林智峰，賈林，趙丹，馬莉，唐玉玲，楊銳，楊曉萍

（1.石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院腎病科，新疆石河子832008；2.石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院，新疆石河子832008）

整合素連接激酶抑制劑QLT0267對(duì)腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的影響*

林智峰1，賈林2，趙丹1，馬莉2，唐玉玲2，楊銳2，楊曉萍1

（1.石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院腎病科，新疆石河子832008；2.石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院，新疆石河子832008）

目的觀察不同濃度整合素連接激酶（ILK）抑制劑QLT0267在高糖下誘導(dǎo)人近端腎小管上皮細(xì)胞-肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化（TEMT）的作用。方法體外培養(yǎng)人近端腎小管上皮細(xì)胞，分為4組：對(duì)照組、高糖組、QLT0267組、高滲組，干預(yù)48h。逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)纖維粘連蛋白（FN）mR NA及α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）mR NA的表達(dá)，Western blot檢測(cè)ILK、蛋白激酶B（AKT）、磷酸化-蛋白激酶B（P-AKT）及α-SMA的表達(dá)，比較組間差異，探討QLT0267對(duì)近端TEMT過(guò)程的影響。結(jié)果①30 mmol/L高糖可以上調(diào)人近端腎小管上皮細(xì)胞細(xì)胞中ILK、P-AKT、FN、α-SMA的表達(dá)。②30 mmol/L甘露醇不能引起人近端腎小管上皮細(xì)胞細(xì)胞中ILK、P-AKT、FN、α-SMA表達(dá)變化。③10μmol/L QLT0267抑制高糖誘導(dǎo)的人近端腎小管上皮細(xì)胞細(xì)胞AKT、FN及α-SMA的mR NA和蛋白表達(dá)。結(jié)論①30 mmol/L葡萄糖可以誘導(dǎo)人近端TEMT。②QLT0267通過(guò)抑制人近端腎小管上皮細(xì)胞細(xì)胞中ILK下游AKT的活化，進(jìn)而抑制FN及α-SMA的表達(dá)，10μmol/L QLT0267可以抑制人近端TEMT。

轉(zhuǎn)分化；近端小管上皮細(xì)胞；整合素連接激酶；QLT0267

腎小管上皮細(xì)胞是一種穩(wěn)定細(xì)胞，在生理情況下增殖不明顯，但受到炎癥、損傷等刺激時(shí)，會(huì)發(fā)生腎小管上皮細(xì)胞肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化（tubularepithelial-myofibroblasttransdifferentiation，TEMT），TEMT后的肌成纖維細(xì)胞（Myofibroblast，MyoF）具有分泌細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）的能力，引起細(xì)胞外基質(zhì)病理性沉積，打破腎間質(zhì)中ECM生成與清除間的平衡，最終引發(fā)腎間質(zhì)纖維化（renal interstitial fibrosis，RIF）。因此，尋找抑制TEMT過(guò)程的作用靶點(diǎn)對(duì)保護(hù)腎臟功能、延緩慢性腎臟?。╟hronic kidney disease，CKD）進(jìn)展至關(guān)重要。研究發(fā)現(xiàn)，糖尿病腎?。╠iabetic nephropathy，DN）TEMT過(guò)程中整合素連接激酶（integrin-linked kinase，ILK）表達(dá)增高[1]，而正常情況下，腎小管上皮細(xì)胞中僅有少量ILK表達(dá)，據(jù)此估計(jì)ILK與TEMT關(guān)系密切。故本研究用ILK特異性抑制劑QLT0267，抑制ILK的活化，觀察其在高糖下誘導(dǎo)TEMT的作用，探討DN過(guò)程中TEMT的發(fā)病機(jī)制，為DN的臨床治療奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1主要材料與儀器

1.1.1實(shí)驗(yàn)材料HK-2細(xì)胞（上海通派公司），胎牛血清（fetal calf serum，F(xiàn)BS）（以色列BI公司），達(dá)爾伯克必需基本培養(yǎng)基（dulbecco's minimum essential medium，DMEM）（無(wú)糖）/F12培養(yǎng)基（美國(guó)Gibico公司），0.25%胰蛋白酶＋乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA）（美國(guó)Heclon公司），噻唑藍(lán)（北京Solarbio公司），QLT0267、二甲基亞砜（上海前塵生物科技有限公司，QLT0267溶劑），兔抗人ILK抗體（英國(guó)Abcam公司），兔抗人蛋白激酶B（protein kinase B，AKT）抗體（美國(guó)Cell Signaling公司），兔抗人磷酸化蛋白激酶B（phospho-protein kinase B，P-AKT）抗體（美國(guó)Cell Signaling公司），鼠抗人α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）抗體（英國(guó)Abcam公司），多聚甲醛（武漢博士德生物公司），山羊血清（北京中杉金橋公司），Trizol（美國(guó)Invitrogen公司），Thermo逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司）。

1.1.2實(shí)驗(yàn)儀器xMark酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀（美國(guó)Bio-Rad公司），顯微鏡（日本Olympus公司），LSM 510 META共聚焦顯微鏡（德國(guó)ZEISS公司），XR+凝膠成像儀（美國(guó)Bio-Rad公司）。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)及分組①細(xì)胞培養(yǎng)：HK-2細(xì)胞購(gòu)置于上海通派公司，復(fù)蘇后用含10%FBS的DMEM（無(wú)糖）/F12培養(yǎng)液于37℃、5%二氧化碳CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)75%～80%時(shí)，用0.25%胰蛋白酶+EDTA消化，傳代培養(yǎng)，取第2～7代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。②細(xì)胞分組：呂智美等[2]實(shí)驗(yàn)及本課題組前期研究均證實(shí)30 mmol/L葡萄糖可以誘導(dǎo)HK-2細(xì)胞轉(zhuǎn)分化；LI等[3]報(bào)道，在HKC細(xì)胞中，1～10μmol/L QLT0267可以發(fā)揮有效的抑制作用。故本實(shí)驗(yàn)分為4組：對(duì)照組、高糖組（30 mmol/L葡萄糖）、QLT0267組（30 mmol/L葡萄糖+10μmol/L QLT0267）、高滲組（30mmol/L甘露醇）作用48 h后，倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。

1.2.2逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（reverse transcription polymerase chain reaction，R T-PCR）檢測(cè)HK-2細(xì)胞中ILK、纖維粘連蛋白（Fibronectin，F(xiàn)N）、α-SMA的表達(dá)Trizol法提取細(xì)胞總RNA，測(cè)定HK-2細(xì)胞中總RNA含量及純度。在逆轉(zhuǎn)錄酶催化下合成cDNA，以cDNA為模板進(jìn)行擴(kuò)增。FN正向引物：5'-CCTCACCAACCTCACTCCAG-3'，反向引物：5'-TCC CTCGGAACATCAGAAAC-3'，擴(kuò)增產(chǎn)物117bp；α-SMA正向引物：5'-CCTGACTGAGCGTGGCTATT-3'，反向引物：5'-CAAGGGAGGTAGAGGTAGC-3'，擴(kuò)增產(chǎn)物134bp；引物由上海生工生物工程有限公司合成，同時(shí)擴(kuò)增管家基因甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）為內(nèi)參照組。α-SMA和FN擴(kuò)增反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性5min，94℃變性30s，59℃/60℃退火30s，72℃延伸30 s，共32個(gè)循環(huán)，72℃繼續(xù)延伸5 min。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）產(chǎn)物在2%瓊脂糖凝膠中電泳，在凝膠成像儀中掃描采圖，以各目的基因與GAPDH比值代表各目的基因的相對(duì)表達(dá)量。

1.2.3Westernblot檢測(cè)HK-2細(xì)胞中AKT、P-AKT、α-SMA的表達(dá)取對(duì)數(shù)期細(xì)胞種板，按上述分組加藥，干預(yù)48h后冰上裂解并收集細(xì)胞，4℃、12000r離心25 min，提取蛋白，二喹啉甲酸（bicinchoninic acid，BCA）試劑盒測(cè)蛋白濃度，配平后加入5×loading buffer，混勻后100℃、8 min煮沸，蛋白變性，上樣電泳，聚偏二氟乙烯膜轉(zhuǎn)膜，5%脫脂奶粉或牛血清白蛋白室溫封閉2h，使用兔抗人單克隆AKT、P-AKT抗體（1∶1 000）或鼠抗人單克隆α-SMA抗體（1∶500）4℃孵育過(guò)夜，二抗（1∶20 000）室溫孵育2 h，暗室曝光，凝膠成像和Gel-Pro analyzer分析系統(tǒng)進(jìn)行灰度分析。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間比較用單因素方差分析，兩兩比較用LSD法，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1倒置相差顯微鏡下HK-2細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察

對(duì)照組中，HK-2細(xì)胞為多邊鵝卵石狀，胞核居中，細(xì)胞間連接緊密，呈島嶼狀生長(zhǎng)；30 mmol/L葡萄糖使HK-2細(xì)胞逐漸由卵圓形、三角形向長(zhǎng)梭型轉(zhuǎn)變，細(xì)胞間緊密連接消失，失去原有極性；QLT0267組中，細(xì)胞數(shù)量較高糖組減少，細(xì)胞呈現(xiàn)長(zhǎng)卵圓形，胞體略增大，可出現(xiàn)凋亡小體；高滲組中細(xì)胞形態(tài)較對(duì)照組無(wú)明顯變化。見(jiàn)圖1。

圖1　倒置相差顯微鏡下HK-2細(xì)胞形態(tài)（×200）

2.2QLT0267干預(yù)48 h對(duì)HK-2細(xì)胞中ILK表達(dá)的影響

Western blot檢測(cè)各組ILK表達(dá)水平，經(jīng)單因素方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=732.525，P=0.000），各組ILK表達(dá)水平有差異，對(duì)照組中可見(jiàn)ILK條帶較細(xì)和弱，進(jìn)一步兩兩比較結(jié)果，①高滲組ILK蛋白相對(duì)表達(dá)量與對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t= 1.094，P=0.306）；②對(duì)照組與高糖組、QLT0267組ILK灰度比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=47.580和29.428，P=0.000），高糖組、QLT0267組ILK灰度較對(duì)照組增高；③高糖組ILK表達(dá)量與QLT0267組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.162，P=0.279）。見(jiàn)圖2。

圖2　Western blot檢測(cè)QLT0267干預(yù)48 h對(duì)各組HK-2細(xì)胞中ILK表達(dá)的影響

2.3QLT0267干預(yù)48h對(duì)HK-2細(xì)胞中AKT、PAKT表達(dá)的影響

Western blot檢測(cè)各組AKT、P-AKT表達(dá)情況。4組AKT蛋白相對(duì)表達(dá)量比較，經(jīng)單因素方差分析，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=1.839，P=0.181）。各組P-AKT表達(dá)水平比較，經(jīng)單因素方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=590.355，P=0.000）。對(duì)照組中可見(jiàn)P-AKT條帶較細(xì)和弱，進(jìn)一步兩兩結(jié)果比較，①對(duì)照組P-AKT蛋白相對(duì)表達(dá)量與高滲組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t= 1.584，P=0.152）；②對(duì)照組與高糖組、QLT0267組PAKT灰度比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=47.580和21.293，P=0.000），高糖組、QLT0267組P-AKT灰度較對(duì)照組增高；③高糖組P-AKT表達(dá)量與QLT0267組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=4.748，P=0.003），QLT0267組P-AKT表達(dá)量較高糖組降低。見(jiàn)圖3。

圖3　Westernblot檢測(cè)QLT0267干預(yù)48 h對(duì)各組HK-2細(xì)胞中AKT、P-AKT表達(dá)的影響

2.4QLT0267干預(yù)48 h對(duì)HK-2細(xì)胞中FN表達(dá)的影響

RT-PCT反應(yīng)檢測(cè)各組FN mRNA的表達(dá)，各組FN mRNA表達(dá)水平比較，經(jīng)單因素方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=227.047，P=0.000）。對(duì)照組中可見(jiàn)FN mRNA條帶較細(xì)和淺，進(jìn)一步兩兩結(jié)果比較，①對(duì)照組FN mRNA相對(duì)表達(dá)量與高滲組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.782，P=0.125）；②對(duì)照組與高糖組、QLT0267組FN mRNA相對(duì)表達(dá)量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=15.616和14.429，P=0.000），高糖組、QLT0267組FN mRNA相對(duì)表達(dá)量較對(duì)照組增高；③高糖組FN mRNA相對(duì)表達(dá)量與QLT0267組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=9.447，P=0.002），QLT0267組FN mRNA相對(duì)表達(dá)量較高糖組降低。見(jiàn)圖4。

圖4　RT-PCR反應(yīng)檢測(cè)QLT0267干預(yù)48 h對(duì)各組HK-2細(xì)胞中FN表達(dá)的影響

2.5QLT0267干預(yù)48 h對(duì)HK-2細(xì)胞中α-SMA mRNA表達(dá)的影響

RT-PCR反應(yīng)檢測(cè)各組中α-SMA的表達(dá)，各組α-SMA mRNA表達(dá)水平比較，經(jīng)單因素方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=40.715，P=0.001）。對(duì)照組中可見(jiàn)α-SMA mRNA條帶較細(xì)和淺，進(jìn)一步兩兩結(jié)果比較，①對(duì)照組α-SMA mRNA相對(duì)表達(dá)量與高滲組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.265，P=0.800）；②對(duì)照組與高糖組、QLT0267組α-SMA mRNA相對(duì)表達(dá)量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=10.844和4.270，P= 0.001和0.005），高糖組、QLT0267組α-SMA mRNA相對(duì)表達(dá)量較對(duì)照組增高；③高糖組α-SMA mRNA相對(duì)表達(dá)量與QLT0267組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=5.987，P=0.001），QLT0267組α-SMA mRNA相對(duì)表達(dá)量較高糖組降低。見(jiàn)圖5。

2.6QLT0267干預(yù)48 h對(duì)HK-2細(xì)胞中α-SMA表達(dá)的影響

Western blot檢測(cè)各組中α-SMA的表達(dá)。各組α-SMA蛋白相對(duì)表達(dá)量比較，經(jīng)單因素方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=869.841，P=0.000）。對(duì)照組中可見(jiàn)α-SMA條帶較細(xì)和淺，進(jìn)一步兩兩結(jié)果比較，①對(duì)照組α-SMA蛋白相對(duì)表達(dá)量與高滲組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.747，P=0.119）；②對(duì)照組與高糖組、QLT0267組α-SMA蛋白相對(duì)表達(dá)量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=46.042和18.585，P=0.000），高糖組、QLT0267組α-SMA蛋白相對(duì)表達(dá)量較對(duì)照組增高；③高糖組α-SMA蛋白相對(duì)表達(dá)量與QLT0267組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=19.244，P= 0.000），QLT0267組α-SMA蛋白相對(duì)表達(dá)量較高糖組降低。見(jiàn)圖6。

圖5　RT-PCR反應(yīng)檢測(cè)QLT0267干預(yù)48 h對(duì)各組HK-2細(xì)胞中α-SMA表達(dá)的影響

圖6　Westernblot檢測(cè)QLT0267干預(yù)48 h對(duì)各組HK-2細(xì)胞中α-SMA表達(dá)的影響

3 討論

近年來(lái)，隨著對(duì)DN過(guò)程中RIF研究的不斷深入，TEMT在CKD發(fā)展為終末期腎臟疾病過(guò)程中的作用受到廣泛關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn)，DN病程發(fā)展過(guò)程中，高糖可以通過(guò)活化TGF-β信號(hào)通路誘導(dǎo)TEMT，其特征為腎小管上皮細(xì)胞原有表型特征喪失，失去其原有黏附特性，轉(zhuǎn)化為表達(dá)α-SMA的MyoF，而α-SMA的出現(xiàn)是TEMT開(kāi)始的標(biāo)志[4]，其表達(dá)量與TEMT嚴(yán)重程度密切相關(guān)[5]。本研究證實(shí)，30mmol/L葡萄糖作用48h，可使HK-2中α-SMA表達(dá)增高，然而30mmol/L葡萄糖亦是高滲溶液，因此設(shè)置30 mmol/L甘露醇組，以鑒別在TEMT過(guò)程中，滲透壓增高是否也是誘導(dǎo)HK-2細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的獨(dú)立因素。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，30 mmol/L甘露醇作用48 h不能使HK-2細(xì)胞中α-SMA表達(dá)增高，與GU等[6]研究結(jié)果基本一致。在該過(guò)程中，ILK在高糖組中表達(dá)亦增高，佐證ILK可能與DN過(guò)程中TEMT關(guān)系密切。

ILK是細(xì)胞基質(zhì)粘連的核心組成部分和整合功能的重要調(diào)節(jié)器[7]，參與細(xì)胞黏附、細(xì)胞形態(tài)變化、調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)沉積等多種病理、生理過(guò)程[8-9]，如激活和維持靜態(tài)毛囊干細(xì)胞穩(wěn)定、防止阻止癌變、抑制乳腺癌干細(xì)胞的生長(zhǎng)等[10-11]。在腎臟中，高糖可能可以通過(guò)引起ILK高表達(dá)，誘發(fā)足細(xì)胞、HK-2細(xì)胞轉(zhuǎn)分化，而大黃酸可能通過(guò)下調(diào)ILK，延緩該疾病過(guò)程[12-13]。因此，尋找有效阻斷ILK信號(hào)通路的醫(yī)藥制劑對(duì)延緩TEMT過(guò)程至關(guān)重要。

QLT0267是目前公認(rèn)的ILK特異性抑制劑，通過(guò)抑制ILK下游AKT（ser473）磷酸化起效[14]，不改變ILK的表達(dá)量，與本研究結(jié)果一致。其可能機(jī)制為：①P-AKT表達(dá)量降低，可以直接抑制細(xì)胞分裂、增生；②P-AKT表達(dá)下降可以激活糖原合酶激酶3，降低β-鏈結(jié)素/T細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子的轉(zhuǎn)錄活性，抑制細(xì)胞增生[14]。在體內(nèi)QLT0267可以抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，抑制瘢痕形成，降低糖尿病大鼠尿白蛋白/肌酐比值[15-18]，參與多種病理生理過(guò)程。那么QLT0267在TEMT過(guò)程中是否也能起到保護(hù)作用呢？

眾所周知，正常情況下，ECM在維持腎臟結(jié)構(gòu)與功能、細(xì)胞生長(zhǎng)與分化過(guò)程中起著非常重要的作用，處于不斷更新和降解的動(dòng)態(tài)平衡中。TEMT后ECM在腎間質(zhì)內(nèi)過(guò)度集聚，引起RIF。ECM的主要成分是Ⅰ型、Ⅲ型膠原、FN及層黏蛋白等，因此，F(xiàn)N與ILK介導(dǎo)的TEMT關(guān)系密切。本研究結(jié)果證實(shí)，高糖誘導(dǎo)ILK表達(dá)增高的同時(shí)亦上調(diào)FN mRNA，與筆者前期報(bào)道內(nèi)容一致[18]，同時(shí)本研究還發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)N與α-SMA同步表達(dá)，即在對(duì)照組、高滲組中少量表達(dá)，在高糖組中表達(dá)量均顯著升高，10μmol/L QLT0267在抑制ILK下游AKT活化的同時(shí)，下調(diào)FN和α-SMA的表達(dá)，證實(shí)QLT0267在抑制TEMT的疾病過(guò)程具有一定的治療效果。

綜上所述，10μmol/L QLT0267可通過(guò)特異性阻止ILK下游蛋白AKT的活化，下調(diào)高糖誘導(dǎo)TEMT過(guò)程中FN和α-SMA的表達(dá)量，延緩TEMT的發(fā)展進(jìn)程，達(dá)到一定的治療效果。

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（童穎丹編輯）

Effect of integrin-linked kinase inhibitor QLT0267 on tubular epithelial-myofibroblast transdifferentiation of HK-2 cells*

Zhi-feng Lin1，Lin Jia2，Dan Zhao1，Li Ma2，Yu-ling Tang2，Rui Yang2，Xiao-ping Yang1
（1.Department of Nephrology，the First Affiliated Hospital of Medical College，Shihezi University，Shihezi，Xinjiang 832008，China 2.Medical College of Shihezi University，Shihezi，Xinjiang 832008，China）

Objective To observe the effect of different concentrations of an inhibitor of integrin-linked kinase（ILK）QLT0267 in process of high glucose-induced tubular epithelial-myofibroblast transdifferentiation（TEMT）.Methods The cultured human renal tubular epithelial cells（HK-2）were divided into control group，high-glucose group，QLT0267 group and D-mannitol group，and cultured for 48 hours.RT-PCR was used to test the expressions of fibronectin（FN）mRNA and α-smooth muscle actin（α-SMA）mRNA.The ILK，AKT，p-AKT and α-SMA protein expressions were detected by Western blot.The differences among the groups were observed，and then the role of QLT0267 in the process of TEMT was explored.Results The expressions ofp-AKT，ILK，F(xiàn)N and α-SMA in the HK-2 cells were up-regulated after 30 mmol/L glucose intervention for 48 h.However，30 mmol/L D-mannitol did not change the expression of p-AKT，ILK，F(xiàn)N or α-SMA in the HK-2 cells after 48 h.QLT0267 at a concentration of 10 μmol/L inhibited the mRNA and protein expressions of AKT，F(xiàn)N and α-SMA in the high glucose-induced HK-2 cells.Conclusions Glucose can lead toTEMT in HK-2 cells at a concentration of 30 mmol/L，while 30 mmol/L D-mannitol can not.QLT0267 can prevent activation of AKT in the downstream of ILK，thereby reduce the expression of FN and α-SMA and delay the process of TEMT in the HK-2 cells at concentration of 10 μmol/L.

epithelial-mesenchymal transition；kidney tubular epithelial cell；integrin-linkedkinase；QLT0267

R 692

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.17.008

1005-8982（2016）17-0039-06

2015-12-29

石河子大學(xué)科學(xué)技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃基金（No：2013ZRKXYQ-YD16）