陳 佳?。ㄉ綎|省榮成市俚島畜牧獸醫(yī)站　264317）

調(diào)查報(bào)告

榮成市兔多殺性巴氏桿菌的流行病學(xué)及血清學(xué)調(diào)查報(bào)告

陳 佳（山東省榮成市俚島畜牧獸醫(yī)站264317）

兔多殺性巴氏桿菌菌株血清型眾多，近年來(lái)從榮成各地區(qū)18個(gè)商品兔場(chǎng)送檢的病料中共分離出8株兔多殺性巴氏桿菌，革蘭氏染色為陰性短桿菌，單個(gè)或成對(duì)排列。無(wú)芽孢，大小0.2～0.4×0.6～.25μm；分離菌在麥康凱培養(yǎng)基上不生長(zhǎng)，能發(fā)酵葡萄糖，不發(fā)酵乳糖，尿素酶試驗(yàn)陰性，不產(chǎn)生硫化氫，吲哚試驗(yàn)陽(yáng)性，不液化明膠，過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)陽(yáng)性；經(jīng)凝集試驗(yàn)鑒定所分離到的細(xì)菌均為A群兔多殺性巴氏桿菌，易感兔接種試驗(yàn)?zāi)軌驈?fù)制出典型的病例。

兔多殺性巴氏桿菌是由兔多雜性巴氏桿菌引起的兔的一種接觸性、急性傳染病，由于病原的感染部位不同而呈現(xiàn)敗血癥、傳染性鼻炎、地方流行性肺炎、中耳炎、結(jié)膜炎、子宮積膿、睪丸炎和膿腫等病癥。我國(guó)大部分地區(qū)都有對(duì)該病的報(bào)道，證明兔巴氏桿菌病在我國(guó)已經(jīng)存在和流行，隨著養(yǎng)兔業(yè)的迅猛發(fā)展，本病的發(fā)生呈現(xiàn)上升趁勢(shì)。急性發(fā)病時(shí)常引起家兔大批量死亡，耐過(guò)兔生長(zhǎng)緩慢、飼料報(bào)酬降低或大批死亡及藥物防治費(fèi)用增加等，給養(yǎng)兔業(yè)造成了嚴(yán)重的直接或間接經(jīng)濟(jì)損失，是目前規(guī)?；B(yǎng)兔場(chǎng)的主要傳染病之一。

為研究兔多殺性巴氏桿菌病在榮成地區(qū)的流行病學(xué)情況及血清型分布情況，筆者對(duì)榮成地區(qū)的18個(gè)兔場(chǎng)送檢的病料進(jìn)行分離鑒定，經(jīng)流行病學(xué)調(diào)查、臨床觀察、病理剖解、病原分離鑒定、動(dòng)物攻毒試驗(yàn)等，確診為兔多殺性巴氏桿菌病，從而確定了該病的廣泛存在，為切實(shí)做好該病的防制工作提供依據(jù)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1　材料

1.1病料來(lái)源來(lái)自于榮成18個(gè)商品兔場(chǎng)的病死兔，用初步診斷為兔多殺性巴氏桿菌病的病兔的心血、肝臟、脾臟、輸卵管等組織進(jìn)行病原菌分離鑒定，所有分離菌株均采自發(fā)病兔。

1.2培養(yǎng)基巧克力瓊脂平板、鮮血瓊脂平板、普通馬丁肉湯及含1%裂解血球全血培養(yǎng)基，均由自行配制。

1.3試驗(yàn)動(dòng)物1.5kg左右健康易感兔，購(gòu)自山東榮成某養(yǎng)兔場(chǎng)。

1.4其它實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備各種容器、平板、培養(yǎng)箱等均由本站提供。

2　方法

2.1觀察并記錄發(fā)病兔臨床癥狀及剖解特征，總結(jié)關(guān)于兔多殺性巴氏桿菌病的臨床癥狀、剖檢特征及流行病學(xué)特點(diǎn)。

2.2病原菌分離培養(yǎng)對(duì)典型病例取心血、肝臟涂片，染色鏡檢，并無(wú)菌取心、肝、脾、肺、輸卵管等病料接種于巧克力瓊脂平板、鮮血瓊脂平板、普通馬丁肉湯及含1%裂解血球全血培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)18～24h觀察結(jié)果。選擇可疑菌進(jìn)行純培養(yǎng)并染色鏡檢。

2.3形態(tài)學(xué)觀察選擇可疑菌進(jìn)行純培養(yǎng)并染色鏡檢，觀察菌體形態(tài)和染色特征。

2.4分離菌生化特性試驗(yàn)取微量生化發(fā)酵管及各種生化培養(yǎng)基，將經(jīng)純化培養(yǎng)的各菌株接入后封口，37℃培養(yǎng)24～72h，觀察結(jié)果。

2.5血清學(xué)鑒定將分離菌純培養(yǎng)后，進(jìn)行平板凝集反應(yīng)，鑒定病原菌的血清型。

2.6兔多殺性巴氏桿菌分離株的毒力試驗(yàn)兔多殺性巴氏桿菌各分離菌株的毒力分開測(cè)定。將兔多殺性巴氏桿菌各分離菌株接種于含0.1%紅血球的馬丁肉湯中，37℃培養(yǎng)18～24h，進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。將各菌株菌液分別稀釋為1.0×104CFU/ml、1.0×103CFU/m、1.0×102CFU/m、10CFU/ml、5CFU/ml、2CFU/ml等6個(gè)不同劑量組，每個(gè)劑量組用1.5kg左右健康易感兔10只，頸部皮下注射兔多殺性巴氏桿菌各分離菌株菌液1ml，觀察10d，記錄臨床發(fā)病、死亡情況（死亡兔進(jìn)行細(xì)菌的再分離），觀察10d，所有試驗(yàn)兔全部剖殺，觀察病理變化并進(jìn)行細(xì)菌的再分離鑒定。

3　結(jié)果

3.1臨床癥狀及病理變化（1）通過(guò)對(duì)18例兔多殺性巴氏桿菌病病例的觀察，臨床癥狀及病理變化總結(jié)如下：由于侵害部位不同，臨床上可表現(xiàn)為敗血癥、鼻炎、肺炎、中耳炎、結(jié)膜炎、子宮積膿、睪丸炎等。（2）敗血癥病兔多表現(xiàn)為精神萎頓、食欲廢絕、呼吸迫促，體溫在40℃以上，鼻腔有分泌物，有時(shí)出現(xiàn)腹瀉，有的無(wú)任何明顯癥狀突然死亡。病程稍長(zhǎng)者表現(xiàn)為呼吸困難，鼻腔流出粘液性鼻液，打噴嚏，食欲減退，有時(shí)見腹瀉，病程一周左右，最終因衰竭死亡。（3）解剖病變主要表現(xiàn)為全身性出血、充血或壞死。鼻腔黏膜充血，有粘液膿性分泌物，氣管黏膜充血出血，伴有多量紅色泡沫，肺臟嚴(yán)重出血、充血，高度水腫，肝臟有許多針尖大小黃白色壞死點(diǎn)，脾臟、淋巴結(jié)腫大、出血。腸黏膜充血、出血，胸、腹腔有淡黃色積液。（4）肺炎型常呈急性經(jīng)過(guò)，很快死亡。病變主要集中在肺尖葉、心葉和膈葉前下部。其病變表現(xiàn)為肺充血、出血、實(shí)變、膨脹不全、膿腫和出現(xiàn)灰色小結(jié)節(jié)。肺胸膜與心包膜常有纖維素附著，胸腔積液。鼻腔和氣管粘膜充血、出血，有粘稠的分泌物。淋巴結(jié)充血腫大。（5）鼻炎型病程較長(zhǎng)，但病死率低。主要表現(xiàn)為鼻孔流出漿液性、粘液性或粘膿性鼻液，經(jīng)常打噴嚏、咳嗽，并用前爪抓鼻部，使鼻孔周圍被毛潮濕、粘結(jié)甚至脫落。如病菌侵入眼、耳、皮下等部位，可引起相應(yīng)部位的結(jié)膜炎、中耳炎、皮下膿腫和乳腺炎等。（6）中耳炎也較常見，單純中耳炎無(wú)明顯癥狀，但如果病變蔓延至內(nèi)耳及腦部，則病兔出現(xiàn)頭頸歪斜，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)失調(diào)或其他神經(jīng)癥狀。剖檢時(shí)可見病兔一側(cè)或兩側(cè)鼓室內(nèi)有白色奶油狀滲出物，如炎癥蔓延至腦部，則可見化膿性腦膜炎變化。（7）母兔感染常無(wú)明顯臨床癥狀，但有時(shí)表現(xiàn)為不孕，并伴有膿性分泌物從陰道中流出，如轉(zhuǎn)為敗血癥，則往往造成死亡。公兔變現(xiàn)一側(cè)或兩側(cè)睪丸腫大。解剖可見母兔子宮炎和子宮積膿。公兔睪丸和附睪腫大、質(zhì)地堅(jiān)硬，有的伴有膿腫。

3.2流行特點(diǎn)該病一年四季均可發(fā)生，冬季及春季多發(fā)。主要發(fā)生于2～3月齡的幼兔，也有斷奶后仔兔發(fā)病。發(fā)病率為20%～80%，死亡率為30%～60%不等；發(fā)病不死亡的家兔往往生長(zhǎng)緩慢。在飼養(yǎng)管理?xiàng)l件差、通風(fēng)不良、地面潮濕、墊草更換不勤或反復(fù)使用的兔場(chǎng)發(fā)病和死亡嚴(yán)重。本病的發(fā)生還表現(xiàn)明顯的“疫點(diǎn)”特征，某個(gè)兔場(chǎng)一旦發(fā)生該病，其周圍的兔場(chǎng)也相繼發(fā)生該病的流行。

3.3細(xì)菌分離從18份病死兔病料中共分離出8株兔多殺性巴氏桿菌，分離率為44.4%（8/18）。心血、肝和淋巴結(jié)涂片中可以觀察到無(wú)芽孢的革蘭氏陰性短桿菌存在。分離菌在巧克力瓊脂平板和鮮血瓊脂平板上，經(jīng)37℃、18～24h培養(yǎng)，可長(zhǎng)出灰白色、表面光滑、隆起、邊緣整齊的中等大小菌落，并有熒光性，但不溶血。麥康凱上不生長(zhǎng)，在肉湯中培養(yǎng)時(shí)，初期均勻渾濁，24h后上清液清亮，管底有灰白色絮狀沉淀，輕搖時(shí)呈絮狀上升，表面形成附壁菌環(huán)。

3.4形態(tài)學(xué)觀察病死兔心血、肝組織及培養(yǎng)物、純培養(yǎng)菌涂片染色鏡檢可見到革蘭氏陰性短桿菌，不形成芽孢，無(wú)運(yùn)動(dòng)性，菌體呈單個(gè)、成對(duì)或偶呈鏈狀排列，大小為0.2～0.4×0.6～2.5μm，用瑞氏染色則見菌體兩端濃染。

3.5生化試驗(yàn)8株分離菌分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不發(fā)酵乳糖、鼠李糖，M.R試驗(yàn)、尿素酶試驗(yàn)陰性，吲哚、氧化酶、硫化氫試驗(yàn)陽(yáng)性，不液化明膠。

3.6血清型的鑒定結(jié)果經(jīng)凝集試驗(yàn)證實(shí)，所分離到的8株細(xì)菌均為A群兔多殺性巴氏桿菌。

3.7兔多殺性巴氏桿菌分離株的毒力試驗(yàn)對(duì)兔多殺性巴氏桿菌各分離菌株的毒力進(jìn)行單獨(dú)測(cè)定。將兔多殺性巴氏桿菌各分離菌株培養(yǎng)菌液分別稀釋為1.0×104CFU/ ml、1.0×103CFU/m、1.0×102CFU/ml、10CFU/ml、5CFU/ ml、2CFU/ml等6個(gè)不同劑量組，每個(gè)劑量組用1.5kg左右健康易感兔10只，頸部皮下注射兔多殺性巴氏桿菌各分離菌株菌液1ml，觀察10d，記錄臨床發(fā)病、死亡情況（死亡兔進(jìn)行細(xì)菌的再分離），觀察10d，能使試驗(yàn)兔出現(xiàn)不同程度的發(fā)病。詳細(xì)結(jié)果見附表。

附表　14株兔多殺性巴氏桿菌分離株的毒力試驗(yàn)發(fā)病死亡結(jié)果

4　小結(jié)

（1）本試驗(yàn)對(duì)不同兔場(chǎng)送檢的初步診斷為兔多殺性巴氏桿菌病的病死兔的病料進(jìn)行了各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室檢查，包括分離培養(yǎng)、形態(tài)學(xué)觀察、生化反應(yīng)試驗(yàn)、血清型鑒定、毒力試驗(yàn)等，共分離出8株兔多殺性巴氏桿菌，分離率為44.4%（8/18）。經(jīng)鑒定，該分離的8株兔多殺性巴氏桿菌的生化反應(yīng)符合兔多殺性巴氏桿菌菌屬的特性，這與有關(guān)資料的報(bào)道是一致的。（2）兔多殺性巴氏桿菌4號(hào)菌株頸部皮下注射2～5CFU菌液，能夠使試驗(yàn)兔10/10發(fā)病，并全部死亡，表現(xiàn)明顯的兔多殺性巴氏桿菌病癥狀，剖檢試驗(yàn)兔可見明顯的兔多殺性巴氏桿菌病病理變化，死亡兔均分離到血清A群兔多殺性巴氏桿菌，表明兔多殺性巴氏桿菌4號(hào)菌株具有較強(qiáng)毒力。

S858.291

A

1007-1733（2016）10-0047-02

2016-07-13）