彭珍桂 盧小玲

（廣西醫(yī)科大學(xué) 廣西南寧 530022）

MTT法和CCK-8法檢測人肝癌細胞活性的對比研究

彭珍桂 盧小玲*

（廣西醫(yī)科大學(xué) 廣西南寧 530022）

目的對比分析MTT法和 CCK-8法檢測人肝癌細胞活性的準(zhǔn)確性。方法：同時采用MTT法和 CCK-8法檢測順鉑濃度在0.05、0.5、5umol/ L時，肝癌細胞的致死率。結(jié)果：MTT法檢測的偏大較大，而CCK-8法始終保持較小的偏差，CCK-8法要比MTT法更為準(zhǔn)確，且存在統(tǒng)計學(xué)差異顯著（P＜0.05）。結(jié)論：CCK-8法檢測肝癌細胞優(yōu)越于MTT法，可以在檢測其他細胞增殖上推廣應(yīng)用。

MTT法 CCK-8法 肝癌細胞

近些年來MTT比色法因其簡單、經(jīng)濟、快速等特點,已逐漸成為一種分析細胞活性和其生長增殖的常用方法［1,2］。但在檢測過程中產(chǎn)生的藍紫色結(jié)晶物,屬于水不溶性的,在吸出培養(yǎng)基時往往帶出結(jié)晶或細胞,進而使實驗結(jié)果誤差偏大。CellCountingKit-8（簡稱CCK-8）,該方法過程當(dāng)中主要是通過一種脫氫酶轉(zhuǎn)化形成水溶性的晶體,不會出現(xiàn)不溶物,進而進行比色檢測,所以誤差不會太大［3,4］。本研究就是針對MTT法和CCK-8法基于人肝癌細胞活性進行初步探討,并對比分析兩種方法。

1 材料和儀器

1.1 細胞株人肝癌細胞株（購自北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院）

1.2 儀器和試劑

CO2培養(yǎng)箱（日本）,酶標(biāo)儀（美國）,生物潔凈安全柜（中國）。MTT溶解在無菌PBS（pH7.4,NaCl 0.8%,KCl 0.02%,Na2HPO40. 14%,NaH2PO4 0.02%）,其濃度為0.5g/L。CCK-8試劑盒,自行采購于輝瑞制藥有限公司,SDS配制方法：首先將其溶解在10mmol/ L的鹽酸中,最后定容保證其終濃度在10%；DMSO自滄州東麗精細化工公司采購；注射用順鉑 （Adriamycin,ADM）從上海輔仁堂藥業(yè)股份股份有限公司采購；10%胎牛血清生產(chǎn)自天津生物工程材料有限公司；RPMI1640培養(yǎng)基采購自美國 GIBCO公司。

2 方法

使用10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液配制順鉑濃度在0.05、0.5、5umol/L,使用0.25%的胰酶進對對數(shù)期的人的肝癌細胞進行消化,并進行計數(shù),然后將其置于96孔培養(yǎng)板內(nèi),最后調(diào)整每孔細胞的數(shù)量為2×103,在37℃進行培養(yǎng)24h,之后吸掉上清液,再在每孔中加入200uL含順鉑的RPMI-1640培養(yǎng)基,實驗均設(shè)立對照組和空白組,在37℃培養(yǎng)72h,然后同時采用MTT法和CCK-8法進行檢測。

3 結(jié)果

由上表可以清晰地看出,在致死率較低時,MTT法檢測的偏大較大,平行不是很好,而CCK-8法始終保持較小的偏差,因此相比來說,CCK-8法要比MTT法更為準(zhǔn)確,且存在統(tǒng)計學(xué)差異顯著（P＜0. 05）。

表1 MTT法和CCK-8法檢測順鉑對人肝癌細胞株細胞的增殖影響

4 結(jié)論

由于MTT法操作簡單,快速,并且比較經(jīng)濟安全所以在檢測細胞增殖方面得到廣泛應(yīng)用。 但該方法操作過程中產(chǎn)生的不溶于水的結(jié)晶性物質(zhì)甲,加之在加入有機溶劑前,需要將培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基全部清洗干凈,這增加了出現(xiàn)偏差的概率。CCK-8方法,其檢測過程中生成的物質(zhì)全是具有高度的水溶性,且不需要使用裂解液對其溶解, 與此同時,也不用將上清清洗干凈,因此步驟就大大的得到簡化,所以誤差也不會太大,并且提高了檢測的敏感性。

［1］張丹，南黎，任玲，張揚，薛楠，劉歡葉.CCK-8法和MTT 法評價醫(yī)用抗菌不銹鋼細胞毒性的比較研究［J］.口腔醫(yī)學(xué)，2012，32：5-8.

［2］吳窈畫，談書華，范超超，李正華.MTT法檢測細菌細胞數(shù)的主要影響因素分析［J］.微生物學(xué)雜志，2011，31：67-72.

［3］謝光洪，許遠靖，田武林，ed tl.β-HB對牛皺胃平滑肌細胞活性影響-MTT 法和 CCK-8 法的比較研究［J］.中國獸醫(yī)學(xué)報，2013，33：436-8.

［4］秦慶華，尹承芬，董寧，張慶紅，祝筱梅，姚詠明.噻唑蘭法和CCK-8法檢測小鼠淋巴細胞增殖反應(yīng)的比較［J］.感染炎癥修復(fù)，2012；13：199-202.

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1674-2060（2016）03-0319-01

盧小玲