馬麗娜，馬 青，李穎康

（寧夏農(nóng)林科學院草畜工程技術(shù)研究中心，寧夏 銀川 750002）

Myf-5基因?qū)┭蛏L性狀的遺傳效應分析

馬麗娜，馬 青，李穎康

（寧夏農(nóng)林科學院草畜工程技術(shù)研究中心，寧夏 銀川 750002）

利用ABI3730測序儀對寧夏鹽池地區(qū)196只灘羊的Myf-5基因進行了基因型判定，共檢測到AA、AC、CC 3種基因型，頻率分別為0.116 5、0.131 7、0.751 8；應用SAS軟件對灘羊Myf-5基因與其4個生長性狀之間的關(guān)系進行了關(guān)聯(lián)分析。結(jié)果表明，AC基因型個體的3月齡體重、6月齡體重極顯著高于AA、CC基因型個體 （P<0.01）；AC基因型個體的9月齡體重顯著高于AA、CC基因型個體 （P<0.05）；不同基因型個體之間的初生體重無顯著差異（P＞0.05）。

灘羊；Myf-5基因；生長性狀；關(guān)聯(lián)分析

生肌調(diào)節(jié)因子家族 （myogenic regulatory factors，MRFs） 也 稱 生 肌 決 定 基 因 （myogenic determination gene，MyoD）［1］。 Myf-5 是生肌調(diào)節(jié)因子家族中的一員，是肌細胞早期分化的關(guān)鍵因子，在肌細胞的生成過程中起著重要的作用［2］。Myf-5基因的遺傳突變及其與家畜生產(chǎn)性能的相關(guān)性作為標記輔助選擇可以為動物遺傳育種提供有效的標記。該研究以寧夏鹽池地區(qū)的灘羊為研究對象，選取Myf-5為候選基因，探索該基因的多態(tài)性與灘羊生長性狀的關(guān)聯(lián)程度，以期為灘羊分子標記輔助選擇提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 灘羊血樣采集及生產(chǎn)性能記錄從寧夏鹽池縣灘羊國家繁育中心選取灘羊196只，每只灘羊采集1份血樣。在飼養(yǎng)環(huán)境基本一致的條件下，測定每只灘羊的初生體重、3月齡體重、6月齡體重、9月齡體重。

1.2 引物合成與PCR擴增根據(jù)已經(jīng)公布的Myf-5基因序列，采用在線引物設計軟件Primer 3.0（http://frodo.wi.mit.edu）設計引物，由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。引物序列如下。P1：5′-ACA GCG TCT ACT GTC CTG ATG-3′； P2： 5′-CGT GGC ATA TAC TAA GGA CAC-3′。在上游引物 5′端加FAM熒光修飾，預期擴增片段長度為445 bp。PCR 反應體系為 20 μL：PCR MIX 混合液 10 μL，滅菌水 8.4 μL，上、下游引物（10 pmol/μL）各 0.3 μL，DNA 模板（100 ng/μL）1 μL。PCR 擴增程序為：94 ℃預變性 5 min；94℃變性 40 s，58℃退火 45 s，70℃延伸45 s，30個循環(huán)；72℃最后延伸5 min。PCR產(chǎn)物用1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測。

1.3 基因型分析取批量獲得的熒光PCR產(chǎn)物2 μL，上樣于ABI3730 DNA測序儀收集熒光信號，利用ABI Prim Genemapper 3.0軟件進行片段長度多態(tài)判定。

1.4 測序分析經(jīng)ABI Prim Genemapper 3.0軟件進行分析后，對純合子基因型隨機選擇2個個體的PCR產(chǎn)物，進行正向測序分析。

圖1 灘羊Myf-5基因型判定結(jié)果

1.5 統(tǒng)計分析采用SAS 8.02軟件的GLM過程對Myf-5基因型和不同月齡體重進行關(guān)聯(lián)分析，所用模型為：y=μ+S+G+e，其中y為生長性狀的育種值；μ為群體平均值；S為性別效應；G為基因型效應；e為隨機殘差效應。

2 結(jié)果與分析

2.1 Myf-5基因多態(tài)性檢測結(jié)果對選取的196只灘羊進行了Myf-5基因熒光PCR擴增，利用ABI Prim Genemappr 3.0軟件進行片段長度多態(tài)判定，結(jié)果發(fā)現(xiàn) 3種基因型：AA、AC、CC。 熒光 PCRABI3730 DNA測序儀的基因型判定結(jié)果見圖1。統(tǒng)計分析結(jié)果表明，基因型AA、AC、CC的頻率分別為0.116 5、0.131 7、0.751 8；等位基因A和C的頻率分別為0.186 0和0.814 0。

2.2 不同基因型個體序列分析結(jié)果序列分析結(jié)果表明，CC基因型的核苷酸序列與GenBank中登錄的Myf-5基因序列（登錄號：AF083978）一致。利用DNAMAN軟件對AA基因型和CC基因型的Myf-5基因序列進行比對，結(jié)果表明，AA基因型在第179 bp位點處發(fā)生了T堿基缺失突變。序列比對結(jié)果見圖2。

圖2 Myf-5不同基因型的序列比對結(jié)果

2.3 Myf-5基因與體重關(guān)聯(lián)分析Myf-5基因不同基因型對初生體重、3月齡體重、6月齡體重、9月齡體重的最小二乘均值及其標準誤見表1。由表1可知，AC基因型個體的3月齡體重、6月齡體重極顯著高于AA、CC基因型個體（P<0.01）；AC基因型個體的9月齡體重顯著高于AA、CC基因型個體（P<0.05）；不同基因型個體之間的初生體重無顯著差異（P＞0.05）。

表1 Myf-5基因不同基因型與體重的最小二乘均值及其標準誤

3 討論

目前，關(guān)于Myf-5基因的多態(tài)性在豬方面的研究報道較多，Soumillion 等［3］、Urbański等［4］分別發(fā)現(xiàn)該基因存在不同類型的RFLP位點和SNP位點。韋宏偉等［5］研究發(fā)現(xiàn)，Myf-5基因在天府肉羊AA型和AB型個體的體重極顯著高于BB型 （P<0.01），成都麻羊AA型和AB型個體的體重顯著高于 BB 型個體（P<0.05）。 王璽年等［6］研究表明，Myf-5基因第1外顯子在3個山羊品種中未發(fā)現(xiàn)多態(tài)性。王繼卿［7］在Myf-5基因第3外顯子中檢測到4條變異序列和3個SNPs。張海軍等［8］研究發(fā)現(xiàn)，徐淮白山羊Myf-5基因的AB型個體的管圍顯著高于AA型。

該研究結(jié)果反映了Myf-5基因?qū)Σ煌正g灘羊體重的影響。在灘羊育種中，根據(jù)不同育種目標和市場需要，可以考慮將Myf-5基因作為遺傳標記進行標記輔助選擇，以提高選擇準確性，加快遺傳進展。

［1］WEINTRAUB H，DAVIS R，TAPSCOTT S，et al.TheMyoDgene family：nodal point during specification of the muscle cell linkage［J］.Science，1991，251（4995）：761-766.

［2］HASTY P，BRADLEY A，MORRIS J H，et al.Muscle deficiency and neonatal death in mice with a targeted mutation in the myogenin gene ［J］.Nature，1993，364（6437）：501-506.

［3］SOUMILLION A，RETTENBERGER G，VERGOUWE M N，et al.Assignment of the porcine loci for MYOD1 to chromosome 2 and MYF5 to chromosome 5 ［J］.Anim Genet，1997，28（1）：37-38.

［4］URBAN＇SKI P，F(xiàn)LISIKOWSKI K，STARZYN＇SKI R R，et al.A new SNP in the promoter region of the porcine MYF5 gene has no effect on its transcript level in m.longissimus dorsi［J］.J Appl Genet，2006，47（1）：59-61.

［5］韋宏偉，徐剛毅，汪代華，等.Myf5基因多態(tài)性與山羊生長性狀相關(guān)分析［J］.中國畜牧雜志，2011，47（7）：15-17.

［6］王璽年，王繼卿，劉秀，等.山羊Myf-5、Pit-1基因多態(tài)性與生產(chǎn)性狀的關(guān)聯(lián)性分析［J］.華北農(nóng)學報，2013，28（3）：43-47.

［7］王繼卿.綿羊生長性狀和胴體肌肉性狀相關(guān)基因的關(guān)聯(lián)性研究［J］.蘭州：甘肅農(nóng)業(yè)大學，2014.

［8］張海軍，陳宏，房興堂，等.山羊MyoD基因家族多態(tài)性及與體尺性狀的相關(guān)性［J］.遺傳，2007，29（9）：1077-1082.

Analysis on Genetic Effects of Myf-5 Gene on Growth Traits in Tan Sheep

MA Li-na，MA Qing，LI Ying-kang
（Research Center of Engineering and Technology for Grass and Livestock，Ningxia Academy of Agriculture and Forestry Sciences，Yinchuan 750002，China）

The genotype ofMyf-5 gene of 196 individuals of Tan Sheep in Yanchi region of Ningxia was determined by ABI3730 sequenator,and the association between different genotype ofMyf-5 gene and four growth traits was statistically analyzed by using SAS software.Three genotypes of Myf-5 gene,including AA,AC and CC,were found.The three-month body weight and sixmonth body weight of the individuals of Tan Sheep with AC genotype were extremely significantly higher than those of the individuals of Tan Sheep with AA and CC genotype (P<0.01),and the nine-month body weight of the individuals of Tan Sheep with AC genotype were significantly higher than that of the individuals of Tan Sheep with AA and CC genotype (P<0.05).No significant differences in birth weight of Tan Sheep with different genotypes were observed(P>0.05).

Tan Sheep；Myf-5 Gene;growth traits；association analysis

S826.952

A文章順序編號：1672-5190（2016）01-0046-02

2015－12－26

項目來源：寧夏回族自治區(qū)農(nóng)業(yè)育種專項（2013NYYZ0404）。

馬麗娜（1985—），女，助理研究員，碩士，主要研究方向為動物遺傳育種。

馬青（1973—），男，副研究員，碩士，主要研究方向為動物營養(yǎng)。

（責任編輯：趙俊利）