彭珍桂 盧小玲
(廣西醫(yī)科大學(xué) 廣西南寧 530022)
MTT法和CCK-8法檢測(cè)人肝癌細(xì)胞活性的對(duì)比研究
彭珍桂 盧小玲*
(廣西醫(yī)科大學(xué) 廣西南寧 530022)
目的對(duì)比分析MTT法和 CCK-8法檢測(cè)人肝癌細(xì)胞活性的準(zhǔn)確性。方法:同時(shí)采用MTT法和 CCK-8法檢測(cè)順鉑濃度在0.05、0.5、5umol/ L時(shí),肝癌細(xì)胞的致死率。結(jié)果:MTT法檢測(cè)的偏大較大,而CCK-8法始終保持較小的偏差,CCK-8法要比MTT法更為準(zhǔn)確,且存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著(P<0.05)。結(jié)論:CCK-8法檢測(cè)肝癌細(xì)胞優(yōu)越于MTT法,可以在檢測(cè)其他細(xì)胞增殖上推廣應(yīng)用。
MTT法 CCK-8法 肝癌細(xì)胞
近些年來MTT比色法因其簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)、快速等特點(diǎn),已逐漸成為一種分析細(xì)胞活性和其生長(zhǎng)增殖的常用方法[1,2]。但在檢測(cè)過程中產(chǎn)生的藍(lán)紫色結(jié)晶物,屬于水不溶性的,在吸出培養(yǎng)基時(shí)往往帶出結(jié)晶或細(xì)胞,進(jìn)而使實(shí)驗(yàn)結(jié)果誤差偏大。CellCountingKit-8(簡(jiǎn)稱CCK-8),該方法過程當(dāng)中主要是通過一種脫氫酶轉(zhuǎn)化形成水溶性的晶體,不會(huì)出現(xiàn)不溶物,進(jìn)而進(jìn)行比色檢測(cè),所以誤差不會(huì)太大[3,4]。本研究就是針對(duì)MTT法和CCK-8法基于人肝癌細(xì)胞活性進(jìn)行初步探討,并對(duì)比分析兩種方法。
1.1 細(xì)胞株人肝癌細(xì)胞株(購自北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院)
1.2 儀器和試劑
CO2培養(yǎng)箱(日本),酶標(biāo)儀(美國),生物潔凈安全柜(中國)。MTT溶解在無菌PBS(pH7.4,NaCl 0.8%,KCl 0.02%,Na2HPO40. 14%,NaH2PO4 0.02%),其濃度為0.5g/L。CCK-8試劑盒,自行采購于輝瑞制藥有限公司,SDS配制方法:首先將其溶解在10mmol/ L的鹽酸中,最后定容保證其終濃度在10%;DMSO自滄州東麗精細(xì)化工公司采購;注射用順鉑 (Adriamycin,ADM)從上海輔仁堂藥業(yè)股份股份有限公司采購;10%胎牛血清生產(chǎn)自天津生物工程材料有限公司;RPMI1640培養(yǎng)基采購自美國 GIBCO公司。
使用10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液配制順鉑濃度在0.05、0.5、5umol/L,使用0.25%的胰酶進(jìn)對(duì)對(duì)數(shù)期的人的肝癌細(xì)胞進(jìn)行消化,并進(jìn)行計(jì)數(shù),然后將其置于96孔培養(yǎng)板內(nèi),最后調(diào)整每孔細(xì)胞的數(shù)量為2×103,在37℃進(jìn)行培養(yǎng)24h,之后吸掉上清液,再在每孔中加入200uL含順鉑的RPMI-1640培養(yǎng)基,實(shí)驗(yàn)均設(shè)立對(duì)照組和空白組,在37℃培養(yǎng)72h,然后同時(shí)采用MTT法和CCK-8法進(jìn)行檢測(cè)。
由上表可以清晰地看出,在致死率較低時(shí),MTT法檢測(cè)的偏大較大,平行不是很好,而CCK-8法始終保持較小的偏差,因此相比來說,CCK-8法要比MTT法更為準(zhǔn)確,且存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著(P<0. 05)。
表1 MTT法和CCK-8法檢測(cè)順鉑對(duì)人肝癌細(xì)胞株細(xì)胞的增殖影響
由于MTT法操作簡(jiǎn)單,快速,并且比較經(jīng)濟(jì)安全所以在檢測(cè)細(xì)胞增殖方面得到廣泛應(yīng)用。 但該方法操作過程中產(chǎn)生的不溶于水的結(jié)晶性物質(zhì)甲,加之在加入有機(jī)溶劑前,需要將培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基全部清洗干凈,這增加了出現(xiàn)偏差的概率。CCK-8方法,其檢測(cè)過程中生成的物質(zhì)全是具有高度的水溶性,且不需要使用裂解液對(duì)其溶解, 與此同時(shí),也不用將上清清洗干凈,因此步驟就大大的得到簡(jiǎn)化,所以誤差也不會(huì)太大,并且提高了檢測(cè)的敏感性。
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盧小玲