黃捷王炳盧奎林陳品全劉素芳高榮

（1.四川大學(xué) 四川成都 610041；2.成都蓉生藥業(yè)有限責(zé)任公司 四川成都 610041）

預(yù)過濾系統(tǒng)對(duì)靜注人免疫球蛋白納米過濾的效率和質(zhì)量影響

黃捷1，2王炳2盧奎林2陳品全2劉素芳2高榮1*

（1.四川大學(xué) 四川成都 610041；2.成都蓉生藥業(yè)有限責(zé)任公司 四川成都 610041）

本文對(duì)靜注人免疫球蛋白（以下簡(jiǎn)稱靜丙）進(jìn)行納米膜過濾時(shí)，使用不同預(yù)過濾系統(tǒng)對(duì)納米過濾效率和靜注人免疫球蛋白產(chǎn)品質(zhì)量的影響進(jìn)行了比較，旨在得出不同預(yù)過濾系統(tǒng)對(duì)靜丙進(jìn)行納米過濾的效率和主要質(zhì)量指標(biāo)的影響。結(jié)果：不同的預(yù)過濾系統(tǒng)對(duì)IVIG納米過濾的效率影響較大，選擇適宜的預(yù)過濾系統(tǒng)能夠有效提高納米過濾的效率，且過濾后制品質(zhì)量檢查結(jié)果無明顯差異（P＞0.05）。結(jié)論：選擇適宜的預(yù)過濾系統(tǒng)，可顯著提高靜丙納米過濾效率，且不影響其主要質(zhì)量指標(biāo)。

預(yù)過濾系統(tǒng) 納米膜過濾 靜注人免疫球蛋白 質(zhì)量

病毒污染嚴(yán)重威脅血液制品安全性，如何進(jìn)一步提高制品的安全性始終是人們所關(guān)注的問題。目前國(guó)內(nèi)靜丙病毒滅活方法主要采用低pH孵放滅活病毒［1-2］、納米過濾去除病毒、辛酸鹽病毒滅活［2］、S/D法病毒滅活和巴氏加溫病毒滅活［3］［4］等方法，其中低pH孵放滅活病毒對(duì)產(chǎn)品的溫度要求較高，一般溫度控制在24±1℃，時(shí)間為21～24天［5］［6］。納米膜過濾是根據(jù)分子篩原理，按膜孔徑大小截流病毒，使目的蛋白通過濾器，大致分為錯(cuò)流（切向）過濾和直流（死端）過濾兩種方式，其過濾效率和病毒去除能力取決于蛋白質(zhì)含量、蛋白聚合物、過濾表面積、pH和溫度等影響。本文主要針對(duì)溫度對(duì)納米過濾的過濾效率和產(chǎn)品主要質(zhì)量指標(biāo)的影響進(jìn)行分析。

1 材料

1.1 靜注人免疫球蛋白（pH4）原液1.2 原料

1.2.1 納米濾芯（0.001m2）

1.2.2 預(yù)過濾濾芯：孔徑0.2um濾芯、孔徑0.1um濾芯、去脂濾芯

1.3 試驗(yàn)設(shè)備

1.3.1 恒溫水浴箱

1.3.2 100ml、50ml、10ml量筒各三支

1.3.3 濾器完整性測(cè)試儀一臺(tái)

1.3.4 100kg壓力氮?dú)怃撈恳粋€(gè)，帶高低壓力表減壓閥一個(gè)

1.3.5 快裝卡、硅膠管、壓力表若干

1.4 檢測(cè)設(shè)備

1.4.1 DMA4100型密度儀，為奧地利安帕通公司產(chǎn)品；

1.4.2 Delta320 pH計(jì)，為METTLER TOLEDO公司產(chǎn)品；

1.4.3 液相色譜儀，為Agilent公司產(chǎn)品；

1.4.4 全自動(dòng)電泳儀，為INTERLAB生產(chǎn)。

2 方法

2.2.1 采用三批靜丙原液分別使用孔徑0.2um濾芯、孔徑0. 1um濾芯、去脂濾芯、孔徑0.1um濾芯+去脂濾芯，作為預(yù)過濾系統(tǒng)進(jìn)行納米膜過濾，過濾溫度為18～23℃，過濾時(shí)間為6小時(shí)，過濾過程中控制壓力不超過濾芯廠家規(guī)定的壓力，并盡量保持三組過濾系統(tǒng)壓力一致。收集使用不同預(yù)過濾系統(tǒng)過濾后的靜丙原液進(jìn)行納米過濾時(shí)的過濾參數(shù)。

2.2.2 采用三批靜丙原液分別使用孔徑0.2um濾芯、孔徑0. 1um濾芯、去脂濾芯、孔徑0.1um濾芯+去脂濾芯，作為預(yù)過濾系統(tǒng)進(jìn)行納米膜過濾，收集使用不同預(yù)過濾系統(tǒng)預(yù)濾后完成納米過濾的產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)項(xiàng)目為： pH值、蛋白質(zhì)含量、純度、抗補(bǔ)體活性和分子大小分布。

表1不同預(yù)過濾系統(tǒng)進(jìn)行納米過濾時(shí)靜丙過濾流速、過濾量（N=3）

表2 不同預(yù)過濾系統(tǒng)的濾過液流速之間兩兩比較結(jié)果

2.2.3 過濾完畢的濾芯進(jìn)行完整性檢測(cè)，確保過濾有效性。

表3 不同預(yù)過濾系統(tǒng)的過濾量之間兩兩比較結(jié)果

表4 不同預(yù)過濾系統(tǒng)進(jìn)行納米過濾時(shí)靜丙原液質(zhì)量指標(biāo)（N=3）

3 結(jié)果

3.1 使用不同預(yù)過濾系統(tǒng)進(jìn)行預(yù)過濾后對(duì)靜丙納米過濾效率的影響

3.2 使用不同預(yù)過濾系統(tǒng)進(jìn)行預(yù)過濾后對(duì)靜丙納米過濾后產(chǎn)品質(zhì)量的影響

采用不同預(yù)過濾系統(tǒng)進(jìn)行納米過濾，靜丙主要質(zhì)量指標(biāo)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)論均無顯著差異（P＞0.05）。

采用不同預(yù)過濾系統(tǒng)進(jìn)行納米過濾后，所用納米膜濾芯進(jìn)行完整性檢測(cè)均合格，證明使用不同的預(yù)過濾系統(tǒng)，納米膜過濾有效性能夠得到確保。

4 討論

4.1 納米過濾控制參數(shù) 選擇適宜的預(yù)過濾系統(tǒng)，能夠有效去除靜丙原液中的一些小顆粒物質(zhì)，增加過濾速度和過濾量，提高了生產(chǎn)效率；但同時(shí)，由于預(yù)過濾系統(tǒng)對(duì)產(chǎn)品有一定的耗損，不能無限制的添加，因此，通過本實(shí)驗(yàn)確認(rèn)最佳的預(yù)過濾系統(tǒng)為孔徑0.1um濾芯+去脂濾芯。

4.2 產(chǎn)品原液過濾效率分析 從表1，表2，表3的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明， 使用孔徑0.2um濾芯作為預(yù)過濾系統(tǒng)與使用孔徑0.1um濾芯、去脂濾芯和孔徑0.1um濾芯+去脂濾芯作為預(yù)過濾系統(tǒng)在納米過濾濾過液流速和納米過濾濾過量上有顯著差異；孔徑0.1um濾芯與去脂濾芯作為預(yù)過濾系統(tǒng)，在納米過濾濾過液流速和納米過濾濾過量上無顯著差；孔徑0.1um濾芯、去脂濾芯作為預(yù)過濾系統(tǒng)與孔徑0. 1um濾芯+去脂濾芯作為預(yù)過濾系統(tǒng)，在納米過濾濾過液流速和納米過濾濾過量上有顯著差異，在納米過濾濾過液流速和納米過濾濾過量上有顯著差異。孔徑0.1um濾芯+去脂濾芯作為預(yù)過濾系統(tǒng)的濾過液流速和納米過濾濾過量均是各預(yù)過濾系統(tǒng)中最高的，說明選擇適宜的預(yù)過濾系統(tǒng)對(duì)納米過濾的過濾效率有提高，實(shí)際生產(chǎn)中可以選擇孔徑0.1um濾芯+去脂濾芯作為預(yù)過濾系統(tǒng)，能夠有效提高納米過濾的效率。說明選擇適宜的預(yù)過濾系統(tǒng)對(duì)納米過濾的過濾效率有提高，實(shí)際生產(chǎn)中可以選擇孔徑0.1um濾芯+去脂濾芯作為預(yù)過濾系統(tǒng)，能夠有效提高納米過濾的效率。

4.3 產(chǎn)品原液主要質(zhì)量指標(biāo) 從表4的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明，使用不同預(yù)過濾系統(tǒng)進(jìn)行預(yù)過濾后，再進(jìn)行納米過濾的靜丙原液純度均達(dá)到98.5%以上，符合《中國(guó)藥典》標(biāo)準(zhǔn)。使用不同預(yù)過濾系統(tǒng)進(jìn)行預(yù)過濾后再進(jìn)行納米過濾的靜丙原液的pH值、蛋白質(zhì)含量、抗補(bǔ)體活性、分子大小分布無顯著差異（P＞0.05）。

綜上對(duì)比分析，采用孔徑0.1um濾芯+去脂濾芯進(jìn)行預(yù)過濾后再進(jìn)行納米過濾的靜注人免疫球蛋白，較使用孔徑0.1um濾芯、孔徑0.1um濾芯、去脂濾芯作為預(yù)過濾系統(tǒng)過濾后再進(jìn)行進(jìn)行納米過濾的靜注人免疫球蛋白的生產(chǎn)效率顯著提高。采用不同預(yù)過濾系統(tǒng)進(jìn)行預(yù)過濾后再進(jìn)行納米過濾的靜丙原液的主要質(zhì)量指標(biāo)無顯著差異。

結(jié)論

靜注人免疫球蛋白納米過濾使用孔徑0.1um濾芯+去脂濾芯進(jìn)行預(yù)過濾后再進(jìn)行納米過濾，過濾時(shí)間不超過6小時(shí)，過濾效率明顯提高，且過濾后制品質(zhì)量檢查結(jié)果無明顯差異。表明選擇適宜的預(yù)過濾系統(tǒng)進(jìn)行預(yù)過濾后再進(jìn)行納米過濾能提高過濾效率，同時(shí)不影響靜脈注射用人免疫球蛋白的質(zhì)量。

［1］代旭蘭，陳海等.納米膜過濾技術(shù)在提高人血漿制品安全性方面的應(yīng)用，中國(guó)輸血雜志 2009年06期.

［2］王劍鋒，英志芳等.辛酸鹽滅活靜注人免疫球蛋白中脂包膜病毒效果驗(yàn)證的研究.微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展，2011年第2期.

［3］宋清爽等.血液制品病毒滅活及去除工藝進(jìn)展，生物技術(shù)通訊2012年04期，627-630頁. ［4］張延瑩，李宏昊，姜燕.血液制品滅活及去除病毒工藝，中國(guó)生化藥物雜志 2002年04期.

［5］Robert E. Inactivation of hepatitis C virus in low pH intravenous immunoglobulin. Biologicals（1994）22.13-19.

［6］王玉等.凍干低pH 靜注免疫球蛋白酸孵放滅活病毒方法的驗(yàn)證，中國(guó)輸血雜志 1997年，第十卷，第四期，181-184頁.

R917

A

1674-2060（2016）02-0013-02

黃捷（1977—），女，漢族，四川成都人，四川大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院2012級(jí)在職研究生，現(xiàn)從事于血液制品行業(yè)，就職于成都蓉生藥業(yè)有限責(zé)任公司，具有15年的生產(chǎn)及質(zhì)量管理工作經(jīng)驗(yàn)。

高榮