鄒航

（廣西醫(yī)科大學第一臨床醫(yī)學院 廣西南寧 530021）

黃芩苷對人肝癌細胞增殖抑制及放療增敏作用

鄒航

（廣西醫(yī)科大學第一臨床醫(yī)學院 廣西南寧 530021）

目的：探討黃芩苷對人肝癌細胞HepG2增殖抑制及放療增敏作用。方法：以人肝癌細胞株HepG2為研究對象，用CCK-8法和流式細胞儀檢測黃芩苷對肝癌細胞增殖的影響和肝癌細胞放射敏感性的改變。結(jié)果：CCK-8法檢測黃芩苷對HepG2的生長有顯著抑制作用且具有劑量依賴性，與陰性對照組對比差異有統(tǒng)計學意義（ P＜0. 05） 。黃芩苷能使處于G0/G1、G2/M期的細胞減少，S期細胞增加。同時，黃芩苷對HepG2放療具有增敏作用。結(jié)論：黃芩苷可抑制人肝癌細胞增殖，可能與影響細胞周期有關(guān)；黃芩苷能增強肝癌細胞放射敏感性。

黃芩苷 肝癌 細胞增殖 放療增敏

肝癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，預(yù)后差、病死率高，尋求可靠的綜合治療方案成為治療肝癌的必經(jīng)之路。黃芩苷是從黃芩中分離出來的黃酮類化合物，具有多種藥理作用［1］。近年來發(fā)現(xiàn)黃芩苷具有抗脂質(zhì)氧化，降低血脂、血壓和抗腫瘤作用［2］。放療是輔助治療肝癌的有效手段之一，而如何更進一步增加放療的效果，探索肝癌放療的增敏劑無疑是個新途徑。本研究旨在探討黃芩苷聯(lián)合放療，對人肝癌細胞株HepG2增殖的抑制作用，以及黃芩苷對HepG2放療敏感性的影響，為提高肝癌的治療效果提供實驗依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 主要材料及試劑

HepG2細胞購于中科院上海細胞所，DMEM培養(yǎng)基及胎牛血清購于Life公司。黃芩苷（Baicalin）購于上海純優(yōu)生物。CCK-8試劑盒購于博士德生物。細胞周期檢測試劑盒購于北京碧云天。

1.2 實驗方法

1.2.1 細胞培養(yǎng)

人肝癌HepG2細胞培養(yǎng)于含10%滅活胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中， 置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。細胞分組：①陰性對照組；②黃芩苷組：不同濃度黃芩苷處理的HepG2細胞（黃岑苷粉末用細胞培養(yǎng)液稀釋成工作濃度：0.1、0.25、0.5 mg/ml）；③放療組；④黃芩苷與放療聯(lián)合治療組：加入0.5 mg/ml黃芩苷培養(yǎng)12h后進行照射（X射線能量為6 MeV/u、靶皮距100 cm、劑量率2 Gy/min，細胞給予4Gy放療）。

1.2.2 流式細胞儀檢測腫瘤細胞周期分布

黃芩苷組細胞按0.1、0.25、0.5mg/ml黃芩苷處理后，于48h后分別進行消化計數(shù)。各個不同濃度組及陰性細胞組分別收集1×106個細胞。冷PBS洗滌2次后，按照細胞周期試劑盒說明書分別加入周期檢測試劑，上流式細胞儀檢測，并對細胞周期進行分析，實驗重復(fù)三次。

1.2.3 CCK-8法測定腫瘤細胞增殖抑制率

按上述細胞分組，每組設(shè)6個復(fù)孔，在96孔板中相同條件下培養(yǎng)48 h 后，吸去培養(yǎng)液，按CCK-8試劑盒說明書加入試劑，在酶標儀上讀取450nm處吸光度值，并計算細胞增殖抑制率。實驗重復(fù)三次。

1.3 統(tǒng)計學分析

2 結(jié)果

經(jīng)流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)：單獨黃芩苷處理后，較陰性對照組相比，處于G0/G1、G2/M期細胞減少，S期細胞顯著增加；單獨放療組G0/G1期細胞增加，S期細胞減少，G2/M期細胞變化較少；黃芩苷+放療聯(lián)合組較單獨放療組G0/G1、G2/M期細胞減少，S期細胞顯著增加。CCK-8結(jié)果顯示：隨藥物濃度增高，黃芩苷對HepG2細胞增殖的抑制率明顯增高，呈濃度依賴性；聯(lián)合組對HepG2細胞的抑制率較單獨放療組和黃芩苷組明顯增高，組間比較具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。（表1）

表1 黃芩苷及聯(lián)合放療對肝癌細胞增殖的影響

3 討論

放療是常用的肝癌治療手段， 但有效率并不高，主要原因是易復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移和并發(fā)癥。雖然提高放射劑量可提高局部控制率， 但增加了對周圍正常組織的損害。尋找有效的放療增敏方式進行聯(lián)合治療是當前腫瘤治療的新出路。黃芩苷是中藥黃芩中的主要活性成分。近年來，研究表明它對多種腫瘤具有抗瘤活性［3］［4］。本研究選用人肝癌細胞株HepG2為研究對象，探討了黃芩苷的抗腫瘤作用。結(jié)果表明，黃芩苷對HepG2細胞生長具有明顯抑制作用；聯(lián)合治療組抑制率均高于單獨使用黃芩苷組和單獨放療組，說明黃芩苷與放療聯(lián)合治療對肝癌細胞的抑制有協(xié)同作用，黃芩苷能增加肝癌細胞放射敏感性。細胞周期實驗的結(jié)果提示，黃芩苷可使HepG2細胞的細胞周期阻滯于S期，使進入G2 /M期的細胞比例降低，提示黃芩苷可能通過影響細胞周期進程并抑制HepG2細胞增殖，具體機制有待進一步探討。隨著對黃芩苷抗腫瘤作用機制的進一步認識， 黃芩苷有望成為具有較好療效且價格低廉的一種協(xié)同抗癌藥物，具有潛在的臨床應(yīng)用價值。

［1］黃志軍.黃芩苷藥理作用研究進展.天津藥學，2012， （3） ：0061-64.

［2］蘭真，曾凡駿，曾里，等.生物類黃酮對心血管系統(tǒng)的調(diào)節(jié)及作用機理現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學，2005，32（6）：613.

［3］郭昱，姚樹坤.黃芩苷對人肝癌SMMC-7721細胞系生物學行為的影響.中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學雜志，2006，12（10）：732-735.

［4］湯立建，趙良才，李慶林，等.黃芩黃酮類成分抗腫瘤作用及機制研究進展.中國中藥雜志，2007，32（1）：21-26.

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1674-2060（2016）02-0186-01