沈鵬

（天津市第一中心醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，天津300192）

骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)大鼠急性肺損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究

沈鵬

（天津市第一中心醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，天津300192）

目的分析骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）移植對(duì)脂多糖（LPS）急性肺損傷（ALI）大鼠模型中炎癥因子的影響及其作用機(jī)制。方法選取4只4個(gè)月齡的無特定病原體（SPF）級(jí)雄性C57BL/6J小鼠，用于MSC培養(yǎng)。另選取45只SPF級(jí)雄性Sprague Dawley大鼠，隨機(jī)分為5組，每組9只：MSC對(duì)照組（A組）、MSC低劑量組（B組）、MSC高劑量組（C組）、內(nèi)毒素組（D組）、正常對(duì)照組（E組）。于6、24和72h分別留取每組中3只大鼠的血液標(biāo)本與肺組織，分別給予血?dú)夥治?，并測定肺組織中的腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）的含量，同時(shí)測定肺濕重/干重比值，觀察肺組織病理學(xué)變化。結(jié)果3個(gè)時(shí)間點(diǎn)比較，D組IL-1β、TNF-α水平及肺濕重/干重比值高于E組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；B組與C組的血?dú)庵笜?biāo)、IL-1β、TNF-α水平及肺組織結(jié)構(gòu)改善優(yōu)于D組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；A組與E組各項(xiàng)指標(biāo)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論MSC移植對(duì)LPS ALI大鼠有明顯保護(hù)作用，可明顯降低組織中炎癥因子水平，緩解炎癥反應(yīng)，改善血?dú)庵笜?biāo)，且無明顯毒副作用。

骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；移植；大鼠模型；急性肺損傷；炎癥因子

急性肺損傷（acute lung injury，ALI）是臨床上常見的一種危急重癥，病情嚴(yán)重者甚至?xí)霈F(xiàn)急性呼吸窘迫綜合征，病死率極高，占30%～40%[1]。該病的發(fā)病機(jī)制尚未明確，但一般認(rèn)為是肺內(nèi)抗炎促炎平衡失調(diào)所致[2]。目前，臨床上對(duì)該病尚無有效治療措施，常用方法包括機(jī)械通氣、纖溶與凝血失衡改善、抗氧化、抗炎等，治療效果有限[3]。最近文獻(xiàn)報(bào)道，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells，MSC）具有再生修復(fù)、免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗凋亡等作用[4]，且已用于治療心、腦、腎及全身炎癥反應(yīng)性疾病，并取得良好的效果[5]。但MSC在急性肺損傷中的作用及其機(jī)制尚無明確結(jié)論，需進(jìn)一步驗(yàn)證。本實(shí)驗(yàn)在成功建立大鼠脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）ALI模型的基礎(chǔ)上，采取尾靜脈注射MSC，觀察其對(duì)脂多糖ALI大鼠白細(xì)胞介素-1β（Interleukine-1 beta，IL-1β）、人腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor α，TNF-α）等炎癥因子水平及大鼠血?dú)庵笜?biāo)等的影響，并探討其可能的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物4只無特定病原體（specefic pathogen free，SPF）級(jí)健康C57BL/6J雄性小鼠，年齡4個(gè)月，體重20～25 g，用于骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)。45只SPF級(jí)健康雄性Sprague Dawley大鼠，體重180～220 g。所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物由天津中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.1.2實(shí)驗(yàn)試劑IL-1β試劑盒（武漢華美生物工程有限公司），TNF-α試劑盒（武漢博士德生物科技公司），胎牛血清（美國Hyclone公司），0.02 mol/L乙二胺四乙酸+0.25%胰酶（美國Gibco公司），低糖改良Eagle培養(yǎng)基（dulbecco's modified eagle medium，DMEM）培養(yǎng)基（美國Gibco公司），內(nèi)毒素LPS（美國Sigma公司）。

1.2方法

1.2.1制備MSC根據(jù)既往文獻(xiàn)[6]標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行小鼠MSC培養(yǎng)及鑒定。無菌獲取SPF級(jí)雄性C57BL/6J小鼠的脛骨、股骨，取出骨髓，制成單細(xì)胞懸液，1 200 g離心3 min，選取含100 IU/ml雙抗的低糖DMEM及10%胎牛血清對(duì)基重懸細(xì)胞予以培養(yǎng)，將濃度調(diào)至1×108/ml，并在25 cm2培養(yǎng)瓶中進(jìn)行接種，置于二氧化碳CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)箱的飽和濕度控制在37℃左右，5%CO2細(xì)胞融合達(dá)80%～90%后，經(jīng)0.25%胰蛋白酶消化，獲取較為均質(zhì)的MSC，并按1∶2傳至Ⅳ代。MSC流式細(xì)胞儀分析CD34陰性（0.9%）、CD105陽性（95.3%），可見細(xì)胞純度>95%。見圖1。

圖1　流式細(xì)胞分析第Ⅳ代MSC的表型

1.2.2建立大鼠ALI模型45只SD大鼠隨機(jī)劃分5組，每組9只：MSC對(duì)照組（A組）、MSC低劑量組（B組）、MSC高劑量組（C組）、內(nèi)毒素組（D組）、正常對(duì)照組（E組）。A組MSC 1×106個(gè)/ml 0.5ml經(jīng)尾靜脈注射；B組MSC 1×106個(gè)/ml 0.5ml+LPS 5mg/kg經(jīng)尾靜脈注射；C組MSC 1×106個(gè)/ml 0.5 ml+LPS 5 mg/kg經(jīng)尾靜脈注射；D組LPS 5 mg/kg經(jīng)尾靜脈注射；E組尾靜脈注射等量生理鹽水。于造模后6、24和72 h處死大鼠，獲取標(biāo)本，每個(gè)時(shí)間各組處死3只大鼠。

1.2.3收集與處理血及肺組織標(biāo)本腹主動(dòng)脈采血后立即予以血?dú)夥治?。取右肺上葉，在多聚甲醛中置入右肺下葉組織，觀察組織形態(tài)學(xué)。取大鼠余肺組織，生理鹽水洗凈，置于-70℃冰箱內(nèi)液氮冷凍保存。

1.2.4肺濕重/干重比值取右肺上葉，取量控制在250～300mg，吸凈肺表面血液，分析天平測濕重后，置入80℃烘烤，48h后測干重。

1.2.5肺組織形態(tài)學(xué)取右肺下葉組織，4%多聚甲醛固定，石蠟包埋、切片，蘇木精-伊紅染色法（hematoxylin-eosin staining，HE）染色，常規(guī)光鏡觀察、照相。

1.2.6測定肺組織中IL-1β和TNF-α利用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法檢測肺組織IL-1β、TNF-α含量。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間比較用方差分析，方差齊則兩兩比較用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1肺組織病理學(xué)改變

光鏡觀察發(fā)現(xiàn)，A組肺泡腔內(nèi)無明顯炎癥細(xì)胞浸潤與紅細(xì)胞滲出，間質(zhì)水腫不明顯，肺泡結(jié)構(gòu)完整；B組肺泡腔內(nèi)炎癥細(xì)胞、紅細(xì)胞多量滲出，部分肺泡結(jié)構(gòu)破壞；C組肺泡腔內(nèi)可見少量中性粒細(xì)胞、紅細(xì)胞浸潤，一部分肺泡間隔寬度稍微增加，大部分肺組織完整；D組肺泡腔內(nèi)出現(xiàn)大量中性粒細(xì)胞、紅細(xì)胞，可見漿液性滲出，肺組織水腫嚴(yán)重，大部分肺泡結(jié)構(gòu)破壞；E組肺泡腔內(nèi)沒有發(fā)現(xiàn)炎癥細(xì)胞浸潤，支氣管黏膜上皮處于完整狀態(tài)，肺泡壁薄，肺組織結(jié)構(gòu)十分清晰。A組和E組肺組織病理改變一致，屬正常肺組織，故筆者只留取A組肺組織的鏡下圖。見圖2。

圖2　肺組織病理學(xué)改變（HE染色×200）

2.2肺濕重/干重比值

5組各時(shí)間肺濕重/干重比值比較，經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。其中兩兩結(jié)果比較，D組6、24和72 h肺濕重/干重比值高于E組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；D組6h肺濕重/干重比值與B、C組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；D組24和72h肺濕重/干重比值高于B、C組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；A組與E組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

表1　各組肺濕重/干重比值比較（±s）

表1　各組肺濕重/干重比值比較（±s）

注：1）與D組比較，t=12.154，P=0.004；2）與D組比較，t=3.497，P=0.046；3）與D組比較，t=9.367，P=0.036；4）與D組比較，t=19.253，P=0.002；5）與E組比較，t=23.790，P=0.001；6）與E組比較，t=39.098，P=0.000；7）與E組比較，t=13.843，P=0.002

72h濕重/干重比值A(chǔ)組3.91±0.314.12±0.284.17±0.25 B組5.11±0.344.77±0.391）4.62±0.312）C組5.04±0.304.69±0.373）4.43±0.144）D組5.32±0.235）5.19±0.166）4.98±0.157）E組4.02±0.263.96±0.224.16±0.13 F值25.37119.67635.643 P值0.0390.0460.021組別6h濕重/干重比值24h濕重/干重比值

表25　組不同時(shí)間血?dú)夥治霰容^（mmHg±s）

表25　組不同時(shí)間血?dú)夥治霰容^（mmHg±s）

注：1）與D組比較，t=23.445，P=0.001；2）與D組比較，t=19.716，P=0.002；3）與D組比較，t=36.643，P=0.000；4）與D組比較，t=6.308，P= 0.043；5）與D組比較，t=38.042，P=0.000；6）與E組比較，t=41.097，P=0.000；7）與E組比較，t=7.695，P=0.040；8）與E組比較，t=21.474，P=0.001；9）與E組比較，t=43.983，P=0.000；10）與E組比較，t=47.485，P=0.000；11）與E組比較，t=17.632，P=0.002

組別6h24h72h PaO2PaO2PaO2PaCO2A組92.24±2.6348.13±3.8291.59±2.0945.58±1.3293.46±2.4446.31±2.92 B組76.12±4.5953.74±3.8879.51±4.3351.16±3.9883.91±4.151）50.13±4.48 C組77.71±5.6551.23±3.942）81.76±3.623）48.46±4.414）84.04±3.7646.86±4.155）D組73.02±6.226）57.31±2.57）74.79±7.288）54.27±4.049）78.61±7.2510）53.26±3.5511）E組92.86±3.1746.31±3.3891.16±3.1744.41±1.2990.61±3.5447.26±2.63 F值15.97423.16736.79927.65033.21341.972 P值0.0490.0410.0190.0240.0220.011 PaCO2PaCO2

2.3血?dú)夥治?/p>

5組各時(shí)間動(dòng)脈血氧分壓（partial pressure of oxygen in arterial blood，PaO2）、動(dòng)脈血二氧化碳分壓（partial pressure of carbon dioxide in arterial blood，PaCO2）比較，經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。其中兩兩比較結(jié)果，D組PaCO2高于E組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；D組6、24和72h PaCO2較C組升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；D組PaO2低于E組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；D組24和72 h PaO2與C組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；B組72h PaO2與D組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；A組PaCO2、PaO2與E組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P> 0.05）。見表2。

2.4肺組織IL-1β、TNF-α水平

5組各時(shí)間IL-1β、TNF-α水平比較，經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。其中兩兩比較結(jié)果，D組較A組6、24和72h肺組織IL-1β、TNF-α水平上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；D組6、24和72 h肺組織IL-1β、TNF-α水平高于B、C組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；A組6、24和72h肺組織IL-1β、TNF-α水平與E組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表3。

表35　組不同時(shí)間肺組織IL-1β、TNF-α水平比較（mg/L±s）

表35　組不同時(shí)間肺組織IL-1β、TNF-α水平比較（mg/L±s）

注：t1、P1值：A組與E組比較；t2、P2值：B組與D組比較；t3、P3值：C組與D組比較；t4、P4值：D組與E組比較

組別6h24h72h TNF-αTNF-αTNF-αIL-1β A組108.01±28.0274.26±27.28114.44±25.4569.23±24.26112.34±30.5274.01±25.57 B組266.53±24.58250.15±41.78242.93±32.51235.78±39.92211.48±30.79186.81±34.88 C組233.14±42.73205.93±37.77215.31±41.34184.41±33.17178.68±36.69168.81±32.49 D組341.21±36.32309.25±37.38304.01±32.58279.26±35.72281.98±36.13231.22±34.37 E組83.73±35.9566.18±16.6187.19±29.4762.01±19.9181.28±32.6465.28±18.44 F值35.17650.28519.74828.77464.32354.379 P值0.0200.0090.0450.0230.0000.004 t1值16.4536.86236.65426.2983.45656.732 P1值0.0030.0380.0000.0010.0450.000 t2值11.73657.52745.7904.62925.90120.008 P2值0.0050.0000.0000.0470.0010.003 t3值53.21379.43035.27032.57523.42513.873 P3值0.0000.0000.0000.0000.0010.004 t4值46.46916.93157.84319.00736.65463.380 P4值0.0000.0030.0000.0030.0000.000 IL-1βIL-1β

3 討論

ALI的病理特征為多形核白細(xì)胞積聚、微血管通透性增加及非心源性肺水腫[7]。其臨床表現(xiàn)主要為進(jìn)行性低氧血癥與呼吸窘迫[8]；而在肺部影像學(xué)上的表現(xiàn)主要為非均一性的滲出性病變[9]。關(guān)于其發(fā)病機(jī)制，現(xiàn)階段普遍認(rèn)為多種致病因素可激活全身炎癥反應(yīng)或者肺組織炎癥反應(yīng)，多種炎癥細(xì)胞穿過上皮細(xì)胞屏障與內(nèi)皮細(xì)胞屏障進(jìn)入肺泡腔內(nèi)，大量釋放細(xì)胞因子與毒素，導(dǎo)致肺氧合功能障礙、肺水腫及肺泡-毛細(xì)血管屏障通透性增加[10]。目前，有較多學(xué)者對(duì)于ALI的治療進(jìn)行深入研究，主要治療措施仍是針對(duì)缺氧對(duì)癥處理[11]，對(duì)于ALI的失控性或失平衡性炎癥，臨床仍缺乏行之有效的治療策略[12]。另外，中醫(yī)藥對(duì)于該病的發(fā)病機(jī)制及治療也有一定進(jìn)展，從中醫(yī)角度，ALI屬于暴喘、喘脫等范疇[13]，病理基礎(chǔ)為肺不主氣[14]，目前某些中藥或復(fù)方制劑從抑制炎癥反應(yīng)、調(diào)節(jié)免疫功能、抗氧化等方面著手，對(duì)該病的治療有一定療效[15]。盡管如此，該病仍是一種極危重癥，有極高的致死率，因此需要有效、可靠的治療方法來提高臨床療效。

目前，干細(xì)胞移植術(shù)對(duì)危重疑難系統(tǒng)系疾病的治療效果逐漸嶄露頭角[16]，是國內(nèi)外學(xué)者的研究熱點(diǎn)。干細(xì)胞是一種具有多向分化潛能的細(xì)胞，其自我增值能力強(qiáng)，可歸巢至組織、修復(fù)組織損傷[17]。據(jù)報(bào)道，某些干細(xì)胞可分泌細(xì)胞因子和生長因子，該因子也可促進(jìn)組織修復(fù)[18]?，F(xiàn)階段臨床上及科研中常用的干細(xì)胞有兩種，即胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞，但前者因倫理因素及致瘤風(fēng)險(xiǎn)使其應(yīng)用受到限制[19]，成體干細(xì)胞因不受限制則有廣泛的應(yīng)用前景。MSC屬于干細(xì)胞的一種，主要組織相容性復(fù)合體（major histocompatibility complex，MHC）Ⅱ蛋白、MHCⅠ蛋白表達(dá)低，故其免疫原性低，異體干細(xì)胞移植耐受性高[20]。目前已有較多關(guān)于MSC的臨床應(yīng)用研究，如自身免疫病[21]、心臟疾病、骨骼疾病等[22]。

在體內(nèi)或體外特定條件誘導(dǎo)下，MSC可向支氣管上皮和肺泡上皮細(xì)胞分化[23]。最新研究發(fā)現(xiàn)，MSC對(duì)急性肺損傷具有修復(fù)功效，可以有效降低髓過氧化酶活性、肺濕干重比值[24]。張峰等[25]探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)內(nèi)毒素誘發(fā)急性肺損傷模型兔的保護(hù)作用，發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組比較，MSC移植組家兔支氣管肺泡灌洗液中性粒細(xì)胞數(shù)目、蛋白含量明顯升高，濕干比明顯降低，且病理變化較輕。鄭凱等[26]建立急性放射性肺損傷大鼠模型，觀察MSC移植對(duì)其治療作用，結(jié)果表明，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可以遷移到放射性損傷的肺組織，促進(jìn)放射性肺損傷組織的修復(fù)，其治療機(jī)制可能與MSC抑制炎癥反應(yīng)、抗氧化、減輕肺組織纖維化等有關(guān)。本研究中，MSC移植組6h肺濕重/干重比值與對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；移植后24和72h肺濕重/干重比值下降，表示MSC移植有利于降低肺泡-毛細(xì)血管膜通透性，可抑制肺泡、肺間質(zhì)中血漿滲透，有利于緩解肺水腫。除此之外，血?dú)夥治鲋?，MSC高劑量組PaO2、PaCO2改善情況明顯優(yōu)于對(duì)照組，間接表明干細(xì)胞移植有利于緩解肺水腫。6h時(shí)MSC的治療作用不明顯，可能是因?yàn)樽饔脮r(shí)間短，其修復(fù)能力未顯現(xiàn)。相關(guān)研究報(bào)道中提出，干細(xì)胞移植可緩解肺水腫，主要在于干細(xì)胞分泌血管生成素-1可抑制肌動(dòng)蛋白結(jié)構(gòu)破壞，但是現(xiàn)階段具體機(jī)制尚未明確。另外，本研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，MSC高劑量組6、24和72 h肺組織IL-1β、TNF-α水平降低，表明MSC移植有利于緩解急性肺損傷炎癥反應(yīng)。A組與E組（即MSC對(duì)照組和正常對(duì)照組）各個(gè)指標(biāo)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明高劑量干細(xì)胞的毒副作用不明顯。

綜上所述，MSC移植對(duì)大鼠LPS急性肺損傷有一定的治療作用，有利于減輕炎癥反應(yīng)，無明顯毒副反應(yīng)。為臨床利用MSC治療ALI提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)，相信隨著研究的不斷深入，MSC終將應(yīng)用于臨床，成為治療ALI的有效手段。

[1]CHU C,RE N H,XU N,et al.Eupatorium lindleyanum DC. sesquiterpenes fraction attenuates lipopolysaccharide-induced acute lung injury in mice[J].J Ethnopharmacol,2016,185:263-271.

[2]吳海青,李濤平,黃麗.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)脂多糖急性肺損傷大鼠炎癥因子的影響[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2012,3(12):1971-1974.

[3]賈雪梅,楊光福.急性肺損傷/急性呼吸窘迫綜合征發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展[J].中國實(shí)用醫(yī)藥,2011,6(2):242-244.

[4]蔡存良,文仲光,周崗,等.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)急性肺損傷大鼠血漿TNF-α、IL-6水平的影響[J].感染.炎癥.修復(fù),2006,7(2): 98-101.

[5]TAN Z,SU Z Y,WU R R,et al.Immunomodulative effects of mesenchymalstem cells derived from human embryonic stem cells in vivo and in vitro[J].J Zhejiang Univ Sci B,2011,12(1): 18-27.

[6]李曉峰,趙勁民,蘇偉,等.大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)與鑒定[J].中國組織工程研究與臨床康復(fù),2011,15(10):1721-1725.

[7]MOON K M,HAN M S,RIM C B,et al.Transfusion related acute lung injury after cesarean section in a patient with HELLP syndrome[J].Korean J Fam Med,2016,37(1):71-74.

[8]CASSIANO SILVEIRA A P,VENTO D A,ALBUQUERQUE A A,et al.Effects of methylene blue in acute lung injury induced by oleic acid in rats[J].Ann Transl Med,2016,4(1):8.

[9]燕明宇,陳亮,熊文激,等.惡性疾病化療后急性肺損傷的影像學(xué)表現(xiàn)[J].中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2010,5:745-746.

[10]吳海青,李濤平,徐健,等.間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)脂多糖誘導(dǎo)急性肺損傷大鼠親環(huán)素A表達(dá)的影響[J].國際藥學(xué)研究雜志,2012,9(5): 425-429.

[11]錢桂生.急性肺損傷和急性呼吸窘迫綜合征的診斷與治療[J].解放軍醫(yī)學(xué)雜志,2009,34(4):371-373.

[12]劉濤,任成山.炎癥介質(zhì)在急性肺損傷/急性呼吸窘迫綜合征發(fā)病機(jī)制中的作用[J].中華肺部疾病雜志:電子版,2013,6(3):265-269.

[13]陳慧婷,白麗,劉靈.人工牛黃對(duì)急性肺損傷大鼠HIF-la、NF-KB p65的干預(yù)作用研究[J].光明中醫(yī),2015,2:264-266.

[14]肖光華,吳敏,宓越群.急性肺損傷中醫(yī)病機(jī)及治法探討[J].上海中醫(yī)藥雜志,2008,42(10):80-82.

[15]曾明輝,譚正懷.5種中藥制劑對(duì)急性肺損傷小鼠的保護(hù)作用[J].華西藥學(xué)雜志,2015,30(3):305-307.

[16]黃前川,張新華.多發(fā)性骨髓瘤干細(xì)胞移植術(shù)后伴異常蛋白帶與療效和預(yù)后的相關(guān)性[J].實(shí)用癌癥雜志,2016,31(1):169-170.

[17]強(qiáng)勇,梁貴友.間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療急性肺損傷的研究進(jìn)展[J].中華細(xì)胞與干細(xì)胞雜志:電子版,2014,4(3):56-60.

[18]翟晶磊,曹寧,岳文,等.人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞通過分泌IL-6介導(dǎo)岡田酸對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞毒性的保護(hù)作用[J].生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展,2016,43(2):141-149.

[19]SONG Z,CAI J,LIU Y,et al.Efficient generation of hepatocyte-like cells from human induced pluripotent stem cells[J]. Cell Research,2009,19(11):1233-1242.

[20]LEE J W,KRASNODEMBSKAYA A,MCKENNA D H,et al. Therapeutic effects of human mesenchymal stem cells in ex vivo human lungs injured with live bacteria[J].Am JRespir Crit Care Med,2013,187(7):751-760.

[21]阮光萍,王金祥,楊建勇,等.系統(tǒng)性紅斑狼瘡小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的成骨、成脂分化能力下降[J].中國組織工程研究,2014,18(1): 1-6.

[22]李瑞琦,張國平,任立中,等.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療股骨頭壞死的評(píng)價(jià)[J].中國組織工程研究,2013,17(35):6327-6332.

[23]顧問,郭雪君,徐衛(wèi)國.間充質(zhì)干細(xì)胞治療呼吸系統(tǒng)疾病的研究進(jìn)展[J].中華肺部疾病雜志:電子版,2016,9(1):82-86.

[24]張繼峰,張紫琦,雒曉甜,等.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)膿毒癥急性肺損傷大鼠肺泡巨噬細(xì)胞NF-κB的調(diào)控[J].中國組織工程研究, 2015,19(10):1556-1561.

[25]張峰,程瑾,楚東嶺,等.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)家兔急性肺損傷的保護(hù)作用[J].中國組織工程研究與臨床康復(fù),2009,13(27): 5225-5228.

[26]鄭凱,趙興旺,吳衛(wèi)真,等.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療大鼠急性放射性肺損傷[J].中國組織工程研究,2014,50:8122-8129.

（童穎丹編輯）

Protective effect of bone marrow mesenchymal stem cell transplantation on acute lung injury in rats and its mechanism

Peng Shen
（Department of Rheumatology，the First Central Hospital of Tianjin，Tianjin 300192，China）

Objective To analyze the impact of bone marrow mesenchymal stem cell（MSC）transplantation on inflammatory factors of rat model with lipopolysaccharide（LPS）-induced acute lung injury（ALI）and the mechanism.Methods Four 4-month SPF male C57BL/6J mice were recruited for bone marrow MSC.In addition，45 SPF male SD rats were randomly divided into five groups as follows：MSC control group（group A），low-dose MSC group（group B），high-dose MSC group（group C），endotoxin group（group D）and normal control group（group E）.At 6，24 and 72 h，blood samples and lung tissue of three rats from each group were collected.Blood gas analysis，TNF-α and IL-1β in lung tissue，and lung wet weight/dry weight were detected.Pathological changes of lung tissue were observed.Results At 6，24 and 72 h，TNF-α and IL-1β levels and lung wet weight/dry weight ratio of the group D were significantly higher than those of the group E（P＜0.05）；blood gas indexes，TNF-α and IL-1β levels and the improvement of lung structure of the groups B and C were significantly superior to those of the group D（P＜0.05）；but there was no significant difference in any of the above indexes between the group A and the group E（P＞0.05）.Conclusions MSC transplantation has significantly protective effects on acute lung injury in rats，can significantly reduce the tissue levels of inflammatory factors，relieve inflammation，improve blood indicators，and has no obvious side effects.

mesenchymal stem cell；transplant；rat；acute lung injury；inflammatory cytokine

R 563

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.17.003

1005-8982（2016）17-0013-06

2016-04-07