陳愛軍，張喜利，張云莉，賀福元，劉　珊，劉文龍*，劉平安

（1湖南環(huán)境生物職業(yè)技術學院，湖南衡陽421005；2湖南中醫(yī)藥大學中藥超分子實驗室，湖南長沙410208；3.湖南安鄉(xiāng)縣北河口血防站，湖南常德415600）

·藥物分析·

葡萄糖原料碎米中12種有機磷農(nóng)藥殘留快速檢測

陳愛軍1，2，張喜利2，張云莉3，賀福元2，劉珊2，劉文龍2*，劉平安2

（1湖南環(huán)境生物職業(yè)技術學院，湖南衡陽421005；2湖南中醫(yī)藥大學中藥超分子實驗室，湖南長沙410208；3.湖南安鄉(xiāng)縣北河口血防站，湖南常德415600）

目的建立一種快速檢測碎米中有機磷農(nóng)藥殘留量的方法，用于注射用葡萄糖原料碎米的質量監(jiān)控。方法采用氣相色譜法與氮磷檢測器（NPD）快速檢測碎米中的12種農(nóng)藥殘留。結果所建立的方法學的線性范圍是0.1～5.0 ppm、檢出限為0.98～6.24 ppb、檢測限為3.27～20.8 ppb、相關系數(shù)均大于0.999 5；精密度、重復性的RSD均在6.3%以下；回收率在87.25%～108.4%。結論本文建立了碎米中有機磷農(nóng)藥殘留的快速檢測方法，為注射用葡萄糖的制備篩選出合格的碎米原料提供了有效保障。

碎米；注射用葡萄糖；氣相色譜；有機磷農(nóng)藥殘留

〔Abstract〕objective To establish a determination method of the organophosphate in the broken rice，which can be used to control the glucose-injection quality.M ethods 12 kinds of pesticides residues were rapid detected by using gas chromatography adding NDP detector.Results The linear range in the established determination method was 0.1～5.0 ppm，the limit of detection was 0.98～6.24 ppb，the limit of qualification was 3.27～20.8 ppb，and the correlation coefficient were all more than 0.995.Furthermore，the RSDs of the precision and repeatability tests were under 6.3%，the coeffecient of recovery was between 87.25%～108.4%.Conclusion This study had established a set of method to detect scientific organophosphorus pesticide residues.It will provide effective guarantee for screen raw broken-rice materials of the injection glucose.

〔Keywords〕broken rice；injection glucose；gas chromatography；organophosphorus pesticide residues

近年來臨床上葡糖糖注射液的需求量逐年增大、有供不應求的趨勢［1］。目前注射用葡萄糖的生產(chǎn)幾乎都是以玉米為原料，經(jīng)過NOVO法酶解而成。然而對以稻谷為主要農(nóng)作物的我國而言，玉米的產(chǎn)量并不多。從而使得以玉米為原料生產(chǎn)供注射用葡萄糖的周期長、產(chǎn)量低、成本高［2］。因此，尋求一種供制備注射用葡萄糖的新原料物種已經(jīng)成為關注的焦點問題。為此，國內許多專家曾試圖以大米為原料研制開發(fā)供注射用的葡萄糖，但由于以大米為原料的生產(chǎn)成本較高、工序過長等原因而使得其產(chǎn)業(yè)停滯不前［3-4］?；诂F(xiàn)階段的碾米技術，在稻谷碾制過程中勢必會產(chǎn)生約10%左右的碎米。這些碎米大多當成廢物而被廉價處理用于燃料、飼料生產(chǎn)等領域。如果將其開發(fā)應用，作為供注射用葡萄糖的另一種新型原料，無疑將賦予碎米新的附加值。眾所周知，碎米是稻谷碾磨時產(chǎn)生的糠殼，幾乎所有的農(nóng)藥殘留都富集在這個部位，因此有必要研究建立一種適宜碎米的農(nóng)藥殘留量的快速檢測方法，檢測控制碎米原料的質量。課題組對用大（碎）米為原料制成注射用葡萄糖已做了大量研究，同時對有機氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)殘進行了研究報道［5-7］，本文旨在繼續(xù)建立碎米中有機磷農(nóng)藥殘留的快速檢測方法。

1　材料

1.1儀器

SP-6890型氣相色譜儀（山東魯南瑞虹化工儀器有限公司），Kromat PC-50色譜柱（30 m× 0.32 mm，0.25μm，北京科瑞邁科技有限責任公司），N2000色譜數(shù)據(jù)工作站（浙江大學），R201D-Ⅱ旋轉蒸發(fā)器（鄭州長城科工貿(mào)有限公司），T-214萬分之一電子天平（北京賽多利斯丹佛），1μL微量進樣器（上海高鴿工貿(mào)有限公司）。

1.2藥品與試劑

碎米采購于湖南各地區(qū)的糧食局?；旌嫌袡C磷農(nóng)藥（敵敵畏、樂果、甲基對硫磷、馬拉硫磷含量分別為49.2、52.3、49.5、52.1、50.3 mg/L，批號335603，環(huán)境保護部標準樣品研究所）。乙硫磷（0.100 g/L，樣品編號BW3458 08001，中國計量科學研究院）。殺撲磷（1.00 g/L，樣品編號BW3454-2 09001，中國計量科學研究院）。二嗪農(nóng)（0.99 g/L，樣品編號BW3457-2 09001，中國計量科學研究院）。甲胺磷（1.00 g/L，樣品編號BW3532 09002，中國計量科學研究院）。久效磷［（1.00 g/L，樣品編號GBW（E）081142 09002，中國計量科學研究院）］。乙酰甲胺磷［（1.00 g/L，樣品編號GBW（E）081143 09001）］。乙酸乙酯、無水硫酸鈉、正己烷（均為分析純，天津化學試劑有限公司）。活性炭小柱（120～400目，0.25 g，內徑0.9 cm）。

2　方法與結果

2.1供試品的制備

2.1.1對照品溶液的制備（1）精密稱取敵敵畏、硫磷、二嗪農(nóng)、甲基對硫磷、殺撲磷、樂果、馬拉硫磷、氧化樂果、甲胺磷、乙硫磷、久效磷、乙酰甲胺磷農(nóng)藥對照品各適量，分別用乙酸乙酯溶解，定容制成每1 mL均含約100μg的單一對照品儲備溶液，保存?zhèn)溆?。?）混合對照品儲備液的制備精密量取上述各對照品儲備液1.00 mL，置同一20 mL棕色量瓶中，加乙酸乙酯稀釋定容至刻度，即得。（3）混合對照品溶液的制備精密量取上述混合對照品儲備液適量，用乙酸乙酯定容制成每1 mL含各對照品0.1、0.5、1.0、2.0、5.0μg的溶液，即得。

2.1.2供試樣品溶液的制備［8］參照2015年版《中華人民共和國藥典》第四部農(nóng)藥殘留量測定法：分別取自各地區(qū)糧食局購買的碎米原料供試樣品約5 g，精密稱定，加無水硫酸鈉5 g，加入乙酸乙酯50～100 mL，冰浴超聲處理3 min，放置，取上層液濾過，濾渣加乙酸乙酯30～50 mL，冰浴超聲處理2 min，放置，濾過，合并兩次濾液，用少量乙酸乙酯洗滌濾紙及殘渣，與上述濾液合并。取濾液于40℃以下減壓濃縮至近干，用乙酸乙酯轉移至5 mL量瓶中，并稀釋至刻度，精密量取1 mL，置活性炭小柱（120～400目，0.25 g，內徑0.9 cm，乙酸乙酯5 mL預洗），用正己烷-乙酸乙酯（1∶1）混合液5 mL洗脫，收集洗脫液，用氮吹儀吹至近干，精密加入乙酸乙酯1 mL使溶解，即得。

2.2方法學考察

2.2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用PC-50 Kromat（30 m×0.32 mm，0.25μm），采用氮磷檢測器（NPD）檢測，進樣口溫度為230℃，檢測器溫度為300℃，分流比為10∶1，氫氣壓為0.02 MPa，空氣壓為0.02 MPa，柱頭壓0.05 MPa，尾吹為0.06 MPa，吹掃是20 mL/min，銣珠加熱器電流為2.8A。程序升溫：初始120℃，保持1 min，以每分鐘10℃的速率升至200℃，保持10 min，再以每分鐘5℃的速率升至240℃，保持2 min，然后以每分鐘20℃的速率升至270℃，保持5 min。理論板數(shù)按敵敵畏峰計算不低于6 000，兩個相鄰色譜峰的分離度均大于1.5。采用“2.1”項下的方法制得供試品溶液和對照品溶液，分別進行色譜測定。結果見圖1。

2.2.2線性范圍、檢測限及定量限考察分別精密吸取上述對照品溶液1.0μL注入氣相色譜儀，測定其相應色譜峰的峰面積。以樣品濃度（ppm）為橫坐標，其相應峰面積為縱坐標，繪制標準曲線并進行線性回歸分析，結果見表1。

結果表明：所測的12種有機磷農(nóng)藥其濃度在0.1～5.0 ppm，峰面積與相應進樣量呈現(xiàn)良好的線性關系，可作為定量分析工作曲線。以3倍信噪比進行計算得12種有機磷農(nóng)藥的檢出限（LOD）為0.98～6.24 ppb。

2.2.3精密度及回收率考察精密吸取上述對照品溶液1.0μL，按“2.2.1”項中色譜分析條件，重復進樣測定5次，將結果列于表2。根據(jù)表2的結果，可以得出該法的儀器精密度的RSD在2.62%～6.24%，回收率在87.25%～108.4%，表明為此方法良好。

2.2.4重復性試驗任取一批碎米樣品（湖南邵陽），一式6份，按“2.1.2”項下方法制備，在添加同一混標后重復測定5次，其RSD值均在0.73%～5.21%，表明重復性較好。

以上實驗數(shù)據(jù)表明：所建立的方法可適宜于碎米中有機磷的殘留量檢測，此法能快速地測定碎米中的12種有機磷的殘留量。

2.2.5樣品測定稱取所購買的5批碎米樣品，照“2.1.2”和“2.2.1”項下的方法制備和測定。測定結果見表3。

3　討論

在稻米種植生產(chǎn)過程中，特別是在谷粒生長時期，如頻繁噴灑各種農(nóng)藥，就會使得稻谷成品的農(nóng)殘超標，嚴重影響其質量與安全性。為此國家科技部已建立了農(nóng)藥有害殘留物檢測技術平臺［9-11］。此外國內許多專家學者也對不同產(chǎn)地、不同藥材、采用包括氣相色譜［12-16］等不同測定方法對有機磷農(nóng)殘進行了研究，取得了系列成果［17-20］。

圖1　有機磷農(nóng)藥殘留的系統(tǒng)適應性圖譜

表1　有機磷農(nóng)藥殘留測定線性范圍考察結果

有關有機磷殘留量的檢測有許多報道，然而是否適宜于碎米樣品的農(nóng)殘檢測未見報道。本實驗用氣相色譜法，采用氮磷檢測器和石英毛細管柱，對12種有機磷農(nóng)藥殘留量展開快速測定研究。一則確認藥典方法對碎米應用的適宜性；二則考察是否需要對其進行優(yōu)化。在實驗過程中，發(fā)現(xiàn)甲胺磷與乙酰甲胺磷較難分離，如用OV-17柱、SE-30柱、DB-624柱都較難分開，但采用Kromat PC-50柱能得到較好分離；氮磷檢測器的靈敏度較難控制，如電流值大小、氫氣與空氣的比例等對其影響較大。

據(jù)報道［21］，我國進出口商品檢驗行業(yè)標準規(guī)定：糧食中有機磷農(nóng)藥允許殘留量為甲胺磷＜0.1 mg/kg，蔬菜、水果中允許殘留量敵百蟲＜0.2 mg/kg、樂果＜1.0 mg/kg，藥品中的有機磷農(nóng)藥殘留遠遠低于這一限定值。而本次實驗測定的碎米樣品中均不同程度含有機磷殘留，而且偏高。

由表3結果可知，所購買的每一批碎米樣品均含有不同種類的、微量的有機磷類農(nóng)藥殘留，如果以此等碎米為原料經(jīng)酶解制成的供注射用葡萄糖，不僅大大增加了此工藝的難度，同時也影響了產(chǎn)品的最終質量。故應提前考慮碎米原料有機磷農(nóng)藥殘留量，用本文建立的快速檢測方法篩選出合格的碎米原料至關重要。

表2　精密度與回收率試驗結果（n=5）

表3　樣品農(nóng)藥殘留測定結果（ppm）

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（本文編輯 蘇維）

Studies on the High-Speed Determ ination of the 12 Organophosphates Pesticides Residues in the Broken Rice for the Raw M aterial of G lucose Injection

CHEN Aijun1，2，ZHANG Xili2，ZHANG Yunli3，HE Fuyuan2，LIU Shan2，LIU Wenlong2*，LIU Pingan2
（1.Hunan Polytechnic of Environment and Biology，Hengyang，Hunan 421005，China；2.Laboratory of Supramolecular TCM，Hunan University of Chinese Medicine，Changsha，Hunan 410007，China；3.Hunan Schistosomiasis Control Station in Beihekou Anxiang，Changde，Hunan 415600，China）

R917

A

doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2016.05.009

2015-09-28

國家自然科學基金項目（30901971，81270055）；湖南省自然科學基金項目（14JJ2110，14JJ7061）。

陳愛軍，女，講師，研究方向：天然藥物開發(fā)及活性成分的研究。

*劉文龍，男，副教授，碩士研究生導師，E-mail：dragon5240@126.com。