王吉祥，王亞琴，牛之瑞，馮雷

（云南省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗研究院，云南昆明650223）

GC-MS/MS法測定鐵皮石斛中19種農(nóng)藥殘留

王吉祥，王亞琴，牛之瑞，馮雷

（云南省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗研究院，云南昆明650223）

建立固相萃取-氣相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜法測定鐵皮石斛中19種農(nóng)藥殘留的分析方法。石斛樣品經(jīng)乙腈提取，經(jīng)ENVI-Carb/Florisil固相萃取小柱進行凈化后，采用氣相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜法在多反應監(jiān)測（MRM）模式下測定，外標法定量。19種農(nóng)藥成分在10 μg/L～200 μg/L范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)在0.993 1～0.999 8范圍內(nèi)；19種農(nóng)藥成分在3個添加水平下（10、100、200μg/L），加標回收率范圍為 82.83%～109.29%，RSD%（n=5）為1.43%～5.74%；各農(nóng)藥成分的檢出限均小于0.58μg/L。該方法可應用于石斛中多種農(nóng)藥殘留的同時檢測。

鐵皮石斛；氣相色譜-三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜法；農(nóng)藥殘留

石斛為蘭科石斛屬植物，因其獨特的滋陰益胃功效，鐵皮石斛長期被視為奇貨可居的石斛精品。清代趙學敏《本草綱目拾遺》大書鐵皮石斛為“滋陰補益”珍品，近代謝宗萬盛贊鐵皮石斛“脂膏豐富，滋陰之力最大”?，F(xiàn)代藥理試驗證實，石斛具有顯著的抗腫瘤、抗氧化、抗衰老、降血壓、降血糖以及增強機體免疫力等多方面的藥理作用。因本品野生資源較少，目前市場上多為栽培品，受病蟲害的影響，難免使用農(nóng)藥防治病蟲害。如農(nóng)藥使用不當，會導致農(nóng)藥殘留量超標，從而危害人類健康。目前對鐵皮石斛農(nóng)殘檢測的相關(guān)報道較少，因此，對鐵皮石斛中的多種農(nóng)藥殘留量進行檢測具有十分重要的意義[1-2]。

目前，農(nóng)藥多殘留的檢測方法主要有氣相色譜法、液相色譜法、氣相色譜或液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用法等。中藥材成分復雜，常用的色譜方法根據(jù)待測農(nóng)藥的保留時間進行定性，易受基質(zhì)干擾，且易產(chǎn)生假陽性結(jié)果；氣相色譜-三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜的優(yōu)勢在于其具有極高的選擇性、極強的抗干擾能力、高靈敏度和高通量離子傳輸效率及準確定量的特點，這使得該技術(shù)在復雜基質(zhì)背景下仍能完成目標化合物的準確鑒定。采用多反應監(jiān)測（MRM）模式的串聯(lián)質(zhì)譜儀（MS/MS）正在迅速成為復雜食品基質(zhì)樣品中多殘留目標化合物篩查分析的理想技術(shù)，在食品安全分析中具有非常廣泛的應用[3-11]。本文建立了固相萃取-氣相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜法測定石斛中19種農(nóng)藥殘留。該方法簡便、準確、快速、實用，各項技術(shù)指標滿足檢測要求，能夠很好的應用于石斛農(nóng)藥殘留的測定。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

GCMS-TQ8030氣相色譜-三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜儀：日本Shimadzu公司；GL-12B高速離心機：上海安亭科學儀器廠；N-EVAP氮吹儀：美國Organomation公司；CPA225D電子天平：德國Sartorius公司；十二孔固相萃取裝置：美國Waters公司。

ENVI-Carb固相萃取小柱（3 mL）、LC-Florisil固相萃取小柱（6 mL）：美國Supelco公司；丙酮、乙腈、正己烷（均為色譜純）：美國Fisher Scientific公司。

六六六（α-666、β-666、γ-666、δ-666）、滴滴涕（p.p’-DDE、p.p’-DDD、o.p’-DDT、p.p’-DDT）、甲基毒死蜱、殺螟硫磷、馬拉硫磷、毒死蜱、二甲戊樂靈、聯(lián)苯菊酯、氯菊酯、蠅毒磷、氯氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯：均購自農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護科研監(jiān)測所，質(zhì)量濃度為100μg/mL。

標準溶液的配制：分別準確吸取1.0 mL上述標準品，用正己烷定容至10 mL，配成10.00 mg/L的標準儲備液。根據(jù)實際需要，梯度稀釋成系列濃度的標準工作溶液。

1.2 氣相色譜—質(zhì)譜條件

1.2.1 氣相色譜條件

色譜柱：Rtx-5MS（0.25 mm×0.25 μm×30 m）石英毛細管柱；載氣：氦氣，純度≥99.999%；進樣口溫度：250℃；柱溫：初始溫度50℃，保持1min，然后以25℃/min程序升溫到125℃，再以10℃/min程序升溫到300℃，保持 15 min；柱流速：1.69 mL/min；進樣量：1 μL；進樣方式：不分流進樣，1 min后開閥。

1.2.2 質(zhì)譜條件

電子轟擊（EI）離子源；離子源溫度200℃；色譜-質(zhì)譜接口溫度250℃；溶劑延遲時間1.5 min；數(shù)據(jù)采集模式MRM。19種農(nóng)藥成分的保留時間及優(yōu)化的MRM參數(shù)見表1。

表1 19種農(nóng)藥成分的保留時間及優(yōu)化的MRM參數(shù)Table 1 Retention time and optimized MRM conditions of 19 pesticides

1.3 試驗方法

準確稱取10.0 g制好的石斛試樣放入勻漿機中，加入20.0 mL乙腈，在勻漿機中高速勻漿2 min后用濾紙過濾，濾液收集到裝有適量氯化鈉的具塞量筒中，劇烈震蕩1 min，在室溫下靜置30 min，使乙腈相和水相分層。吸取2 mL上清液，低溫氮吹至凈干，用2.0 mL正己烷-丙酮（2∶1，體積比）溶解，待凈化。

將ENVI-Carb小柱用2.0 mL正己烷-丙酮（2∶1，體積比）預淋洗，條件化，當溶劑液面到達柱吸附層表面時，立即倒入上述待凈化溶液，用10 mL比色管接收洗脫液約8 mL，低溫氮吹至約1 mL，用正己烷-丙酮（9∶1，體積比）2 mL溶解，待下一步凈化。然后將Florisil小柱用 2.0 mL 正己烷-丙酮（9∶1，體積比）預淋洗，條件化，當溶劑液面到達柱吸附層表面時，立即倒入上述待凈化溶液，用10mL比色管接收洗脫液約8mL，低溫氮吹至凈干，用正己烷定容至1.0 mL，待測[12-13]。

圖1 19種農(nóng)藥3種凈化方法的回收率Fig.1 Recoveries of 19 pesticide residues obtained by three purification methods

2 結(jié)果與討論

2.1 凈化方法的選擇

參照現(xiàn)行農(nóng)藥殘留測定有關(guān)國家標準方法及國內(nèi)外相關(guān)文獻，主要考察以下幾種方式：①石墨化碳／氨基串聯(lián)固相萃取柱，②PSA固相萃取柱，③ENVICarb/Florisil柱凈化，結(jié)果ENVI-Carb/Florisil柱的凈化效果最好，供試品溶液顏色最淺，總離子流中干擾峰較少，回收率最好，基質(zhì)效應也較低，最終選用ENVICarb/Florisil固相萃取柱凈化，見圖1。

2.2 基質(zhì)效應

中藥材成分復雜，對于農(nóng)藥殘留的檢測也有一定的影響，有些可能有基質(zhì)增強作用，有些可能有基質(zhì)減弱效應。對于氣質(zhì)農(nóng)藥殘留分析，通常會出現(xiàn)基質(zhì)增強效應，具體表現(xiàn)為使用農(nóng)藥標準品定量時會出現(xiàn)某種農(nóng)藥的回收率低于或高于可接受范圍。為了避免藥材本身帶來的基質(zhì)效應，采取基質(zhì)混合標準品溶液的方法消除和減弱基質(zhì)效應，同時利用選擇離子定量檢測也可以大大提高分析方法的選擇性，排除一些雜質(zhì)的干擾，最終獲得較滿意的試驗結(jié)果。

2.3 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

本方法選擇MRM下的2對離子對進行各農(nóng)藥的分析，其中1對離子對用于定量分析。為了獲得最佳的質(zhì)譜條件以保證對分析物定量和定性的準確性，對待測物的前級離子、產(chǎn)物離子、碰撞能量等一系列質(zhì)譜參數(shù)進行了優(yōu)化。首先采用全掃描（Full Scan）方式獲取待測物的前級離子，之后采用產(chǎn)物離子掃描方式（Product Scan）通過優(yōu)化碰撞能量獲得產(chǎn)物離子，最后采用MRM模式對待測物進行定性和定量分析。經(jīng)過方法優(yōu)化可以得到較為理想的質(zhì)譜條件和分離效果。優(yōu)化條件下10 μg/mL基質(zhì)加標工作液的總離子流（TIC）色譜圖見圖2。

圖2 19種農(nóng)藥的總離子流色譜圖Fig.2 Chromatogram of MRM for 19 pesticide residues

2.4 標準曲線與檢出限

取19種農(nóng)藥混合標準品儲備液適量，配制成5個濃度的混合標準品系列溶液，在所確定的色譜條件下進行測定，分別對19種農(nóng)藥成分的峰面積對其濃度進行線性回歸，建立標準曲線，以S/N≥3確定每種農(nóng)藥成分的檢出限。線性方程、線性范圍、相關(guān)系數(shù)和檢出限見表2。

2.5 精密度試驗

取濃度為0.1 mg/L的19種農(nóng)藥對照品溶液，按上述色譜-質(zhì)譜條件和檢測方法連續(xù)進樣6次，記錄峰面積。19種農(nóng)藥峰面積的RSD（n=6）介于1.43%與5.74%之間，表明儀器精密度良好，測定結(jié)果見表3。

2.6 加標回收率試驗

取不含農(nóng)藥的石斛樣品，精確添加10、100、200μg/L的混合標準溶液，在同一分析條件下進行5次試驗，計算各濃度下平均回收率及RSD，測定結(jié)果見表3。

表2 19種農(nóng)藥成分的線性方程、線性范圍、相關(guān)系數(shù)和檢出限Table 2 Linear equation，linearity range，correlation coefficient and limit of detection of 19 pesticide residues

表3 石斛中19種農(nóng)藥精密度和回收率試驗結(jié)果Table 3 19 pesticides precision and recovery test results in dendrobium devoninum paxt

續(xù)表3 石斛中19種農(nóng)藥精密度和回收率試驗結(jié)果Continue table 3 19 pesticides precision and recovery test results in dendrobium devoninum paxt

3 結(jié)論

試驗通過優(yōu)化檢測條件，利用氣相色譜三重四極桿質(zhì)譜儀，建立了對鐵皮石斛中19種農(nóng)藥同時進行分析的方法。本方法條件下19種農(nóng)藥完全基線分離，每種化合物選擇特征離子的兩個二級離子，降低干擾，提高了靈敏度，特別對于復雜基質(zhì)中假陽性結(jié)果進行排除。該方法具有簡單快速，靈敏度、準確度和精密度高，能有效地消除假陽性的可能，適用于鐵皮石斛中農(nóng)藥殘留量的檢測和確證，保證了該方法對鐵皮石斛中的多種農(nóng)藥同時分析的準確性，檢出限滿足目前國內(nèi)的檢測要求。

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Determination of 19 Kinds of Pesticide Residues in Dendrobium officinale Prescription by Gas Chromatography－Triple Quadrupole Tandem Mass Spectrometry

WANG Ji-xiang，WANG Ya-qin，NIU Zhi-rui，F(xiàn)ENG Lei
（Yunnan Product Quality Supervision and Testing Academy，Kunming 650223，Yunnan，China）

To develop an analysis method based on gas chromatography-triple quadrupole tandem mass spectrometry（GC-MS/MS）for the determination of 19 kinds of pesticide residues in Dendrobium officinale prescription.Dendrobium officinale prescription samples were extracted with acetonitrile，and then purified through ENVI-Carb/Florisil solid phase extraction（SPE）cartridge.The prepared samples were then analyzed by GCMS/MS in MRM mode，and the external standard method was applied to quantify the pesticides.All the 19 pesticides showed good linearity in the range of 10 μg/L to 200 μg/L（r=0.993 1-0.999 8），the average recoveries of all the pesticides were in the range of 82.83%to 109.29%at three spiked levels of 10，100，200 μg/L，the RSD（n=5）were in the range of 1.43%to 5.74%；and the limits of detection（LOD）were all below 0.58 μg/L.The method is suitable for the multiresidues analysis of pesticides in Dendrobium officinale prescription.

Dendrobium officinale prescription；GC-MS/MS；pesticide residues

10.3969/j.issn.1005-6521.2016.14.034

王吉祥（1983—），男（漢），工程師，碩士，研究方向：農(nóng)藥殘留檢測。

2015-08-03