趙麗娟，徐衛(wèi)云，張曉紅，張珍，張靖

（四川省綿陽市中心醫(yī)院乳腺外科，四川綿陽621000）

乳腺癌患者血清中中期因子、血小板因子4以及黏蛋白1含量檢測對病情評估的價(jià)值

趙麗娟，徐衛(wèi)云，張曉紅，張珍，張靖

（四川省綿陽市中心醫(yī)院乳腺外科，四川綿陽621000）

目的分析乳腺癌患者血清中中期因子（MK）、血小板因子4（PF4）以及黏蛋白1（MUC1）含量檢測對病情評估的價(jià)值。方法選取2012年11月-2015年1月在綿陽市中心醫(yī)院接受治療的乳腺癌患者178例作為觀察組對象，根據(jù)病理分型不同分為非浸潤性癌組32例，早期浸潤性癌組50例，中晚期浸潤性癌組96例。另取同期在本院接受體檢的女性108例作為健康對照組。比較各組研究對象的血清MK、PF4以及MUC1含量；CA153、VEGF、25-OH-D及D-Dimer水平；CEAmR NA、SurvivinmR NA、MMP-2mR NA、TIMP-2 mR NA表達(dá)等差異。進(jìn)一步分析血清中MK、PF4以及MUC1含量與乳腺癌惡性生物學(xué)指標(biāo)值之間的相關(guān)關(guān)系。結(jié)果乳腺癌患者的血清MK、PF4、MUC1、CA153、VEGF及D-Dimer、CEA mR NA、Survivin mR NA、MMP-2 mR NA、TIMP-2 mR NA含量明顯高于健康對照組，25-OH-D水平低于健康對照組（P<0.05）；中晚期浸潤性癌組患者的血清MK、PF4、MUC1、CA153、VEGF及D-Dimer、CEA mR NA、Survivin mR NA、MMP-2 mR NA、TIMP-2 mR NA含量高于早期浸潤性癌及非浸潤性癌患者，25-OH-D水平低于早期浸潤性癌及非浸潤性癌患者（P<0.05）。結(jié)論乳腺癌患者的血清MK、PF4以及MUC1含量可以有效準(zhǔn)確的評估患者的病情嚴(yán)重程度，可以作為遠(yuǎn)期評價(jià)臨床治療效果及治療預(yù)后的指標(biāo)之一。

乳腺癌；病情評估；血清指標(biāo)

乳腺癌是危害女性健康的主要惡性疾病之一，發(fā)病率在全球呈上升趨勢。目前，乳腺癌的臨床診斷及治療已經(jīng)獲得巨大的進(jìn)步，但是仍有一部分乳腺癌患者死于復(fù)發(fā)或者轉(zhuǎn)移[1]。提高乳腺癌的早期診斷一直是臨床研究的重點(diǎn)，最新的研究發(fā)現(xiàn)中期因子（Midkine，MK）含量、血小板因子4（platlet factor 4，PF4）、黏蛋白1（mucin 1，MUC1）均在乳腺癌患者的血清中存在異常表達(dá)，有望成為早期診斷乳腺癌的全新標(biāo)志物[2]。本次研究主要分析乳腺癌患者血清中MK、PF4以及MUC1含量檢測對病情評估的價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料

選取2012年11月-2015年1月在綿陽市中心醫(yī)院接受治療的乳腺癌患者178例作為觀察組。均經(jīng)空芯針穿刺病理確診為乳腺癌，且為原發(fā)性單側(cè)、未接受放化療及內(nèi)分泌治療。根據(jù)病理分型不同包括非浸潤性癌組32例，早期浸潤性癌組50例，中晚期浸潤性癌組96例。另取同期在本院接受體檢的健康女性108例作為健康對照組。觀察組患者年齡40～72歲，平均（57.92±6.05）歲；對照組患者年齡38～71歲，平均（54.67±6.11）歲。兩組研究對象的基線資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P>0.05。

1.2樣本處理

在采取干預(yù)措施前，抽取所有入組對象的晨起空腹外周靜脈血2 ml，經(jīng)1 000 r/min離心3 min（離心半徑17.5 cm），靜置取上層血清后放入-80℃冰箱內(nèi)保存待測。

1.3檢測指標(biāo)

采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定入組對象的MK含量、PF4、MUC1水平。采用電化學(xué)發(fā)光免疫分析法測定血清糖類抗原153（CA153）水平，采用ELISA法測定血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、25-羥基維生素D（25-OH-D）水平，采用免疫比濁法測定D-二聚體（D-Dimer）水平。靜脈血加入枸櫞酸鈉抗凝后，用淋巴細(xì)胞分層液分離外周血單個(gè)核細(xì)胞，加入Trizol 1 ml后，用經(jīng)典方法抽提總RNA。經(jīng)反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA及實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（real-time PCR）后，測定血清中CEA mRNA、Survivin mRNA、MMP-2 mRNA及TIMP-2mRNA水平。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，用方差分析，相關(guān)性分析用Pearson檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1血清MK、PF4以及MUC1含量

乳腺癌患者的血清MK、PF4以及MUC1含量明顯高于健康對照組（P<0.05），經(jīng)LSD兩兩比較發(fā)現(xiàn)中晚期浸潤性癌組患者的血清MK、PF4以及MUC1含量高于早期浸潤性癌及非浸潤性癌患者（P< 0.05）。見表1。

表1　各組研究對象的血清MK、PF4以及MUC1含量比較

表1　各組研究對象的血清MK、PF4以及MUC1含量比較

組別MK/（pg/ml）PF4/（ng/ml）MUC1/（u/ml）非浸潤性癌組（n=32）267.39±21.67 0.25±0.0324.65±2.18早期浸潤性癌組（n=50）403.27±37.88 0.31±0.0235.71±3.25中晚期浸潤性癌組（n=96）672.55±58.62 0.38±0.2945.38±4.92健康對照組209.73±24.96 0.21±0.0217.95±2.17 F值9.3426.2857.481 P值0.0120.0190.015

2.2CA153、VEGF、25-OH-D及D-Dimer水平

乳腺癌患者的血清CA153、VEGF及D-Dimer水平明顯高于健康對照組，25-OH-D水平低于健康對照組（P<0.05），經(jīng)LSD兩兩比較發(fā)現(xiàn)中晚期浸潤性癌組患者的血清CA153、VEGF及D-Dimer水平高于早期浸潤性癌及非浸潤性癌患者，25-OH-D水平低于早期浸潤性癌及非浸潤性癌患者（P<0.05）。見表2。

2.3CEA mRNA、Survivin mRNA、MMP-2 mRNA及TIMP-2 mRNA表達(dá)

乳腺癌患者的血清CEA mRNA、SurvivinmRNA、MMP-2 mRNA及TIMP-2 mRNA水平明顯高于健康對照組（P<0.05），經(jīng)LSD兩兩比較發(fā)現(xiàn)中晚期浸潤癌組患者的血清CEA mRNA、SurvivinmRNA、MMP-2 mRNA及TIMP-2 mRNA水平高于早期浸潤性癌及非浸潤性癌患者（P<0.05）。見表3。

表2　各組研究對象的血清CA153、VEGF、25-OH-D及D-Dimer水平比較（±s）

表2　各組研究對象的血清CA153、VEGF、25-OH-D及D-Dimer水平比較（±s）

組別CA153/（u/ml）VEGF/（pg/ml）25-OH-D/（nmol/L）D-Dimer/（mg/ml）非浸潤性癌組（n=32）24.89±2.36152.93±11.724.72±0.38196.23±14.52早期浸潤性癌組（n=50）30.61±2.86251.48±19.633.56±0.39261.06±20.55中晚期浸潤性癌組（n=96）54.28±4.77382.71±29.552.71±0.23378.55±29.63健康對照組12.37±0.1998.23±6.715.93±0.49123.62±10.87 F值7.93711.2736.3819.279 P值0.0150.0110.0190.013

表3　各組研究對象的血清CEA mRNA等水平比較（±s）

表3　各組研究對象的血清CEA mRNA等水平比較（±s）

組別CEA mRNA非浸潤性癌組（n=32）9.75±0.83早期浸潤性癌組（n=50）13.61±1.73中晚期浸潤性癌組（n=96）20.45±2.11健康對照組7.13±0.69 F值9.341 P值0.014 SurvivinmRNAMMP-2mRNATIMP-2mRNA 4.76±0.398.43±0.76156.28±12.71 5.88±0.4519.25±0.17190.33±17.52 7.93±0.6830.82±3.14218.62±19.37 3.12±0.293.27±0.39101.72±9.55 6.3849.83212.047 0.0190.0070.002

2.4相關(guān)關(guān)系

采用一元線性回歸法分析血清MK、PF4以及MUC1含量與乳腺癌惡性程度指標(biāo)值之間存在的相關(guān)關(guān)系。結(jié)果顯示，MK、PF4以及MUC1含量與CA153、VEGF、D-Dimer、CEA mRNA、Survivin mRNA、MMP-2 mRNA及TIMP-2 mRNA水平呈正相關(guān)，與25-OHD水平呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）。

3 討論

乳腺癌是女性高發(fā)惡性腫瘤性疾病，檢測血清腫瘤標(biāo)志物是判斷疾病預(yù)后的良好方式，具有無創(chuàng)便捷等特點(diǎn)。中期因子（MK）在多種人類惡性腫瘤組織中均呈過度表達(dá)，已經(jīng)有研究證實(shí)MK在乳腺組織中呈高表達(dá)且具有高度特異性。目前國內(nèi)對于MK的研究多側(cè)重于其在腫瘤組織中的表達(dá)，忽略了其血清學(xué)檢測[3]。血小板因子4（PF4）是內(nèi)源性血管新生抑制物，屬于血小板特異性蛋白，可以抑制VEGF功能而發(fā)揮作用。黏蛋白1（MUC1）是分布于機(jī)體正常黏膜表面的高分子量糖蛋白，分子由肽核心及糖鏈組成，對正常上皮起潤滑和保護(hù)作用，還有介導(dǎo)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、免疫活化及抑制作用[4]。在乳腺腫瘤組織中MUC1可出現(xiàn)量與質(zhì)的改變，目前認(rèn)為MUC1有望成為新型腫瘤標(biāo)志物用于乳腺癌的早期診斷及預(yù)后判斷。本次研究中首先檢測了各組患者血清中MK、PF4、MUC1的含量情況，結(jié)果顯示MK、PF4、MUC1在乳腺癌患者的血清中均呈高表達(dá)，且隨著腫瘤浸潤程度加重其水平上升。MK、PF4、MUC1作為臨床新發(fā)現(xiàn)的腫瘤組織特異性表達(dá)分子，在患者血清中也有顯著的異常表達(dá)，使其可以成為觀察患者病情進(jìn)展、指導(dǎo)臨床治療及判斷預(yù)后的有效指標(biāo)。

糖類抗原153（CA153）最先發(fā)現(xiàn)于乳腺癌細(xì)胞中，是乳腺細(xì)胞上皮表面糖蛋白的變異體，當(dāng)細(xì)胞發(fā)生癌變時(shí)可引起細(xì)胞表面糖類的變化，由癌細(xì)胞向血循環(huán)中釋放，是臨床乳腺癌篩查的有效指標(biāo)。血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（VEGF）是目前已知的作用最強(qiáng)的促血管生成因子之一，許多腫瘤細(xì)胞均可分泌VEGF并促進(jìn)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移[5]。VEGF已經(jīng)成為判斷腫瘤侵襲力的常用指標(biāo)，VEGF表達(dá)量高的患者多將早期發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及預(yù)后不佳。25-羥基維生素D（25-OH-D）可以通過抑制腫瘤細(xì)胞周期進(jìn)展、誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡、下調(diào)c-myc、c-fos等前癌基因提升機(jī)體的抗腫瘤能力。隨著細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度上升，Bax/Bcl-2比值增大，可以進(jìn)一步引起不依賴Caspase-3途徑的細(xì)胞凋亡[6]。25-OH-D是檢測乳腺癌惡性程度的又一敏感指標(biāo)，其水平過低是乳腺癌發(fā)病的潛在促發(fā)因素。D-二聚體（D-Dimer）是交聯(lián)蛋白的特異性產(chǎn)物，其水平增高反映機(jī)體繼發(fā)性纖溶增強(qiáng)。最新研究表明血漿D-Dimer水平可以作為預(yù)測腫瘤發(fā)生血栓的獨(dú)立因素，乳腺癌患者尤其是晚期患者常伴有凝血功能異常。早期檢測乳腺癌患者的D-Dimer水平可以作為判斷預(yù)后及術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的指標(biāo)之一。本次研究對上述指標(biāo)的血清水平均進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示，乳腺癌患者的血清CA153、VEGF及D-Dimer水平呈高表達(dá)，25-OH-D水平較低，且隨著乳腺癌浸潤程度加深這種變化趨勢更為明顯。這一變化與各個(gè)分子在乳腺組織細(xì)胞癌變過程中的演變過程一致，進(jìn)一步提示CA153、VEGF、25-OH-D及D-Dimer在判斷乳腺癌病情程度及預(yù)后方面的有效性及實(shí)用性。

CEA屬于上皮組織特異性標(biāo)志基因，通常作為消化道腫瘤的標(biāo)志物。目前研究顯示，CEA高表達(dá)于乳腺癌組織中，正常血液、骨髓、淋巴結(jié)等組織中則不表達(dá)，故CEAmRNA檢測可以作為判斷乳腺癌轉(zhuǎn)移的方式之一。MMP-2屬于基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）家族成員，可以降解基底膜和基質(zhì)、突破基質(zhì)屏障并促進(jìn)腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移，主要表達(dá)于乳腺癌細(xì)胞胞質(zhì)中，在正常組織及良性組織中極少表達(dá)[7]。TIMP-2是MMP-2的特異性抑制物，可以抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移，以1∶1的非共價(jià)鍵形式與活化的MMP-2形成復(fù)合物，有效抑制MMP-2的膠原分解活性及明膠活性。在乳腺癌患者中存在MMPs與TIMPs之間的平衡失調(diào)，有研究顯示乳腺癌患者中TIMP-2與MMP-2表達(dá)均高于正常組織，是由于腫瘤細(xì)胞受到腫瘤刺激后產(chǎn)生更多的TIMP-2，增強(qiáng)機(jī)體抑制原發(fā)性腫瘤生長、局部浸潤轉(zhuǎn)移的作用。Survivin是凋亡抑制蛋白家族的新成員，其具有腫瘤特異性，只表達(dá)于腫瘤及胚胎組織中，且與腫瘤細(xì)胞的分化增殖、浸潤轉(zhuǎn)移等關(guān)系密切[8-9]。有研究測定Survivin在乳腺癌中的表達(dá)時(shí)發(fā)現(xiàn)其表達(dá)陽性率高達(dá)90.2%，在緊鄰正常組織中僅為23%，故Survivin成為診斷乳腺癌的有效、獨(dú)立的標(biāo)志物。本次研究檢測上述腫瘤標(biāo)志物的血清表達(dá)情況，結(jié)果顯示，乳腺癌患者的血清中CEA mRNA、Survivin mRNA、MMP-2 mRNA及TIMP-2 mRNA均呈高表達(dá)，且隨著腫瘤浸潤程度增加其表達(dá)量上升，進(jìn)一步說明其與腫瘤進(jìn)展變化的緊密關(guān)系[10]。

MK、PF4以及MUC1是乳腺癌檢測的新指標(biāo)，CA153、VEGF、25-OH-D、D-Dimer、CEA mRNA、Survivin mRNA、MMP-2 mRNA及TIMP-2 mRNA是判斷乳腺癌進(jìn)展程度、預(yù)后等的傳統(tǒng)指標(biāo)。MK、 PF4以及MUC1具有檢測方便、可重復(fù)測定等優(yōu)勢，關(guān)于其與傳統(tǒng)乳腺癌惡性指標(biāo)間的相關(guān)性，本次研究做進(jìn)一步分析，結(jié)果顯示，MK、PF4、MUC1指標(biāo)水平與CA153、VEGF、25-OH-D、D-Dimer、CEA mRNA、Survivin mRNA、MMP-2 mRNA及TIMP-2 mRNA等均存在直接的相關(guān)關(guān)系，提示可以通過測定MK、PF4、MUC1水平全面準(zhǔn)確地評價(jià)乳腺癌患者的腫瘤惡性程度，判斷臨床治療的有效性，對治療結(jié)局做合理地預(yù)估，減少乳腺癌患者的血液指標(biāo)檢測項(xiàng)目但是并不降低檢測準(zhǔn)確性及有效性。

綜上所述，得出以下結(jié)論：乳腺癌患者的血清MK、PF4以及MUC1含量可以有效準(zhǔn)確地評估患者的病情嚴(yán)重程度，并可以作為遠(yuǎn)期評價(jià)臨床治療效果及治療預(yù)后的指標(biāo)之一，具有現(xiàn)實(shí)應(yīng)用價(jià)值。

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（張蕾編輯）

Value of serum MK，PF4 and MUC1 content of breast cancer patients in assessment of severity of disease

Li-juan Zhao，Wei-yun Xu，Xiao-hong Zhang，Zhen Zhang，Jing Zhang
（Department of Breast Surgery，Central Hospital of Mianyang，Mianyang，Sichuan 621000，China）

Objective To analyze the value of serum MK，PF4 and MUC1 content of breast cancer patients in assessment of disease condition.Methods A total of 178 breast cancer patients treated in our hospital between November 2012 and January 2015 were chosen as the subjects of observation group.According to differentpathological types，the breast cancer patients were divided into early-invasive cancer group（n=50），non-invasive cancer group（n=32）and advanced-invasive cancer group（n=96）.At the same time 108 cases of healthy women undergoing medical examination in our hospital were chosen as control group.The differences in serum MK，PF4 and MUC1 content，CA153，VEGF，25-OH-D and D-Dimer levels，and CEA mRNA，survivin mRNA，MMP-2 mRNA，TIMP-2 mRNA expressions were compared among the groups.The correlations of serum MK，PF4 and MUC1 content with malignant breast cancer indexes were further analyzed.Results Serum MK，PF4，MUC1，CA153，VEGF，D-Dimer，CEA mRNA，survivin mRNA，MMP-2 mRNA and TIMP-2 mRNA levels of the breast cancer patients were significantly higher than those of the healthy control group，while their 25-OH-D level was lower than that of the healthy control group（P＜0.05）.Serum MK，PF4，MUC1，CA153，VEGF，D-Dimer，CEA mRNA，survivin mRNA，MMP-2 mRNA and TIMP-2 mRNA levels were significantly higher while 25-OH-D level was significantly lower in theadvanced-invasive group than in the early-invasive carcer and non-invasive cancer groups（P＜0.05）.Conclusions Serum MK，PF4 and MUC1 content of breast cancer patients can be effectively and accurately assess the severity of the disease，and can be used as long-term evaluation indicators of therapeutic effect and prognosis.

breast cancer；assessment of disease condition；serum index

R 737.9

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.18.012

1005-8982（2016）18-0060-04

2016-02-22