彭珍桂 盧小玲

（廣西醫(yī)科大學(xué) 廣西南寧 530022）

MTT法和CCK-8法檢測(cè)人肝癌細(xì)胞活性的對(duì)比研究

彭珍桂 盧小玲*

（廣西醫(yī)科大學(xué) 廣西南寧 530022）

目的對(duì)比分析MTT法和 CCK-8法檢測(cè)人肝癌細(xì)胞活性的準(zhǔn)確性。方法：同時(shí)采用MTT法和 CCK-8法檢測(cè)順鉑濃度在0.05、0.5、5umol/ L時(shí)，肝癌細(xì)胞的致死率。結(jié)果：MTT法檢測(cè)的偏大較大，而CCK-8法始終保持較小的偏差，CCK-8法要比MTT法更為準(zhǔn)確，且存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著（P＜0.05）。結(jié)論：CCK-8法檢測(cè)肝癌細(xì)胞優(yōu)越于MTT法，可以在檢測(cè)其他細(xì)胞增殖上推廣應(yīng)用。

MTT法 CCK-8法 肝癌細(xì)胞

近些年來MTT比色法因其簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)、快速等特點(diǎn),已逐漸成為一種分析細(xì)胞活性和其生長(zhǎng)增殖的常用方法［1,2］。但在檢測(cè)過程中產(chǎn)生的藍(lán)紫色結(jié)晶物,屬于水不溶性的,在吸出培養(yǎng)基時(shí)往往帶出結(jié)晶或細(xì)胞,進(jìn)而使實(shí)驗(yàn)結(jié)果誤差偏大。CellCountingKit-8（簡(jiǎn)稱CCK-8）,該方法過程當(dāng)中主要是通過一種脫氫酶轉(zhuǎn)化形成水溶性的晶體,不會(huì)出現(xiàn)不溶物,進(jìn)而進(jìn)行比色檢測(cè),所以誤差不會(huì)太大［3,4］。本研究就是針對(duì)MTT法和CCK-8法基于人肝癌細(xì)胞活性進(jìn)行初步探討,并對(duì)比分析兩種方法。

1 材料和儀器

1.1 細(xì)胞株人肝癌細(xì)胞株（購自北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院）

1.2 儀器和試劑

CO2培養(yǎng)箱（日本）,酶標(biāo)儀（美國）,生物潔凈安全柜（中國）。MTT溶解在無菌PBS（pH7.4,NaCl 0.8%,KCl 0.02%,Na2HPO40. 14%,NaH2PO4 0.02%）,其濃度為0.5g/L。CCK-8試劑盒,自行采購于輝瑞制藥有限公司,SDS配制方法：首先將其溶解在10mmol/ L的鹽酸中,最后定容保證其終濃度在10%；DMSO自滄州東麗精細(xì)化工公司采購；注射用順鉑 （Adriamycin,ADM）從上海輔仁堂藥業(yè)股份股份有限公司采購；10%胎牛血清生產(chǎn)自天津生物工程材料有限公司；RPMI1640培養(yǎng)基采購自美國 GIBCO公司。

2 方法

使用10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液配制順鉑濃度在0.05、0.5、5umol/L,使用0.25%的胰酶進(jìn)對(duì)對(duì)數(shù)期的人的肝癌細(xì)胞進(jìn)行消化,并進(jìn)行計(jì)數(shù),然后將其置于96孔培養(yǎng)板內(nèi),最后調(diào)整每孔細(xì)胞的數(shù)量為2×103,在37℃進(jìn)行培養(yǎng)24h,之后吸掉上清液,再在每孔中加入200uL含順鉑的RPMI-1640培養(yǎng)基,實(shí)驗(yàn)均設(shè)立對(duì)照組和空白組,在37℃培養(yǎng)72h,然后同時(shí)采用MTT法和CCK-8法進(jìn)行檢測(cè)。

3 結(jié)果

由上表可以清晰地看出,在致死率較低時(shí),MTT法檢測(cè)的偏大較大,平行不是很好,而CCK-8法始終保持較小的偏差,因此相比來說,CCK-8法要比MTT法更為準(zhǔn)確,且存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著（P＜0. 05）。

表1 MTT法和CCK-8法檢測(cè)順鉑對(duì)人肝癌細(xì)胞株細(xì)胞的增殖影響

4 結(jié)論

由于MTT法操作簡(jiǎn)單,快速,并且比較經(jīng)濟(jì)安全所以在檢測(cè)細(xì)胞增殖方面得到廣泛應(yīng)用。 但該方法操作過程中產(chǎn)生的不溶于水的結(jié)晶性物質(zhì)甲,加之在加入有機(jī)溶劑前,需要將培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基全部清洗干凈,這增加了出現(xiàn)偏差的概率。CCK-8方法,其檢測(cè)過程中生成的物質(zhì)全是具有高度的水溶性,且不需要使用裂解液對(duì)其溶解, 與此同時(shí),也不用將上清清洗干凈,因此步驟就大大的得到簡(jiǎn)化,所以誤差也不會(huì)太大,并且提高了檢測(cè)的敏感性。

［1］張丹，南黎，任玲，張揚(yáng)，薛楠，劉歡葉.CCK-8法和MTT 法評(píng)價(jià)醫(yī)用抗菌不銹鋼細(xì)胞毒性的比較研究［J］.口腔醫(yī)學(xué)，2012，32：5-8.

［2］吳窈畫，談書華，范超超，李正華.MTT法檢測(cè)細(xì)菌細(xì)胞數(shù)的主要影響因素分析［J］.微生物學(xué)雜志，2011，31：67-72.

［3］謝光洪，許遠(yuǎn)靖，田武林，ed tl.β-HB對(duì)牛皺胃平滑肌細(xì)胞活性影響-MTT 法和 CCK-8 法的比較研究［J］.中國獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2013，33：436-8.

［4］秦慶華，尹承芬，董寧，張慶紅，祝筱梅，姚詠明.噻唑蘭法和CCK-8法檢測(cè)小鼠淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的比較［J］.感染炎癥修復(fù)，2012；13：199-202.

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1674-2060（2016）03-0319-01

盧小玲