周娟娟　祁　俊　秦亞東

(1 安徽省蕪湖市中醫(yī)醫(yī)院制劑室，蕪湖，241000； 2 安徽中醫(yī)藥高等專科學(xué)校藥學(xué)系，蕪湖，241002)

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玉夏膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

周娟娟1祁俊1秦亞東2

(1 安徽省蕪湖市中醫(yī)醫(yī)院制劑室，蕪湖，241000； 2 安徽中醫(yī)藥高等專科學(xué)校藥學(xué)系，蕪湖，241002)

目的：建立醫(yī)療機構(gòu)制劑玉夏膠囊的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用薄層色譜(TLC)法對玉夏膠囊中防己、萊菔子進(jìn)行定性鑒別研究；采用高效液相色譜(HPLC)法對玉夏膠囊中的粉防己堿和防己諾林堿進(jìn)行定量研究。結(jié)果：薄層色譜中陰性樣品均無干擾，專屬性強；防己諾林堿在24～84 μg/mL范圍內(nèi)峰面積與濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，r=0.9992，平均回收率為102.3%，RSD=2.57%；粉防己堿在34.5～207.0 μg/mL范圍內(nèi)峰面積與濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，r=0.9999，平均回收率為102.3%，RSD=2.57%。結(jié)論：本實驗建立的方法簡便、快捷、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于玉夏膠囊的質(zhì)量控制。

玉夏膠囊；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；薄層鑒別；防己諾林堿；粉防己堿

玉夏膠囊為2010年注冊的醫(yī)療機構(gòu)制劑，臨床療效確切。玉夏膠囊由萊菔子、防己、玉米須等中藥組成，具有清肝瀉火，化痰利濕之功，主要用于痰濕類證高血壓病的治療，癥見胸悶氣短、頭昏眩暈、體胖倦怠等。本文作者結(jié)合處方組成并通過查閱相關(guān)文獻(xiàn)對制劑中的防己、萊菔子進(jìn)行了薄層鑒別研究，對防己中的粉防己堿和防己諾林堿進(jìn)行了含量測定研究，建立了簡單準(zhǔn)確、穩(wěn)定可靠的質(zhì)量控制方法，從而為更好地控制玉夏膠囊的質(zhì)量提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料Agilent 1200高效液相色譜儀(美國Agilent公司)；XP-205電子分析天平(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司)；薄層板均為青島海洋化工廠生產(chǎn)的硅膠G薄層板(供TLC用)。樣品由蕪湖市中醫(yī)醫(yī)院制劑室生產(chǎn)(批號分別為：131113、131114、131115)；萊菔子對照藥材購自中國食品藥品檢定研究院(批號：121074-201002)；粉防己堿對照品購自中國食品藥品檢定研究院(批號：110711-200708)；防己諾林堿對照品購自中國食品藥品檢定研究院(批號：110793-201002)。

1.2方法

1.2.1薄層鑒別

1.2.1.1防己[1]的鑒別取玉夏膠囊內(nèi)容物約2 g，加入30 mL乙醇，加熱回流1 h，放冷，濾過，將濾液蒸干，加入4 mL乙醇將殘渣溶解，得到供試品溶液。取粉防己堿對照品適量，加入乙醇制成對照品溶液(濃度為1 mg/mL)制得粉防己堿對照溶液。另取除防己以外的其他各味藥材按處方比例制得玉夏膠囊陰性樣品，并稱取約2 g的陰性樣品，用與制備供試品溶液同一方法制得陰性對照液。分別吸取上述制得的三種溶液各5 μL，點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-三氯甲烷-丙酮-甲醇(10∶6∶1∶1)為展開劑，用氨水飽和15 min，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液顯色。

1.2.1.2萊菔子的鑒別取約1 g的玉夏膠囊內(nèi)容物，加入30 mL乙醚，加熱回流1 h，棄去乙醚液，將藥渣揮干，加入20 mL甲醇，然后再加熱回流1 h，放冷至室溫，過濾，將濾液蒸干，所得殘渣加入3 mL甲醇溶解，即得玉夏膠囊供試品溶液。取約1 g的萊菔子對照藥材，加入30 mL水煎煮1 h，濾過，濾液用乙醚提取2次，20 mL/次，棄去乙醚液，將水溶液蒸干，殘渣加入1 mL甲醇使其溶解，即得到萊菔子對照藥材溶液。取除萊菔子以外的其他各味藥材按處方比例制得的陰性樣品，并稱取約1 g的萊菔子陰性制劑，用與制備供試品溶液同一方法制得陰性對照液。在同一硅膠G薄層板上，分別吸取上述制得的三種溶液各5 μL進(jìn)行點樣，用乙酸乙酯-甲酸-水(10∶2∶3)的上層溶液進(jìn)行展開，展開后取出晾干，置碘蒸氣中顯色。

1.2.2含量測定

1.2.2.1色譜條件色譜柱：Agilent Eclpise plus C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)；流動相：乙腈∶0.15%三乙胺水溶液=55∶45；柱溫：30 ℃：流速：1.0 mL/min；檢測波長：280 nm。

1.2.2.2對照品溶液的制備分別精密稱取適量的粉防己堿和防己諾林堿對照品，然后加入甲醇制得每1 mL含粉防己堿60 μg、防己諾林堿40 μg的混合溶液。

1.2.2.3樣品溶液的制備精密稱取約1 g玉夏膠囊內(nèi)容物，置具塞錐形瓶中，精密加入50 mL 0.5%三乙胺甲醇溶液，密塞，稱定重量，超聲處理(功率350 W，頻率40 kHz)30 min，放冷至室溫，再稱定錐形瓶重量，并對其減失的重量用0.5%三乙胺甲醇溶液進(jìn)行補足，然后搖勻、過濾，精密量取1 mL續(xù)濾液，放置10 mL的量瓶中，加流動相至刻度。

1.2.2.4空白對照試驗取除防己以外的其他味飲片，按照玉夏膠囊相同的制備工藝制得缺味防己陰性制劑，按“1.1.2.2.3”項下方法制成空白對照樣品溶液。進(jìn)樣體積為10 μL。

1.2.2.5線性關(guān)系考察取適量防己諾林堿和粉防己堿對照品加入甲醇分別制成各自系列濃度對照品溶液。防己諾林堿為：24、36、48、60、72、84 μg/mL；粉防己堿為：34.5、69、103.5、138、172.5、207 μg/mL。按照“1.2.2.1”項下的色譜條件進(jìn)行進(jìn)樣，進(jìn)樣體積均為10 μL。記錄各對應(yīng)的峰面積。

1.2.2.6精密度試驗取批號為131113的玉夏膠囊樣品溶液，按“1.2.2.1”項下的色譜條件進(jìn)行檢測，連續(xù)6次自動進(jìn)樣，記錄相應(yīng)的峰面積。

1.2.2.7穩(wěn)定性試驗取批號為131113的玉夏膠囊樣品溶液，分別于0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h進(jìn)行進(jìn)樣，記錄相應(yīng)的峰面積。

1.2.2.8重復(fù)性試驗精密稱取批號為131113的玉夏膠囊樣品共5份，按“1.2.2.3”項下方法對樣品進(jìn)行處理，在“1.2.2.1”項色譜條件下進(jìn)行含量測定，分別計算樣品中防己諾林堿及粉防己堿的含量。

1.2.2.9加樣回收率試驗取約1 g玉夏膠囊，精密稱定6份，分別精密加入適量防己諾林堿及粉防己堿對照品，置具塞錐形瓶中，其余按照“1.2.2.3”項下樣品溶液的制備方法制得玉夏膠囊供試品溶液。將各份樣品溶液分別在“1.2.2.1”項色譜條件下進(jìn)行含量測定。

1.2.2.10樣品測定精密稱取三批樣品內(nèi)容物(批號分別為131113、131114、131115)約1 g，按“1.2.2.3”項下樣品溶液的制備方法，制成玉夏膠囊樣品溶液。按“1.2.2.1”項下的色譜條件對各批玉夏膠囊樣品進(jìn)行含量測定，分別計算各樣品中防己諾林堿和粉防己堿的含量。

2　結(jié)果

2.1薄層鑒別

2.1.1防己的鑒別由薄層色譜圖1可知，樣品在與粉防己堿對照品色譜相應(yīng)的位置上，具有相同顏色的斑點，但是陰性對照液并無此斑點。

2.1.2萊菔子的鑒別由薄層色譜圖2可知，樣品在與萊菔子對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，具有相同顏色的斑點，但是陰性對照液并無此斑點。

圖1　防己薄層色譜圖　　圖2　萊菔子薄層色譜圖

注：1粉防己堿對照品2樣品3陰性注：1萊菔子對照藥材2樣品3陰性

2.2含量測定

2.2.1空白對照試驗由圖3可知在與防己諾林堿(約9.9 min)和粉防己堿(約17.7 min)相同的色譜峰位置上沒有假陽性峰出現(xiàn)，可見空白無干擾，選取該指標(biāo)專屬性強。

圖3　玉夏樣品色譜圖

注：(A防己諾林堿B粉防己堿C樣品D陰性樣品)

2.2.2線性關(guān)系考察以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，相應(yīng)進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)(X)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。防己諾林堿的回歸方程Y=6.2191X+8.121，r=0.9992，結(jié)果表明防己諾林堿在24～84 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；粉防己堿的回歸方程Y=6.0332X+3.24，r=0.9999，結(jié)果表明粉防己堿在34.5～207 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.3精密度試驗防己諾林堿RSD=0.88%；粉防己堿RSD=0.07%，結(jié)果表明該方法精確度高，符合要求。

2.2.4穩(wěn)定性試驗防己諾林堿RSD=2.57%，粉防己堿RSD=0.29%,結(jié)果表明玉夏膠囊樣品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定性保持良好。

2.2.5重復(fù)性試驗防己諾林堿RSD=1.21%；粉防己堿RSD=0.2%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性好，符合要求。

2.2.6加樣回收率試驗結(jié)果表明防己諾林堿和粉防己堿在本實驗條件下，加樣回收率良好，符合測定要求。詳細(xì)結(jié)果分別見表1和表2。

表1　防己諾林堿加樣回收實驗結(jié)果

表2　粉防己堿加樣回收實驗結(jié)果

2.2.7樣品測定三批玉夏膠囊樣品含量測定結(jié)果見表3。

表3　防己諾林堿及粉防己堿的含量

3　討論

玉夏膠囊組方中玉米須與防己為君藥。玉米須主要成分為脂肪油、揮發(fā)油、樹膠樣物質(zhì)等[2]，1977版中國藥典[3]中收納了玉米須，但至1985版中國藥典起刪除了此味藥材，未查閱到對其進(jìn)行含量測定的報道。防己主要成分為生物堿[4-8]，其明顯的降壓作用[9-13]現(xiàn)已得到認(rèn)同。所以本方選擇測定防己中的粉防己堿和防己諾林堿含量來控制玉夏膠囊的質(zhì)量。

在色譜條件的選擇上，藥典采用的方法為乙腈-甲醇-水-冰醋酸(40∶30∶30∶1)(每100 mL含十二烷基磺酸鈉0.41 g)，此條件使用鹽類極易堵塞損傷色譜柱及高效液相色譜儀所以未考慮使用。通過查閱相關(guān)文獻(xiàn)[14-19]并對色譜條件進(jìn)行反復(fù)比較研究最終確定的流動相條件為乙腈-0.15%三乙胺溶液(55∶45)。此色譜條件下峰型好，分離度高，條件穩(wěn)定可靠，能夠滿足含量測定的要求。

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[2]南京中醫(yī)藥大學(xué).中藥大辭典[M].2版.上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,2005:777-778.

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(2015-03-19收稿責(zé)任編輯：張文婷)

Research of Quality Standard of Yuxia Capsule

Zhou Juanjuan1, Qi Jun1, Qin Yadong2

(1 Anhui Wuhu hospital of Traditional Chinese Medicine, Wuhu 241000, China；2AnhuiHigherInstituteofTraditionalChineseMedicine,Wuhu241002,China)

Objective:To establish the quality standard of Yuxia capsules. Methods: Radix stephaniae tetrandrae(Fang Ji)and Radish Seed(Laifuzi) were identified by TLC and the contents of Tetrandrine and Fangchinoline were detremined by HPLC. Results: The TLC chromatography was exclusive and the blank test showed no interference. The detremination of fangchinoline kept good linear relation in the content ranges of 24～84 μg/mL r =0.9992. The average recovery test of fangchinoline was 102.3%, RSD=2.57%.The detremination of tetrandrine kept good linear relation in the content ranges of 34.5～207.0 μg/mL, r =0.9999. The average recovery test of tetrandrine was 102.3%, RSD=2.57%. Conclusion:The established qualitative methods are simple, fast, accurate and with good reproducibility which can be used for the quality control of Yuxia capsules.

Yuxia capsule; Quality standards; TLC; Fangchinoline; Tetrandrine

安徽省蕪湖市科技計劃2009年度科技項目(編號:衛(wèi)生5—1)

周娟娟(1984—)，女，江蘇，蕪湖市中醫(yī)醫(yī)院主管中藥師，碩士，主要研究方向：中藥新藥研究，E-mail:nzyzjj@163.com

R284.1

A doi：10.3969/j.issn.1673-7202.2016.01.040