郭慧娟　王成龍

[中圖分類號(hào)]S858.28 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]B [文章編號(hào)]1003—1650 Q016）03—0248—01

豬偽狂犬?。≒seudorabies，PR）是由豬偽狂犬病病毒（Pseudotabies virus，PRV）引起的一種高度接觸性傳染病。豬是本病的主要宿主和傳染源，健康豬與病豬、帶毒豬直接接觸可感染本病。通常引起妊娠母豬流產(chǎn)、木乃伊胎、死胎和產(chǎn)弱仔；初生仔豬出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，感染率和死亡率可達(dá)100%，成年豬感染后多耐過(guò)，不發(fā)病呈隱性感染，造成長(zhǎng)期帶毒排毒，成為最危險(xiǎn)的傳染源，嚴(yán)重影響種豬場(chǎng)生產(chǎn)。本病廣泛分布于世界各地，已有50多個(gè)國(guó)家和地區(qū)報(bào)道該病的流行，給養(yǎng)豬業(yè)構(gòu)成很大威脅。我國(guó)自1947年首次報(bào)道該病以來(lái)，隨著養(yǎng)豬業(yè)集約化規(guī)模化的發(fā)展，已有20多個(gè)省市報(bào)道發(fā)生了該病，并在許多種豬場(chǎng)呈暴發(fā)流行趨勢(shì)，給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。偽狂犬病病毒屬于皰疹病毒科α-皰疹病毒亞科豬疤疹病毒Ⅰ型（Suid Herpesvirus Ⅰ，SHV-Ⅰ），病毒粒子呈圓形或橢圓形外觀，核衣殼含病毒基因組DNA和核衣殼蛋白，核衣殼外被一層非晶體狀蛋白樣結(jié)構(gòu)（tegument）所包裹，病毒粒子最外層是病毒囊膜（envobpe），它是由宿主細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)衍生而來(lái)的脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu)，囊膜上鑲嵌有病毒編碼的囊膜蛋白，大多是糖蛋白。α-皰疹病毒中至今已鑒定的糖蛋白有g(shù)B、gC、gD、gE、gG、gH、gI、gK、gL、gM和gN，除gG外其余都是病毒粒子結(jié)構(gòu)成分。目前已對(duì)PRV的多種糖蛋白進(jìn)行了結(jié)構(gòu)和功能的研究，糖蛋白gB是豬偽狂犬病病毒的一種主要糖蛋白，能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體，是PR V免疫抗體評(píng)價(jià)的首先蛋白。

1材料和方法

1.1材料

1.1.1儀器酶標(biāo)儀M 550型，購(gòu)自Bio-R ad公司：洗板機(jī)ELx50型，購(gòu)自B io-Tek公司。

1.1.2試劑盒PRV gB-I-E L ISA試劑由河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動(dòng)物免疫學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供，主要成分包括抗原包被E LISA板2塊，抗體稀釋液1瓶，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的養(yǎng)抗豬IgG 1支，底物A液和B液各1瓶，終止液1瓶；愛(ài)德士PRV-gB ELISA試劑盒為美國(guó)美國(guó)ID EXX公司產(chǎn)品。

1.2方法

1.2.1 PRV gB-I-ELISA 操作程序按常規(guī)間接E LISA方法進(jìn)行。結(jié)果判定：按方法說(shuō)明書(shū)中，陰、陽(yáng)性血清效價(jià)的臨界值為0.3，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性和陰性對(duì)照血清和檢測(cè)樣品的0 D450nm吸光值計(jì)算被檢樣品的效價(jià)，血清樣本抗體效價(jià)=（樣品的0 D450nm值-陰性對(duì)照的0 D450nm值）/（陽(yáng)性對(duì)照的0 D450nm值-陰性對(duì)照的0 D450nm值）計(jì)算每一份血清效價(jià)。當(dāng)效價(jià)≥3.0時(shí)判為陽(yáng)性，效價(jià)<0.3時(shí)判為陰性。

2結(jié)果與分析

2.1 PRV感染血清檢測(cè)結(jié)果

PRV感染豬血清檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。檢測(cè)350份PRV感染豬血清，ID EXX PRV-gB EL ISA和PRV gB-I-ELISA檢測(cè)均為陽(yáng)性的血清319頭份，均為陰性的有12頭份，二者檢測(cè)結(jié)果不一致的有19頭份，符合率為94.6%（331/350）。

2.2 PR V免疫血清檢測(cè)結(jié)果

PRV免疫豬血清檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2。共檢測(cè)420頭份，其中，ID EXX PRV-gB E LISA和PRV gB-I-ELISA檢測(cè)均為陽(yáng)性的血清362頭份，均為陰性的有23頭份，二者檢測(cè)結(jié)果不一致的有35頭份，符合率為91.6%（385/420）。

根據(jù)兩種不同背景的豬血清，用兩種ELISA方法檢測(cè)，總符合率為92.6%（792/855），說(shuō)明兩種方法檢測(cè)結(jié)果基本一致，所建立的PRV gB-I-ELISA方法具有較好的特異性和敏感性，可以用于評(píng)價(jià)豬PRV gB抗體。

3討論

疫苗免疫我國(guó)控制PRV的主要措施，因此檢測(cè)血清抗體效價(jià)，評(píng)估免疫抗體水平至關(guān)重要。常用的PRV免疫抗體檢測(cè)方法主要有中和實(shí)驗(yàn)（SNT）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、乳膠凝集試驗(yàn)（LAT）等，其中，ELISA被列為國(guó)際貿(mào)易種PRV抗體檢測(cè)的指定方法。本研究團(tuán)隊(duì)利用PRV gB蛋白抗原富集區(qū)為診斷抗原，成功建立了PRV gB抗體間接ELISA方法（gB-I-ELISA），為進(jìn)一步評(píng)價(jià)該ELISA方法的性能，本研究通過(guò)檢測(cè)PRV感染血清、免疫血清和臨床血清樣品，通過(guò)與商品化的愛(ài)德士PRV gB抗體ELISA試劑盒對(duì)比，所研制EL ISA方法的特異性和敏感性，二者的符合率為92.6%，可以用于評(píng)價(jià)豬PRY gB抗體，為PRY免疫抗體監(jiān)測(cè)、母源抗體評(píng)估以及免疫程序制定提供參考依據(jù)。