梁志剛

摘要 利用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀，建立快速準(zhǔn)確測(cè)定蘋果中赤霉素（GA3）殘留量的方法：用乙腈作為提取試劑，振蕩提取樣品中的赤霉素，經(jīng)QuEChERS試劑包凈化，用高效反相液相色譜柱分離，串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)定量。結(jié)果表明：該方法線性范圍為0.008～0.200 mg/kg，回收率大于80%。

關(guān)鍵詞 赤霉素；QuEChERS；高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜

中圖分類號(hào) S611 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739（2016）08-0265-02

生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑是一類能對(duì)植物生長(zhǎng)起調(diào)節(jié)作用的活性物質(zhì)，其中赤霉素（GA3）是較常見的一種。赤霉素（GA3）屬于植物內(nèi)源激素，在植物體內(nèi)本來就有，它在植物生長(zhǎng)與發(fā)育的各個(gè)階段中都發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用，是一種廣譜性的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑[1]。赤霉素具有促進(jìn)植物細(xì)胞伸長(zhǎng)、誘導(dǎo)植物細(xì)胞的分裂與分化的作用，對(duì)瓜果類具有顯著的增產(chǎn)效果[2]，因而在農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)中有廣泛應(yīng)用。赤霉素可能干擾人體正常的內(nèi)分泌系統(tǒng)，長(zhǎng)期食用會(huì)在人體中蓄積，造成器官的慢性中毒，并可能引起癌變，嚴(yán)重危及消費(fèi)者的身心健康[1]。國內(nèi)外都已經(jīng)對(duì)蔬菜水果中的赤霉素殘留量做了一定限制。為了提高產(chǎn)量、增加收入，部分生產(chǎn)者濫用赤霉素，會(huì)導(dǎo)致農(nóng)產(chǎn)品中赤霉素殘留超標(biāo)，危害群眾身體健康，存在極大的安全隱患。

蘋果作為我國最常見的水果之一，其食用安全備受關(guān)注。高效液相色譜法[3]和傳統(tǒng)的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)赤霉素殘留量，過程復(fù)雜，耗時(shí)長(zhǎng)。本試驗(yàn)以蘋果為樣品代表，研究了利用QuEChERS離散型固相萃取包凈化，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定水果中赤霉素殘留的方法，過程簡(jiǎn)單快速，并優(yōu)化了前處理方法和儀器條件。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)儀器。Agilent 1290-6420 高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀；Milli-Q Advantage A10超純水儀；Sartorius 電子天平；Hitachi CR21N 高速冷凍離心機(jī)；Caliper水浴氮吹儀；VWR漩渦混合器。

1.1.2 試驗(yàn)材料。Merck 色譜純乙腈；Merck色譜純甲醇；色譜純甲酸；分析純氯化鈉（廣州試劑）；德國Dr.Ehrenstorfer的赤霉素標(biāo)準(zhǔn)品（純度≥99%）；安捷倫QuEChERS提取包（含離心管，貨號(hào)5982-5058CH）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制。準(zhǔn)確稱量赤霉素標(biāo)準(zhǔn)品0.1 000 g，用色譜純甲醇溶解，用容量瓶定容至100 mL，配制成1 000 μg/mL 的赤霉素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，置于-20 ℃的冰箱保存。本試驗(yàn)所使用的赤霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液均由儲(chǔ)備液稀釋而成。

1.2.2 樣品前處理。取蘋果樣品經(jīng)食物調(diào)理機(jī)打碎至勻漿狀，用塑料有蓋樣品瓶保存。稱取蘋果樣品10.0 g于50 mL的塑料離心管，加入氯化鈉3～5 g，再加入乙腈10 mL，蓋上離心管蓋子，用振蕩機(jī)振蕩30 min，然后在8 000 r/min條件下離心3 min，吸取5 mL上清液到QuEChERS試劑包的離心管（內(nèi)含PSA 4 g和無水硫酸鎂1.2 g）中，蓋上蓋子，用漩渦混合器混合1 min，8 000 r/min離心2 min，取上清液過0.2 μm濾膜，待測(cè)。

1.2.3 色譜條件。色譜柱：Agilent ZORBAX ECLIPSE PLUS C18柱（2.1×100 mm，1.8 μm），柱溫40 ℃；流動(dòng)相：A是甲醇，B是0.1%甲酸水（V/V）；流動(dòng)相變化梯度如表1所示；流速0.3 mL/min； 進(jìn)樣體積2.0 μL。

1.2.4 質(zhì)譜條件。離子源使用電噴霧離子源（ESI），干燥氣溫度為350 ℃，流速為11 mL/min，霧化器壓力為310.275 kPa，采用負(fù)離子采集模式，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）方法測(cè)定。赤霉素母離子，定性離子定量離子等質(zhì)譜采集參數(shù)具體如表2所示。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取液的選取

由于赤霉素難溶于水，因此本試驗(yàn)考慮使用甲醇以及乙腈作為提取劑。試驗(yàn)結(jié)果表明，使用甲醇作為提取劑時(shí)，赤霉素的回收率不理想。而使用乙腈作為提取劑時(shí)，回收率均大于80%，優(yōu)于甲醇提取的結(jié)果，因此試驗(yàn)最終選擇乙腈作為樣品提取試劑。

2.2 流動(dòng)相選擇

試驗(yàn)初期，使用甲醇和純水作為流動(dòng)相，結(jié)果響應(yīng)偏低，靈敏度不高，并且重復(fù)性差，這可能是由于赤霉素在水溶液中不穩(wěn)定容易分解有關(guān)。把流動(dòng)相中的純水換成0.1%甲酸水（V/V），情況有所好轉(zhuǎn)，響應(yīng)增高了，也更穩(wěn)定了，這是因?yàn)槌嗝顾卦谒嵝詶l件下穩(wěn)定，并且流動(dòng)相中的酸能促進(jìn)增強(qiáng)負(fù)離子模式下的赤霉素分子離子化的結(jié)果。

2.3 色譜條件優(yōu)化

本試驗(yàn)嘗試使用Agilent ZORBAX ECLIPSE PLUS C18柱和Agilent ZORBAX SB-C18柱對(duì)樣品進(jìn)行分離，結(jié)果顯示，在相同的流動(dòng)相條件下，2種柱子的赤霉素都能得到分離，而使用Agilent ZORBAX PLUS C18分離得到的赤霉素譜圖中，保留時(shí)間稍長(zhǎng)，峰高也更高（圖1）。因此試驗(yàn)選擇Agilent ZORBAX ECLIPSE PLUS C18柱作為試驗(yàn)色譜柱。

2.4 質(zhì)譜參數(shù)的優(yōu)化

在電噴霧離子源負(fù)離子模式下，用0.2 μg/mL赤霉素標(biāo)準(zhǔn)液直接進(jìn)樣，對(duì)母離子進(jìn)行全掃分析，得到最高的離子峰為345.2 m/z，確定為母離子（圖2）。

2.5 方法檢出限和線性范圍

以0.008、0.020、0.040、0.100、0.200 μg/mL赤霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液繪制曲線，回歸線性方程為Y=53 527.5X + 23.9，R2=0.999，曲線在0.008～0.200 μg/mL范圍內(nèi)線性良好，對(duì)應(yīng)的樣品檢測(cè)定量范圍是0.008～0.20 0mg/kg。用3倍噪音值計(jì)算可得方法最低檢出達(dá)到0.004 μg/mL。

2.6 方法的回收率和精密度

以同一空白樣品作為基質(zhì)，分別以0.02、0.10、0.20 mg/kg的濃度進(jìn)行6個(gè)平行樣的添加回收試驗(yàn)，結(jié)果如表3所示，3個(gè)濃度的添加回收率均在80%以上，RSD均小于4%，能滿足對(duì)樣品中赤霉素殘留量的檢測(cè)要求。

3 結(jié)論

本試驗(yàn)以QuEChERS凈化包為基礎(chǔ)，建立了一種蘋果中赤霉素殘留量的快速準(zhǔn)確的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法。方法以乙腈作為提取液，QuEChERS凈化包作為樣品凈化手段，甲醇和0.1%甲酸水作為流動(dòng)相，高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測(cè)，具有操作簡(jiǎn)單，耗時(shí)較短的優(yōu)點(diǎn)，適合樣品中赤霉素殘留量的快速定量檢測(cè)[4]。

4 參考文獻(xiàn)

[1] 劉艷琴，王浩，楊紅梅，等. 高效液相色譜-串聯(lián)四極桿質(zhì)譜聯(lián)用測(cè)定水果和蔬菜中赤霉素殘量[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2009（16）：330-331.

[2] 張國華，張艷潔，叢日晨，等，古潤(rùn)澤赤霉素作用機(jī)制研究進(jìn)展[J].西北植物學(xué)報(bào)， 2009， 29（2）：412-419.

[3] 陳小鵬，王秀峰，孫小鐳，等.高效液相色譜測(cè)定黃瓜瓜條中赤霉素和脫落酸含量[J].山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2005（1）：74-76.

[4] 蓋喜樂，崔新儀.應(yīng)用QuEchERS方法測(cè)定蘋果中有機(jī)磷[J].天津農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015（8）：105-108.