林　麗，陳秋莉，韋　媛，陳碧艷，王　梁，何　升

(廣西壯族自治區(qū)婦幼保健院婦產(chǎn)醫(yī)院遺傳代謝中心實(shí)驗(yàn)室,南寧 530003)

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·論著·

臍帶血血紅蛋白電泳聯(lián)合基因檢測(cè)β-珠蛋白生成障礙性貧血的診斷價(jià)值

林麗，陳秋莉，韋媛，陳碧艷，王梁，何升△

(廣西壯族自治區(qū)婦幼保健院婦產(chǎn)醫(yī)院遺傳代謝中心實(shí)驗(yàn)室,南寧 530003)

目的探討臍帶血血紅蛋白(Hb)電泳在早期輔助診斷β-珠蛋白生成障礙性貧血的臨床價(jià)值。方法共收集南寧地區(qū)父母雙方均為珠蛋白生成障礙性貧血攜帶者產(chǎn)前診斷的胎兒臍帶血1 599例，所有標(biāo)本均確診。采用Sebia全自動(dòng)毛細(xì)管電泳系統(tǒng)對(duì)臍帶血進(jìn)行Hb電泳組分檢測(cè)。結(jié)果共檢出β-珠蛋白生成障礙性貧血攜帶者186例，其中重型68例。使用ROC曲線分析Hb A 值對(duì)β-珠蛋白生成障礙性貧血攜帶者和中重型的診斷結(jié)果，攜帶者最佳截?cái)嘀禐?.15%，敏感性83.9%，特異性82.3%；中重型者最佳截?cái)嘀禐?.2%，敏感性100.0%，特異性99.4%。結(jié)論臍帶血Hb A 值可有效輔助診斷β-珠蛋白生成障礙性貧血。

臍帶血；血紅蛋白電泳；產(chǎn)前診斷；珠蛋白生成障礙性貧血

珠蛋白生成障礙性貧血是珠蛋白基因表達(dá)降低或缺失造成的一種常見(jiàn)的遺傳溶血性疾病，根據(jù)受累基因的不同可分為α-、β-珠蛋白生成障礙性貧血，其中約90%的α-珠蛋白生成障礙性貧血是由大片段缺失突變?cè)斐?，約90% β-珠蛋白生成障礙性貧血是由點(diǎn)突變?cè)斐?，廣西地區(qū)β-珠蛋白生成障礙性貧血基因攜帶率為6.43%[1-2]。目前有872種突變已確認(rèn)可導(dǎo)致β-珠蛋白生成障礙性貧血，其基因型分類有助于調(diào)整最佳治療方案，判斷預(yù)后及遺傳咨詢，其中大多數(shù)中重型患兒出生后3～6個(gè)月出現(xiàn)臨床癥狀[3-4]。早期快速篩查對(duì)該病的預(yù)防控制有重要意義。我國(guó)中重型β-珠蛋白生成障礙性貧血患兒的出生預(yù)防主要是依靠對(duì)高風(fēng)險(xiǎn)夫婦的篩查及產(chǎn)前診斷，產(chǎn)前診斷的方式主要采集絨毛(孕8～12周)，羊水(孕14～24周)，臍帶血(>23孕周)提取DNA后，常規(guī)PCR實(shí)驗(yàn)確診，存在母血污染及漏檢風(fēng)險(xiǎn)[5]。近年來(lái)，胎兒臍帶血血紅蛋白(Hb)分析作為一種快速、靈敏的方法可作為珠蛋白生成障礙性貧血的輔助篩查方法應(yīng)用于臨床，特別是基因診斷未普及地區(qū)及父母基因型未知的胎兒[6]。采用毛細(xì)管電泳篩查臍帶血Hb聯(lián)合基因檢測(cè)，輔助產(chǎn)前診斷α-珠蛋白生成障礙性貧血，但β-珠蛋白生成障礙性貧血相關(guān)臍帶血電泳組分的研究較少[7-8]。現(xiàn)探討臍帶血電泳產(chǎn)前篩查在輔助診斷β-珠蛋白生成障礙性貧血的臨床價(jià)值，報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料收集2013年1月至2015年12月南寧地區(qū)父母雙方均為珠蛋白生成障礙性貧血攜帶者，產(chǎn)前診斷且孕周為24～28周的胎兒臍帶血1 599例。

1.2方法臍靜脈穿刺抽取1～2 mL臍帶血，枸櫞酸鈉抗凝。采用gap-PCR 法檢測(cè)聯(lián)合反向點(diǎn)雜交對(duì)常見(jiàn)6種α-珠蛋白生成障礙性貧血及17種β-珠蛋白生成障礙性貧血進(jìn)行基因診斷，罕見(jiàn)珠蛋白生成障礙性貧血及異常Hb進(jìn)行Sanger測(cè)序，確定其基因型。使用Capillarys 2全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀(法國(guó)Sebia)進(jìn)行臍帶血電泳組分分析。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，并對(duì)各組Hb A值統(tǒng)計(jì)分析。組間比較使用t檢驗(yàn)，應(yīng)用受試者工作特征(ROC)曲線分析Hb A值的篩查效率，經(jīng)比較優(yōu)選最佳截?cái)嘀礫9]。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)　　果

2.1臍帶血β-珠蛋白生成障礙性貧血基因型分布結(jié)果1 599例臍帶血標(biāo)本經(jīng)基因診斷后，正常組337例，β-珠蛋白生成障礙性貧血攜帶者186例，其中中重型68例。β-珠蛋白生成障礙性貧血攜帶者以βCD41-42/βN、βCD17/βN最為常見(jiàn)，其頻率分別為4.62%、3.75%。見(jiàn)表1。

表1　　臍帶血β-珠蛋白生成障礙性貧血基因型分布結(jié)果

2.2臍帶血Hb A值在不同類別的多重比較結(jié)果各組Hb A值統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，正常組、β-珠蛋白生成障礙性貧血攜帶者、β-珠蛋白生成障礙性貧血中重型各組均值分別為(7.54±3.04)%、(3.74±2.18)%、(0.39±0.83)%，多重比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。見(jiàn)圖1。

2.3各組最佳Hb A截?cái)嘀到Y(jié)果比較采用ROC曲線分析β-珠蛋白生成障礙性貧血攜帶者、β-珠蛋白生成障礙性貧血中重型胎兒篩查的截?cái)嘀导皩?duì)應(yīng)的特異性和敏感性，選出最佳指標(biāo)。β-珠蛋白生成障礙性貧血攜帶者ROC曲線下面積(AUC)為0.893，最佳截?cái)嘀禐?.15%，敏感性83.9%，特異性82.3%；β-珠蛋白生成障礙性貧血中重型者AUC為1.000，最佳截?cái)嘀禐?.2%，敏感性100.0%，特異性99.4%。

圖1　　　　　臍帶血Hb A值在β-珠蛋白生成障礙性貧血不同類別的多重比較結(jié)果

3　討　　論

β-珠蛋白生成障礙性貧血重型患兒出生后6～24個(gè)月發(fā)病，而中間型患兒在2歲以后發(fā)病，我國(guó)β-珠蛋白生成障礙性貧血的診斷主要依靠成人Hb A值及基因診斷，其產(chǎn)前診斷則主要是運(yùn)用PCR相關(guān)技術(shù)從胎兒絨毛、羊水細(xì)胞提取的DNA并聯(lián)合父母基因型進(jìn)行基因診斷[10-11]。目前絨毛取樣是較早的產(chǎn)前診斷方式，在孕9周左右就可得到基因診斷結(jié)果。PCR技術(shù)敏感性較高，微量DNA標(biāo)本就可獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果[12]。但是由于產(chǎn)前標(biāo)本取樣的特殊性及實(shí)驗(yàn)條件等影響，存在胎兒基因母血污染、等位基因脫扣等漏檢、誤檢風(fēng)險(xiǎn)。因此胎兒臍帶血Hb分析聯(lián)合基因診斷技術(shù)可提高產(chǎn)前診斷的敏感性和特異性。

β-珠蛋白肽鏈在胎兒3個(gè)月時(shí)開始出現(xiàn)，與α-珠蛋白肽鏈構(gòu)成Hb A，是胎兒出生前的Hb組分之一。隨著β-珠蛋白出生前后開始表達(dá)并逐漸增強(qiáng)，Hb A也逐漸取代Hb F成為成人最主要的Hb[4]。因此胎兒臍帶血Hb電泳Hb A值可早期輔助診斷β-珠蛋白生成障礙性貧血。本研究337例正常胎兒臍帶血Hb A平均值為(7.54±3.04)%，β-珠蛋白生成障礙性貧血攜帶者為(3.74±2.18)%，中重型為(0.39±0.83)%，各組兩兩之間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)，說(shuō)明胎兒時(shí)期β 基因突變可導(dǎo)致β-珠蛋白鏈合成降低，使Hb A 值較正常胎兒明顯減少。對(duì)異常Hb E攜帶者，可在臍帶血中檢出異常Hb E，但敏感性較低。

本研究采用ROC曲線分析并計(jì)算AUC，評(píng)價(jià)臍血Hb電泳對(duì)β-珠蛋白生成障礙性貧血診斷的準(zhǔn)確性，AUC越接近1說(shuō)明診斷效果越好。再結(jié)合敏感性與特異性，對(duì)每個(gè)截?cái)嘀颠M(jìn)行分析，從中選出最佳指標(biāo)，即最大約登指數(shù)對(duì)應(yīng)的cut off 值。臍血Hb電泳對(duì)β-珠蛋白生成障礙性貧血攜帶者診斷的AUC為0.893，最佳截?cái)嘀禐?.15%，敏感性83.9%，特異性82.3%；其中中重型者AUC為1.000，最佳截?cái)嘀禐?.2%，敏感度100.0%，特異性99.4%。本研究結(jié)果顯示，南寧地區(qū)胎兒臍帶血篩查及基因分布情況，與成人β-珠蛋白生成障礙性貧血基因型分布相符[2]。

綜上所述，產(chǎn)前診斷是有效控制中重型珠蛋白生成障礙性貧血患兒出生的重要手段。本研究結(jié)果表明，臍帶血Hb電泳分析可有效輔助診斷β-珠蛋白生成障礙性貧血。臍帶血Hb電泳組分分析不僅可鑒定母血污染，利用Hb A 截?cái)嘀狄部捎行нM(jìn)行初步篩查，降低產(chǎn)前診斷的漏檢率。對(duì)無(wú)條件開展基因診斷的基層醫(yī)院，可應(yīng)用臍血Hb電泳初步篩選可疑患者，并做進(jìn)一步檢測(cè)。

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The value of combined tests of hemoglobin electrophoresis and genetic testing in neonatal cord blood screening for β-thalassemia

LINLi，CHENQiuli，WEIYuan，CHENBiyan，WANGLiang，HESheng△

(DepartmentofGeneticandMetabolism,MaternalandChildrenHealthHospitalofGuangxiZhuangAutonomousRegion,Nanning,Guangxi530003,China)

ObjectiveTo explore the clinic utility of Hb A level in neonatal cord blood screening for β-thalassemia．MethodsA total of 1 599 neonatal cord specimens whose parents were carriers of β-thalassemia prenatal diagnosised by routine molecular genetic were collected by cordocentesis.These samples were analyzed by the capillary electrophoresis system (Sebia).ResultsAmong 1 599 fetuses,186 were diagnosed as β-thalassemia carriers,68 were β-thalasseima intermedia/major.ROC analysis demonstrated that the optimal cutoff value for identifying β-thalassemia carrier from the Hb A level was 5.15% (sensitivity =83.9%,specificity=82.3%),and that was 3.2% for β-thalasseima intermedia/major (sensitivity=100.0%,specificity=99.4%).ConclusionThe Hb A level of cord blood was an effective marker to screen the β-thalassemia for fetuses and is therefore well-suited for clinical diagnostic use.

cord blood;hemoglobin electrophoresis;prenatal diagnosis;thalasemia

林麗，女，技師，主要從事人類遺傳病的分子基礎(chǔ)及臨床遺傳學(xué)診斷技術(shù)學(xué)和應(yīng)用研究；人類遺傳病的遺傳流行病學(xué)及分子進(jìn)化研究。

,E-mail：heshengbio@163.com。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.19.012

A

1673-4130(2016)19-2689-03

2016-03-11

2016-05-21)