王衛(wèi)娜

（南陽醫(yī)學高等?？茖W校 河南南陽 473000）

IL-17、IL-8、IL-10水平與早期糖尿病腎病的關系

王衛(wèi)娜

（南陽醫(yī)學高等?？茖W校 河南南陽 473000）

目的 觀察糖尿病大鼠腎臟早期IL-17、IL-8、IL-10水平的變化，并分析糖尿病大鼠腎臟早期IL-17、IL-8、IL-10水平與糖尿病腎病的關系。方法 健康雄性SD大鼠被隨機分為正常對照組和糖尿病模型組，模型組以一次性腹腔注射STZ誘導糖尿病模型；造模成功后在1周、2周、4周、6周，12周時間點分別取兩腎，稱量兩腎的重量及大鼠體重，常規(guī)方法檢測血清生化指標和尿蛋白含量，ELISA檢測IL-17、IL-8、IL-10水平。分析IL-17、IL-8、IL-10水平與糖尿病腎病的關系。結果 糖尿病各組大鼠IL-17、IL-8隨時間逐漸升高，IL-10隨時間逐漸降低，IL-17、IL-8與血糖、CRP、腎臟肥大指數(shù)、24小時尿蛋白、肌酐、血尿素氮呈正相關，IL-10與血糖、CRP、腎臟肥大指數(shù)、24小時尿蛋白、肌酐、血尿素氮呈負相關，IL-17、IL-8與IL-10呈負相關。結論IL-17、IL-8可能促進糖尿病大鼠腎病的發(fā)展，IL-10可能抑制糖尿病大鼠腎病的進展。

糖尿病 IL-17 IL-8 IL-10

糖尿病腎?。―iabetic nephropathy，DN）是糖尿病特發(fā)性全身微血管病變的腎臟表現(xiàn)，是導致終末腎病的原因之一，糖尿病腎病早期出現(xiàn)微量白蛋白尿，但可以逆轉，后逐漸發(fā)展為不可逆大量蛋白尿、腎臟纖維化，最后發(fā)展為終末期腎病。最近研究認為細胞因子介導的炎癥反應參與了糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展。我們通過測定糖尿病大鼠早期IL-17、IL-8、IL-10水平，探討這三種細胞因子在糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展中的作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

健康成年雄性SD大鼠：清潔級，200g±15g/只，SPF級，購于鄭州大學動物實驗中心，標準飲食，自由飲水，日常光照。

1.2 模型與分組

喂養(yǎng)1周后，隨機分為糖尿病大鼠組和正常對照組，禁食12小時后一次性腹腔注射鏈脲佐菌素STZ 60mg/kg。正常對照組注射等體積檸檬酸緩沖液。4 8 h后葡萄糖氧化酶法測血糖，血糖≥1 6. 65mmol/L為糖尿病大鼠。不成模或死亡的不計入統(tǒng)計。大鼠隨機分為正常對照組、糖尿病1周組、糖尿病2周組、糖尿病4周組、糖尿病6周組、糖尿病12周組，每組6只。

1.3 方法

每個時間點，稱體質量，麻醉，心臟取血，離心取血清；取出雙側腎臟稱重；血肌酐、血糖、尿素氮用全自動生化分析儀測定； ELISA測定尿微量白蛋白、IL-17、IL-8。

1.4 統(tǒng)計學分析

采用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計分析，計量資料用均數(shù)±標準差表示，多組間比較采用方差分析，兩兩組間比較采用LSD-t檢驗，p＜0.05認為差異有統(tǒng)計學意義。Spearson作相關性分析。

表1 各組大鼠血、尿等指標（±s，n=6）

表1 各組大鼠血、尿等指標（±s，n=6）

注：與NC比較，* p＜0.05；** p＜0.01

組別 　n 　F P G（m m o l / L） 　C R P（m g / L） 　　腎肥大指數(shù)（%） 　2 4 h U p r o（m g） 　B U N（m m o l / L） 　S C r（μ m o l / L）N C 　6 　5 . 6 7 ± 1 . 2 3 　4 . 0 1 ± 2 . 0 7 　0 . 3 5 6 ± 0 . 2 7 　7 . 3 ± 1 . 7 　7 . 0 ± 0 . 8 　4 1 . 2 ± 4 . 1 1 W 　6 　1 8 . 5 6 ± 4 . 8 7 * * 　6 . 7 1 ± 3 . 2 0 　0 . 3 6 2 ± 0 . 1 3 　9 . 1 ± 1 . 8 　7 . 2 ± 0 . 9 　4 2 . 7 ± 3 . 9 2 W 　6 　2 2 . 1 5 ± 5 . 0 9 * * 　1 0 . 1 0 ± 3 . 1 2 * * 　0 . 5 6 7 ± 0 . 4 1 　1 3 . 8 ± 2 . 1 * * 　7 . 8 ± 1 . 0 　4 4 . 8 ± 4 . 3 4 W 　6 　3 3 . 4 7 ± 5 . 3 6 * * 　1 5 . 3 3 ± 3 . 8 0 * * 　0 . 7 1 6 ± 0 . 4 6 * 　1 7 . 2 ± 1 . 9 * * 　9 . 2 ± 0 . 7 * 　4 9 . 8 ± 3 . 7 * 6 W 　6 　2 6 . 5 1 ± 5 . 7 2 * * 　1 9 . 4 2 ± 4 . 0 2 * * 　0 . 7 6 8 ± 0 . 5 1 * 　2 0 . 3 ± 2 . 0 * * 　1 2 . 8 ± 0 . 8 * * 　5 2 . 4 ± 4 . 2 * * 1 2 W 　6 　2 5 . 0 1 ± 6 . 1 7 * * 　2 9 . 7 6 ± 4 . 2 1 * * 　0 . 7 6 9 ± 0 . 4 7 * 　2 5 . 6 ± 2 . 7 * * 　1 7 . 2 ± 1 . 1 * 8 　5 9 . 8 ± 5 . 1 *

表2 各組IL-17、IL-8、IL-10水平比較（±s，n=6）

表2 各組IL-17、IL-8、IL-10水平比較（±s，n=6）

注：與NC比較，* p＜0.05；** p＜0.01

組別 　n 　　血I L -1 7（n g / L） 　　血I L -8（n g / L） 　　血I L -1 0（n g / L）N C 　6 　8 . 9 1 ± 3 . 1 2 　1 2 . 5 4 ± 2 . 1 3 　4 1 . 0 7 ± 2 . 6 1 1 W 　6 　9 . 3 0 ± 3 . 2 1 　1 5 . 4 2 ± 1 . 7 9 　3 9 . 0 2 ± 3 . 2 1 2 W 　6 　1 0 . 7 3 ± 3 . 0 5 　1 8 . 7 1 ± 2 . 9 8 * 　3 3 . 3 4 ± 4 . 2 5 * * 4 W 　6 　1 1 . 8 7 ± 4 . 2 0 * 　2 2 . 1 8 ± 2 . 1 8 * * 　2 7 . 8 7 ± 3 . 9 1 * * 6 W 　6 　1 3 . 7 8 ± 4 . 5 2 * 　2 6 . 7 2 ± 2 . 3 1 * * 　2 2 . 1 9 ± 3 . 0 8 * * 1 2 W 　6 　2 4 . 0 8 ± 5 . 1 3 * * 　5 7 . 6 8 ± 3 . 2 0 * * 　1 8 . 9 0 ± 3 . 1 7 * *

2 結果

2.1 各組大鼠血、尿等指標變化

與正常對照組相比，各糖尿病模型組大鼠血糖顯著升高，模型組間血糖有差異，4周組糖尿病血糖水平最高，6周和12周組稍下降，但仍高于正常水平。CRP、腎臟肥大指數(shù)、24小時尿微量白蛋白、血肌酐、尿素氮隨時間逐步升高，均高于正常對照組。見表1。

2.2 各組大鼠IL-17、IL-8、IL-10結果比較

糖尿病各組大鼠IL-17、IL-8隨時間逐漸升高，IL-17從4周開始、IL-8從2周開始與正常對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義。糖尿病各組大鼠IL-10隨時間逐漸降低，從2周開始與正常對照組比較有統(tǒng)計學意義。

2.3 相關性分析

IL-17、IL-8與血糖、CRP、腎臟肥大指數(shù)、24小時尿蛋白、肌酐、血尿素氮呈正相關（P＜0.01），IL-10與血糖、CRP、腎臟肥大指數(shù)、24小時尿蛋白、肌酐、血尿素氮呈負相關（P＜0.01），IL-17、IL-8與IL-10呈負相關（P＜0.01）。

3 討論

糖尿病腎病發(fā)生機制目前仍未完全清楚，近年研究認為糖尿病腎病中存在炎癥反應，糖尿病腎病被認為是一個炎癥進展過程，細胞因子介導的炎癥反應可能單獨或作為多種發(fā)病機制的下游環(huán)節(jié)在糖尿病腎病的發(fā)病機制中起關鍵作用［1］。在病變部位，常有大量的單核-巨噬細胞、淋巴細胞等的浸潤，隨后浸潤細胞分泌炎癥性細胞因子和纖維化形成細胞因子，使病變部位纖維化，導致結構改變和功能的喪失。

IL-17是由Th17細胞分泌的主要細胞因子，已被證明在多種疾病，包括器官移植、自身免疫性疾病、腫瘤中發(fā)揮重要作用［2］。 本研究結果顯示，糖尿病各組大鼠IL-17水平隨時間逐漸升高，從4周開始與正常對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義。而且IL-17水平與血糖、腎臟肥大指數(shù)等指標呈正相關，這充分說明IL-17在糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展中起到一定作用。

IL-8是趨化因子CXC超家族的典型代表。其作用主要是趨化中性粒細胞和單核細胞，脫粒，產(chǎn)生超氧陰離子，加強炎癥防護和免疫反應等。本研究結果充分說明IL-8在糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展中起到一定作用。原因是IL-8激活中性粒細胞，引起炎癥反應；刺激平滑肌細胞移動和增殖，導致內(nèi)皮促凝能力增加，使血流調節(jié)異常；刺激血管內(nèi)皮因子的釋放，增大血管通透性，導致蛋白尿的發(fā)生和發(fā)展，使腎系膜細胞增生，促進腎小球硬化，導致糖尿病腎病的發(fā)展［3、4］。

研究發(fā)現(xiàn)糖尿病各組大鼠IL-10水平隨時間逐漸降低，從2周開始與正常對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義。而且IL-10水平與血糖、腎臟肥大指數(shù)、24小時尿蛋白、肌酐、血尿素氮呈負相關，與其余致炎因子CRP、IL-8、IL-17也呈負相關，這充分說明IL-10在糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展中一定的保護作用。

相關性分析發(fā)現(xiàn)，血清IL-8、IL-10及IL-17水平與疾病進展、CRP、腎臟肥大指數(shù)、24小時尿蛋白、肌酐、血尿素氮等存在一定的相關性，而三者之間也存在相關性：提示IL-8、IL-10及IL-17可能參與了糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展，也說明炎癥反應在糖尿病腎病的發(fā)生機制中起一定的作用。

［1］Wada J，Makino H. Inflammation and the pathogenesis of diabetic nephropathy［J］.Clin Sci（Lond），2013，124（3）：139.

［2］魏文，李娟娟，孫圣榮，等.乳腺癌小鼠動物模型中自細胞介素-17的表達及其意義。中華實驗外科雜志，2011，28：673-675.

［3］賀正華，肖目張，郭曲練. 過表達白介素-10 減少脂多糖所致大鼠星形膠質細胞炎癥介質的釋放［J］. 中南大學學報（醫(yī)學版），2011，36（5）：392-397.

［4］孫永波.糖尿病腎病發(fā)生與發(fā)展相關危險因素的研究進展［J］.醫(yī)學綜述，2011，17（10）：1531-1534.

R-0

A

1674-2060（2016）02-0116-02

南陽市科技局科技攻關項目 2012GG069；南陽醫(yī)學高等專科學校自然科學項目 12NYYZ2004