齊云峰 孫添添 韓艷雪

[摘要]白介素-6，全名白細(xì)胞介素-6，是一種多功能細(xì)胞因子，能誘導(dǎo)細(xì)胞增殖分化。胞內(nèi)受體和蛋白磷酸化調(diào)節(jié)在IL-6信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起重大作用。在本研究中采用系統(tǒng)生物學(xué)建模工具COPASI，進(jìn)行IL-6的建模信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)模擬分析。通過擾動(dòng)pp2初始濃度，發(fā)現(xiàn)pp2對(duì)IL-6信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)有抑制作用呈負(fù)相關(guān)。通過擾動(dòng)gp130初始濃度，發(fā)現(xiàn)受體gp130與IL-6的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)弱正相關(guān)。通過協(xié)同擾動(dòng)受體gp130與pp2初始濃度，發(fā)現(xiàn)對(duì)于IL-6的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)來說最適宜的受體濃度為模型初始濃度，而pp2濃度升高抑制IL-6的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。

[關(guān)鍵詞]白介素-6 數(shù)學(xué)模擬 糖蛋白130 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)

[中圖分類號(hào)]Q94 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A [文章編號(hào)]1009-5349（2016）16-0154-02

隨著系統(tǒng)生物學(xué)不斷發(fā)展，系統(tǒng)生物學(xué)研究思想得到了學(xué)術(shù)界的廣泛認(rèn)同，系統(tǒng)生物學(xué)將成為21世紀(jì)醫(yī)學(xué)和生物學(xué)的核心驅(qū)動(dòng)力。[1-2]系統(tǒng)生物學(xué)重要性主要有兩個(gè)方面：（1）基因組學(xué)與蛋白質(zhì)組學(xué)中的高通量方法為系統(tǒng)生物學(xué)的發(fā)展提供了大量的數(shù)據(jù)，系統(tǒng)生物學(xué)能整合分析這些數(shù)據(jù)。（2）計(jì)算生物學(xué)包含數(shù)據(jù)處理、模型構(gòu)建和理論分析，是系統(tǒng)生物學(xué)發(fā)展過程中的一個(gè)重要的工具。[3]

IL-6是由184個(gè)氨基酸組成，有2條糖蛋白鏈。1條為糖蛋白80，另1條為gp130。[4]gp80只能以低親合性與IL-6結(jié)合，所形成的復(fù)合物迅速與高親和性的gp130結(jié)合，通過此鏈傳遞信息。蛋白磷酸酶1和蛋白磷酸酶2作為JAK/STAT通路內(nèi)兩種磷酸酶，分別在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中催化STAT1*和STAT3*的去磷酸化作用。蛋白磷酸酶1和蛋白磷酸酶2的蛋白的總量是固定不變的，并且只有蛋白單體才能與新形成的STAT*結(jié)合以完成去磷酸化作用。

IL-6可以作為在免疫應(yīng)答中產(chǎn)生重要介質(zhì)的一種機(jī)體，具有多種生物學(xué)活性。一方面它具有能調(diào)節(jié)功能，其中包括細(xì)胞增殖、免疫防御機(jī)制及血細(xì)胞生成等，[5]另一方面它還能通過干預(yù)細(xì)胞的黏附性和活動(dòng)力、血栓形成、及腫瘤細(xì)胞的增殖，而影響腫瘤的進(jìn)展。隨著系統(tǒng)生物學(xué)的發(fā)展，IL-6的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用更為廣泛，在許多疾病中發(fā)現(xiàn)其重要作用。例如心血管疾病[6]、自身免疫疾病、腫瘤[7-8]等。此外，隨著研究者對(duì)IL-6的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究深入，構(gòu)建了一系列的IL-6信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)模型。在2014年，Qi等人應(yīng)用數(shù)學(xué)建模方法對(duì)干擾素-γ和IL-6的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)交互機(jī)制進(jìn)行研究。在IL-6信號(hào)單獨(dú)刺激下，在同一時(shí)間STAT1*最大濃度值是最大濃度值的三分之一，STAT3相比于STAT1有著更強(qiáng)的激活。[9]

一、材料與方法

本章將對(duì)數(shù)學(xué)模擬實(shí)驗(yàn)所利用的建模工具及統(tǒng)計(jì)方法所用工具進(jìn)行介紹。

（一）建模工具COPASI及IL-6數(shù)學(xué)模型介紹

COPASI是用來構(gòu)建和分析系統(tǒng)生物模型的工具。本文操作流程是打開軟件，它運(yùn)行時(shí)界面有兩大模塊左側(cè)模塊顯示軟件的各個(gè)功能層次，右側(cè)模塊顯示的是各反應(yīng)公式和參數(shù)的設(shè)定。雙擊Biochemical后緊接著雙擊species，根據(jù)研究需要分別或協(xié)同改變右側(cè)gp130和gp80的初始濃度，之后雙擊tasks并通過Tasks模塊下的Time course進(jìn)行模型構(gòu)建，最后單擊run并且根據(jù)結(jié)果總結(jié)出分別或協(xié)同改變gp130和gp80的初始濃度對(duì)IL-6信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響。

（二）統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

SPSS“統(tǒng)計(jì)產(chǎn)品與服務(wù)解決方案”軟件，它的統(tǒng)計(jì)分析過程包括描述性統(tǒng)計(jì)、均值比較、一般線性模型、相關(guān)分析、回歸分析、生存分析等等。[10]本文中使用的是SPSS軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行皮爾遜相關(guān)性或多元線性回歸分析，并計(jì)算其統(tǒng)計(jì)顯著性水平。

二、結(jié)果與分析

本文以0.1nM的IL-6作為模型輸入，在不同gp130和PP2的初始濃度下進(jìn)行12小時(shí)的IL-6信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)數(shù)學(xué)模擬（在數(shù)學(xué)模擬模型中PP2和gp130初始濃度分別是60nM和0.8nM，我們分別改變gp130和PP2的初始濃度為其0.25、0.5、1、2和4倍值）。此外，應(yīng)用SPSS工具進(jìn)行相關(guān)性分析和多元回歸分析，闡釋gp130和PP2初始濃度的變化對(duì)IL-6信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程的影響。

（一）擾動(dòng)PP2對(duì)IL-6信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)影響

擾動(dòng)PP2的初始濃度探究擾動(dòng)PP2對(duì)IL-6信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)影響。結(jié)果顯示，STAT3*與PP2呈極顯著負(fù)相關(guān)，STAT1*與PP2極顯著負(fù)相關(guān)，PP2對(duì)IL-6信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)信號(hào)有抑制作用呈負(fù)相關(guān)。

如圖1A所示，在IL-6信號(hào)刺激下，STAT3*在0.6小時(shí)達(dá)到最大濃度368nM，隨后濃度不斷下降，最終在10小時(shí)后達(dá)到其穩(wěn)定濃度47nM。STAT1*在0.6小時(shí)達(dá)到最大濃度109nM，并且在9小時(shí)后逐漸達(dá)到穩(wěn)定濃度10nM。如圖1B所示，STAT3*在0.6小時(shí)達(dá)到最大濃度350nM，在11小時(shí)后達(dá)到穩(wěn)定濃度37nM。STAT1*在0.5小時(shí)達(dá)到最大濃度102nM，并快速降低，在8小時(shí)后達(dá)到穩(wěn)定濃度9nM。如圖1C所示，STAT3*在0.5小時(shí)達(dá)到最大濃度320nM，在11小時(shí)后達(dá)到穩(wěn)定濃度30nM。STAT1*在0.5小時(shí)達(dá)到最大濃度94nM，并快速降低，在6小時(shí)后達(dá)到穩(wěn)定濃度7nM。

如圖1D所示，STAT3*在0.5小時(shí)達(dá)到最大濃度285nM，在8小時(shí)后達(dá)到穩(wěn)定濃度32nM。STAT1*在0.5小時(shí)達(dá)到最大濃度82nM，并快速降低，在6.5小時(shí)后達(dá)到穩(wěn)定濃度7nM。如圖1E所示，STAT3*在0.5小時(shí)達(dá)到其最大濃度250nM，在8小時(shí)后達(dá)到其穩(wěn)定濃度34nM。STAT1*在0.5小時(shí)達(dá)到最大濃度70nM并快速降低，在6.5小時(shí)后達(dá)到穩(wěn)定濃度8nM。分別以STAT3*與STAT1*在不同濃度的PP2下所能達(dá)到的最大濃度值做柱形圖，如圖1F所示在磷酸酶PP2的初始濃度逐漸增大的情況下，STAT3*與STAT1*的最大濃度在不斷地變小。STAT3*與PP2濃度極顯著負(fù)相關(guān)（相關(guān)系數(shù)為-0.962，P值為0.009）。STAT1*與PP2濃度極顯著負(fù)相關(guān)（相關(guān)系數(shù)為-0.967，P值為0.007）。本實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了已有的實(shí)驗(yàn)結(jié)果在IL-6的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)模擬分析中STAT3相比于STAT1有著更強(qiáng)的激活。由于IL-6對(duì)STAT3有偏好性，下文的研究中我們皆以STAT3*的濃度變化為代表來進(jìn)行IL-6的信號(hào)響應(yīng)研究。

圖1不同PP2初始濃度下IL-6信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)模式的變化

（A-E）中分別表示在不同PP2初始濃度下STAT*1和STAT*3的濃度時(shí)序性變化模式。F表示在不同PP2的濃度下STAT*1和STAT*3的最高濃度水平。

（二）協(xié)同擾動(dòng)受體gp130與PP2對(duì)IL-6信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)影響

如表1所示，可知無論pp2如何調(diào)整，STAT3*的最大濃度都為整個(gè)表中最大數(shù)值。當(dāng)pp2濃度升高STAT3*的最大濃度不斷減小。根據(jù)SPSS軟件的標(biāo)準(zhǔn)回歸系數(shù)得出gp130濃度與IL-6信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)之間不顯著正相關(guān)。蛋白pp2濃度與IL-6的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)極顯著負(fù)相關(guān)。對(duì)于IL-6的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)來說最適宜的受體gp130濃度為模型初始濃度，pp2與IL-6的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)呈極顯著負(fù)相關(guān)。

三、結(jié)論

本文獲得了一系列重要結(jié)論。首先，單獨(dú)擾動(dòng)pp2的初始濃度發(fā)現(xiàn)增加pp2的初始濃度能夠顯著抑制IL-6信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的強(qiáng)度，與STAT1*和STAT3*的最大濃度呈顯著負(fù)相關(guān)。其次，單獨(dú)擾動(dòng)受體gp130的初始濃度發(fā)現(xiàn)受體gp130與IL-6的轉(zhuǎn)導(dǎo)呈一定水平正相關(guān)。但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。最后，同時(shí)擾動(dòng)受體gp130與pp2初始濃度的模擬結(jié)果顯示，gp130與IL-6信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)不顯著正相關(guān)，對(duì)于IL-6的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)來說，最適宜的受體濃度為模型初始濃度，無論在何種濃度的gp130下增加pp2的初始濃度能夠顯著抑制白介素-6信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的強(qiáng)度，多元回歸分析同樣證實(shí)了以上結(jié)果。這些結(jié)果的獲得更進(jìn)一步加深了我們對(duì)IL-6的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)模擬分析機(jī)制的了解，可能為治療糖尿病、心肌肥大和男性肝癌等疾病提供理論支持。

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責(zé)任編輯：楊柳