王軍武，夏 天，伍曉汀

STAT信號通路蛋白STAT1在乳腺癌中的表達(dá)及臨床意義

王軍武，夏 天，伍曉汀

目的 研究STAT信號通路蛋白STAT1在乳腺癌中的表達(dá)及其與臨床病理特征的相關(guān)性。方法 收集95例手術(shù)切除的女性乳腺癌患者腫瘤組織標(biāo)本，采用免疫組織化學(xué)染色法，檢測STAT信號通路蛋白STAT1在乳腺癌組織中的表達(dá)，分析STAT1的表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性。結(jié)果 蛋白STAT1在三陰性乳腺癌組織中呈高表達(dá) （免疫組化評分為4.76± 1.27），高于非三陰性乳腺癌組（免疫組化評分為3.33±1.61）（P＜0.05）；STAT1的表達(dá)與乳腺癌組織中的孕激素受體（PR）、人類表皮生長因子-2（HER-2）存在明顯的負(fù)相關(guān)性（P＜0.01），而與增值指數(shù)Ki-67存在一定的正相關(guān)性（P＜0.01）。結(jié)論 乳腺癌組織中STAT信號通路蛋白STAT1在三陰性乳腺癌組織中呈高表達(dá)，其表達(dá)水平與患者的臨床病理特征相關(guān)，STAT1可能是乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的重要分子生物學(xué)標(biāo)志物。

乳腺癌；STAT信號通路；STAT1；病理特征；相關(guān)性

乳腺癌是一種嚴(yán)重威脅女性健康的惡性腫瘤，發(fā)病率居女性所有腫瘤第2位［1］。根據(jù)其基因表達(dá)譜，可將乳腺癌分成5種分子亞型，即Luminal A型、Luminal B型、HER-2過表達(dá)型、Basal-like型以及Normal-like型［2］。三陰性乳腺癌是指雌激素受體、孕激素受體以及人表皮生長因子受體檢測結(jié)果皆為陰性的乳腺癌。與其他類型相比，三陰性乳腺癌患者不能從內(nèi)分泌治療以及靶向治療中獲益，復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移率高，預(yù)后較差，5年生存率低，成為近年來關(guān)注和研究的焦點(diǎn)。

信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子（signal transducers and activators of transcription，STAT）是一類調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、存活、分化和凋亡的重要胞質(zhì)轉(zhuǎn)錄因子［3］。STAT1為STAT家族的重要成員，參與免疫、炎癥以及腫瘤性疾病的調(diào)控。STAT1與多種腫瘤的形成有關(guān)，但它與乳腺癌，特別是三陰性乳腺癌關(guān)系的報(bào)道較少。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)分別對三陰性、非三陰性乳腺癌組織中STAT信號通路蛋白STAT1的表達(dá)進(jìn)行檢測，探討STAT1在乳腺癌中的表達(dá)水平與患者臨床病理特征的可能關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本及臨床資料來源 本研究共收集解放軍452醫(yī)院2010年4月～2015年10月經(jīng)病理學(xué)診斷明確的乳腺癌手術(shù)切除腫瘤組織標(biāo)本共95份 （其中三陰性乳腺癌患者25例，非三陰性乳腺癌患者70例），患者均為女性，年齡37～85歲（平均年齡54歲，中位年齡55歲），術(shù)前均未接受放療、化療及其他抗腫瘤治療。通過醫(yī)院HIS系統(tǒng)，查閱患者原始病歷資料，并進(jìn)一步在病理科查閱相關(guān)病理報(bào)告，收集患者的臨床病理數(shù)據(jù)。

1.2 免疫組織化學(xué)染色（IHC） 腫瘤組織標(biāo)本石蠟切片經(jīng)二甲苯脫蠟，10 min/次，共3次；脫蠟后用無水乙醇置換二甲苯，10min/次，共2次；然后經(jīng)過梯度酒精水化，并在PBS中浸泡10 min。采用高壓蒸汽法修復(fù)抗原，切片浸泡檸檬酸緩沖液中，高壓修復(fù)2min，緩慢冷卻至室溫后，使用0.3%過氧化氫溶液清除組織中的過氧化物酶，室溫避光孵育15min。切片使用3%BSA封閉，室溫孵育30min，隨后分別加入一抗STAT1（1∶100，英國Abcam公司）、Ki-67（1∶ 100，北京中杉金橋公司）、ER（1∶100，北京中杉金橋公司）、PR（1∶100，北京中杉金橋公司）、HER-2（1∶100，北京中杉金橋公司）；4℃孵育過夜。再加入EnVision鼠兔通用型二抗（上?；蚬荆?，37℃孵育30min，PBS搖床清洗5次。使用DAB顯色，蘇木素復(fù)染，最后用梯度酒精脫水，中性樹脂封片。

1.3 免疫組織化學(xué)染色評分 由兩位病理學(xué)專業(yè)醫(yī)生對免疫組化染色切片進(jìn)行獨(dú)立觀察和評分，事前未告知實(shí)驗(yàn)分組相關(guān)信息。免疫組化染色評分標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)胞核或者細(xì)胞漿染色為棕黃色或棕褐色者為陽性。在高倍鏡下（400倍）下隨機(jī)選擇5個(gè)不重復(fù)視野進(jìn)行計(jì)數(shù)，對陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)以及細(xì)胞染色強(qiáng)度進(jìn)行綜合判讀，參考Axiotis等［4］的標(biāo)準(zhǔn)，最終分值為陽性率與染色強(qiáng)度之和。但是，增殖指數(shù)Ki-67的評分僅使用陽性細(xì)胞百分比。根據(jù)免疫組化評分結(jié)果判定各相應(yīng)檢測指標(biāo)表達(dá)水平的高低。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，計(jì)數(shù)資料以例或百分比表示，采用單因素方差分析或Wilcoxon秩和檢驗(yàn)分析STAT1的表達(dá)與臨床病理指標(biāo)間相關(guān)性，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 STAT1與Ki-67在三陰性和非三陰性乳腺癌組織中的表達(dá) STAT1在所有乳腺癌組織中都有表達(dá)，STAT1陽性染色主要分布于腫瘤細(xì)胞的胞漿和胞核（圖1）。在三陰性乳腺癌組織中，STAT1在細(xì)胞核中呈強(qiáng)陽性染色（棕褐色），在胞漿中染色較強(qiáng)（黃棕色）。在非三陰性乳腺癌組織中，STAT1主要分布于胞漿中，胞核分布較少，整體陽性染色較弱。STAT1在三陰性乳腺癌中的表達(dá)水平明顯高于在非三陰性乳腺癌，Axiotis免疫組化評分分別為4.76±1.27和3.33±1.61，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）。此外，三陰性乳腺癌組織中，Ki-67高表達(dá)（＞30%）的患者比例明顯高于非三陰性乳腺癌患者（67.5%vs 32.5%，P＜0.01）。

2.2 STAT1表達(dá)水平與乳腺癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系 從表1可見，在95例乳腺癌患者中，STAT1表達(dá)水平與腫瘤大小、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分級、腫瘤分期以及雌激素受體（ER）表達(dá)情況相關(guān)性無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但STAT1表達(dá)水平與乳腺癌組織中孕激素受體（PR）、人類表皮生長因子-2（HER-2）表達(dá)存在明顯的負(fù)相關(guān)性（P＜0.01），而與增值指數(shù)Ki-67存在一定的正相關(guān)性（P＜0.01）。

表1　STAT1表達(dá)水平與乳腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系（例）

圖1 STAT1在三陰性與非三陰性乳腺癌中的表達(dá)（免疫組化染色×400）

3 討論

乳腺癌是臨床最常見的惡性腫瘤之一，并且類型較多，不同的類型之間在分子生物及病理特征上有較大的差異，因而其治療方式以及療效也存在明顯的差別。三陰性乳腺癌為其中一種亞型，約占所有乳腺癌的10%～20%［5］。本研究共納入乳腺癌患者95例，其中三陰性乳腺癌患者25例，所占比例與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致。Ki-67是細(xì)胞增殖過程中表達(dá)的一種核抗原，其指數(shù)高低與許多腫瘤分化程度、浸潤、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)，是顯示腫瘤增值率的成熟指標(biāo)之一。有研究顯示，Ki-67在三陰性乳腺癌中的表達(dá)率比在其他類型中更高，提示其可作為分子靶向治療的靶點(diǎn)［6］。在本研究中，納入的25例三陰性乳腺癌患者中，分別有3例出現(xiàn)術(shù)后復(fù)發(fā)和術(shù)后肺部轉(zhuǎn)移；而在非三陰乳腺癌組患者中，沒有術(shù)后復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移的患者。由此提示，三陰性乳腺癌患者Ki-67的高陽性率可能提示腫瘤細(xì)胞具有較強(qiáng)的侵襲轉(zhuǎn)移能力。

STAT是一種DNA結(jié)合蛋白，其最重要的功能是調(diào)控細(xì)胞增殖以及參與免疫應(yīng)答。STAT家族共發(fā)現(xiàn)了7名成員，其中STAT1是最早發(fā)現(xiàn)的成員，分子量為91 kD［7］。研究顯示，STAT在多種惡性腫瘤組織和細(xì)胞中表達(dá)異常，提示STAT表達(dá)異常與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展存在密切的關(guān)聯(lián)。目前在乳腺癌組織中僅僅發(fā)現(xiàn)STAT1、STAT3、STAT5有表達(dá)［8-9］。本研究發(fā)現(xiàn)，STAT1在所有乳腺癌組織中都有表達(dá)，其中在三陰性乳腺癌組織中的表達(dá)水平較非三陰性乳腺癌組織中高。另外，STAT1在三陰性乳腺癌組織中的表達(dá)多集中在細(xì)胞核內(nèi)，而在非三陰性乳腺癌組則集中在細(xì)胞漿中，并且表達(dá)水平較低，這可能與STAT1調(diào)控基因表達(dá)的功能相關(guān)。本研究還發(fā)現(xiàn)，STAT1與Ki-67的表達(dá)呈現(xiàn)明顯的相關(guān)性，但是二者之間的確切關(guān)系還需要進(jìn)一步研究。

有研究顯示，STAT1在乳腺癌發(fā)生過程中，通過調(diào)節(jié)免疫以及促進(jìn)腫瘤的免疫監(jiān)控達(dá)到抑制腫瘤的作用［10］。同時(shí)，小鼠乳腺中STAT1缺失可以抑制 EreB2/Neu介導(dǎo)的腫瘤形成，提示 STAT1與 ErebB2的作用是相互對立的。而本研究發(fā)現(xiàn)，STAT1的表達(dá)與HER-2（即ErebB2）的表達(dá)呈現(xiàn)明顯的負(fù)相關(guān)性，與上述報(bào)道一致。另外，STAT1的表達(dá)與PR也呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)性，提示STAT1在三陰性乳腺癌中可能成為潛在的調(diào)控及治療的作用靶點(diǎn)。

綜上所述，乳腺癌組織中STAT信號通路蛋白STAT1在三陰性乳腺癌組織中呈高表達(dá)，其表達(dá)水平與患者的臨床病理特征相關(guān)，STAT1可能是乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的重要分子生物學(xué)標(biāo)志物。

［1］張敏璐，黃哲宙，鄭瑩.中國2008年女性乳腺癌發(fā)病、死亡和患病情況的估計(jì)及預(yù)測 ［J］.中華流行病學(xué)雜志，2012，33（10）：1049-1051.

［2］中國抗癌協(xié)會.乳腺癌診治指南與規(guī)范（2015版）［J］.中國癌癥雜志，2015，25（9）：692-752.

［3］Zhang M.Novel function of STAT1 in breast cancer［J］. Oncoimmunology，2013，2（8）：e25125.

［4］Axiotis CA， Monteagudo C， Merino MJ， et al. Immunohistochemical detection of P-glycoprotein in endometrial adenocarcinoma［J］.Am JPathol，1991，138（4）：799-806.

［5］Hurley J，Reis IM，Rodgers SE，et al.The use of neoadjuvant platinum-based chemotherapy in locally advanced breast cancer that is triple negative：retrospective analysis of 144 patients［J］. Breast Cancer Res Treat，2013，138（3）：783-794.

［6］Munzone E，Botteri E，Sciandivasci A，et al.Prognostic value of Ki-67 labeling index in patients with node-negative，triple-negative breast cancer［J］.Breast Cancer Res Treat，2012，134（1）：277-282.

［7］Stahl N，F(xiàn)arruggella TJ，Boulton TG，et al.Choice of STATs and other substrates specified by modular tyrosine-based motifs in cytokine receptors［J］.Science，1995，267（5202）：1349-1353.

［8］Levy DE，Darnell JJ.Stats：transcriptional control and biological impact［J］.Nat Rev Mol Cell Biol，2002，3（9）：651-662.

［9］Furth PA.STAT signaling in different breast cancer sub-types［J］. Mol Cell Endocrinol，2014，382（1）：612-615.

［10］Koromilas AE，Sexl V.The tumor suppressor function of STAT1 in breast cancer［J］.JAKSTAT，2013，2（2）：e23353.

Expression of STAT signal pathway protein STAT1 in breast cancer and its clinical significance

Wang Junwu1，2，Xia Tian3，Wu Xiaoting1
1.Gastrointestinal Surgery Center，West China Hospital of Sichuan University，Chengdu，Sichuan，610041，China；2.Department of General Surgery，Hospital 452 of PLA，Chengdu，Sichuan，610021，China；3.Department of Pathology，Hospital 452 of PLA，Chengdu，Sichuan，610021，China

Objective To study the expression of STAT signal pathway protein STAT1 in breast cancer and its correlation with pathological features.Methods A total of 95 women with breast cancer were collected as tumor tissue samples for the detection of the expression of STAT signal pathway protein STAT1 in breast cancer tissue by use of immunohistochemical stainingmethod in order to analyze the expression of STAT1 with pathological features.Results The expression level of STAT1 was higher in triple negative breast cancer tissues（IHC score 4.76±1.27）than that in in non-triple negative breast cancer tissues（IHC score 3.33±1.61，P＜0.05）. The expression of STAT1 was obviously negatively correlated with the expression level of PR and HER-2 and was positively correlated with Ki-67 to a certain extent（P＜0.01）.Conclusion The expression level of STAT signal pathway STAT1 is higher in triple negative breast cancer tissues than that in non-triple negative breast cancer tissues and is correlated with pathological features.Therefore，STAT1may be an importantmolecularmarker for the developmentand progression of breast cancer.

breast cancer；STAT signal pathway；STAT1；pathological features；correlation

R 737.9

A

1004-0188（2016）10-1141-03

10.3969/j.issn.1004-0188.2016.10.018

2016-06-01）

610021成都，四川大學(xué)華西醫(yī)院胃腸外科中心（王軍武，伍曉汀）；解放軍452醫(yī)院普外科（王軍武），病理科（夏 天）

伍曉汀，E-mail：wxt1@medmail.com.cn