to fermentation

3　結(jié)語

長期以來，人們對蔬菜安全性的關(guān)注多集中在蔬菜農(nóng)殘和重金屬等一些理化指標(biāo)上，很少注重其中的微生物指標(biāo)，特別是微生物抗生素耐藥性指標(biāo)［2］。蔬菜在其種植過程中接觸的水體、土壤、空氣及肥料中不可避免存在耐藥性菌株，因此，當(dāng)傳統(tǒng)意義上合格的蔬菜作為發(fā)酵蔬菜原料時，其安全性是值得討論的。當(dāng)前的研究表明：用于發(fā)酵的鮮辣椒原料中，乳酸菌的含量約為2.18×104CFU/g，主要屬于 W.cibaria（61.93%）、Lac.lactis（16.06%）、E.mundtii（5.50%）、E.faecalis（3.67%）、E.hirae（3.67% ）、Leu.mesenteroide（6.88% ） 和Leu. holzapfelii（2.29%）。所有218株乳酸菌分離株均無ERY耐藥性，但有30株表現(xiàn)出了TET和STR耐藥，約占分離株的13.76%。其中，STR單一耐藥菌株16株 （7.34%），STR和TET二重耐藥菌株14株（6.42%），在這些耐藥菌株中，同種內(nèi)的不同菌株對STR或TET的MIC值不同，表現(xiàn)出了耐藥性差異。同時，同種內(nèi)的不同菌株對STR或TET的耐藥性高低與耐藥基因的種類和數(shù)量多少無相關(guān)性。

Leu.mesenteroide、Lac.lactis和W.cibaria是發(fā)酵蔬菜中常見的乳酸菌。在用于發(fā)酵的辣椒原料中，這些菌中STR和TET單一或二重耐藥的發(fā)現(xiàn)為發(fā)酵辣椒的原料安全敲響了警鐘。因此，需建立抗生素耐藥性乳酸菌的檢測與防控體系，確保未經(jīng)二次滅菌即可直接食用的發(fā)酵辣椒的食品安全，維護廣大消費者的健康權(quán)益。

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會議信息

會議名稱（中文）：第十三屆國際工業(yè)微生物遺傳學(xué)大會

會議名稱（英文）：13th International Symposium on the Genetics of IndustrialMicroorganisms（GIM2016）

所屬學(xué)科：動植物微生物學(xué)，生物物理學(xué)、生物化學(xué)及分子生物學(xué)，遺傳與發(fā)育生物學(xué)

開始日期：2016-10-16

結(jié)束日期：2016-10-20

所在城市：湖北省武漢市

具體地點：武漢東湖國際會議中心

主辦單位：武漢大學(xué)、中國科學(xué)院上海生物工程研究中心

會議主席：鄧子新 武漢大學(xué)、武漢生物技術(shù)研究院

E-MAIL：GIM2016@163.com

會議網(wǎng)站：http://gim2016.cn

會議背景介紹：第十三屆國際工業(yè)微生物遺傳學(xué)大會（GIM2016）將于2016年10月16-20日在武漢東湖國際會議中心舉行。本屆大會將為全世界微生物遺傳學(xué)領(lǐng)域的科研工作者們提供一個促進交流、加強合作的高端平臺，會議為所有與會者精心安排了涵蓋微生物遺傳基礎(chǔ)研究與應(yīng)用研究前沿的主題分會以及墻報展示。會議真誠地邀請相關(guān)領(lǐng)域的國內(nèi)外專家學(xué)者在此匯聚一堂，展示最新科研成果。

Investigation of Antibiotic Resistance and Resistant Genes of Lactic Acid Bacteria on the Fresh Hot Pepper Used to Fermentation

CAITing1， XU Gurong1，LIN Kai1，SONG Feifei1，ZHANGQisheng2，CHEN Gong2，CAIYimin3， ZHANG Qing1，XIANGWenliang1*
（1.College of Food and Bioengineering，Xihua University，Chengdu 610039，China；2.Sichuan Academy of Food and Fermentation Industries，Chengdu 611130，China；3.Japan International Research Center for Agricultural Sciences，Tsukuba 30528686，Japan）

The antibiotic resistance and resistant genes of lactic acid bacteria（LABs）were investigated on the fresh hotpepperused to fermentation.In currentstudy，218 isolates suggested that about2.18×104CFU/g LABswere on the fresh hot pepper used to fermentation.These isolateswere assigned to Weissella cibaria（61.93%），Lactococcus lactis（16.06%），Leuconostoc mesenteroides（6.88%），Enterococcusmundtii（5.5%），Enterococcus faecalis（3.67%），Enterococcus hirae（3.67%）and Leuconostoc holzapfelii（2.29%）.Of the 218 isolates，no one displayed the resistance of erythromycin（ERY），but 30 isolates（13.76%）were found to be against streptomycin（STR）and tetracycline（TET）w ith one or two resistance，including 10 W.cibaria（4.59%），2 Lac.lactis（0.92%），1 E.mundtii（0.46%），2 Leu.mesenteroides（0.92%）and 1 Leu.holzapfelii（0.46%）w ith resistance to STR，And 9W.cibaria（4.12%），2 Lac.lactis（0.92%），1 E.faecalis（0.46%）and 2 E.hirae（0.92%）w ith resistance of TET and STR.In the TET and STR resistant strain W.cibaria CT024，none of TET resistantgeneswas found.While，the other TET and STR resistant strains had harbored one or more corresponding resistant genes.In 5 STR resistant genes had the highest detection rate w ith 60.00%，but aad6 w ith only 16.67%.Among 11 TET resistant genes，tetB and tetC had the highestdetection rate，85.71%，and tetZwas foundw ith 7.14%lowestdetection rate.For the currentantibiotic resistant strains，the STR or TET resistantphenotype of differentstrains in the same species was not directly related to the types or quantities of the corresponding antibiotic resistantgenes.

fresh pepper，lactic acid bacteria，antibiotic resistance，antibiotic resistantgenes

TS 201.3

A

1673—1689（2016）09—0941—09

2015-01-21

國家自然科學(xué)基金項目（31571935）；教育部春暉計劃項目（Z2014061）；四川省應(yīng)用基礎(chǔ)項目（2014JY0045）；四川省教育廳重點項目（14ZA0110）；四川省食品生物技術(shù)重點實驗室項目（SZJJ2014-007）。

向文良（1973—），男，四川仁壽人，理學(xué)博士，教授，碩士研究生導(dǎo)師，主要從事中國西南地區(qū)特色發(fā)酵食品微生物分子生態(tài)與生物過程學(xué)方面的研究。E-mail：xwllm7687@sina.com