梁寶愛(ài)　楊凱

1（國(guó)家農(nóng)副加工產(chǎn)品及白酒質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心，山西太原030012）

2（山西省食品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，山西太原030012）

糕點(diǎn)中富馬酸二甲酯檢測(cè)方法的研究

梁寶愛(ài)1*楊凱2

1（國(guó)家農(nóng)副加工產(chǎn)品及白酒質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心，山西太原030012）

2（山西省食品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，山西太原030012）

富馬酸二甲酯（Dimethyl fumarate，DMF），又稱(chēng)反丁烯二酸二甲酯，為白色片狀或粉末狀結(jié)晶，易升華，易溶于乙酸乙酯、氯仿、丙酮和醇類(lèi)。富馬酸二甲酯是上世紀(jì)80年代開(kāi)發(fā)的一種防霉劑，可抑制多種霉菌且具有抗真菌能力，曾被廣泛應(yīng)用于魚(yú)、肉、蔬菜等食品中。后經(jīng)試驗(yàn)表明，富馬酸二甲酯易水解生成甲醇，對(duì)人體的眼睛、皮膚有刺激作用，長(zhǎng)期接觸會(huì)發(fā)生皮膚過(guò)敏甚至潰爛，經(jīng)食道吸入可能會(huì)對(duì)人體腸道、內(nèi)臟產(chǎn)生腐蝕性損害，特別是對(duì)兒童的成長(zhǎng)發(fā)育造成極大傷害。富馬酸二甲酯于2009年被我國(guó)食品整治辦列入《食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)名單（第二批）》，嚴(yán)厲打擊違法添加非食用物質(zhì)。目前文獻(xiàn)報(bào)道中關(guān)于富馬酸二甲酯的常用檢測(cè)方法有氣相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法和高效液相色譜法。為防止不法食品企業(yè)繼續(xù)違法添加非食用物質(zhì)，建立快速、高效、準(zhǔn)確的富馬酸二甲酯檢測(cè)方法對(duì)食品行業(yè)的監(jiān)管和健康發(fā)展有很重要的意義。

1　材料與方法

1.1材料

富馬酸二甲酯，純度99.5%，0.25 g，德國(guó)Dr. Ehrenstorfer GmbH；甲醇，色譜純；乙酸銨，分析純；四丁基溴化銨，分析純。

1.2主要儀器

Agilent1260高效液相色譜儀，配有二極管陣列檢測(cè)器（DAD），美國(guó)Agilent公司；KQ5200DE數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；有機(jī)相濾膜，13 mm×0.22 μm，上海興亞凈化材料廠；微孔濾膜，孔徑0.45 μm，有機(jī)系濾膜。

1.3試驗(yàn)方法

1.3.1標(biāo)準(zhǔn)溶液和試劑溶液的配制

富馬酸二甲酯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱(chēng)取富馬酸二甲酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)0.100 5 g，用甲醇充分溶解，并稀釋定容于100 mL的容量瓶中，配制成濃度為1.00 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，貯存于0℃～4℃冰箱中，使用時(shí)用甲醇稀釋成標(biāo)準(zhǔn)工作液。

標(biāo)準(zhǔn)工作液（10.0 μg/mL）：準(zhǔn)確吸取1.00 mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液至100 mL容量瓶中，用甲醇定容，搖勻，貯存于0℃～4℃冰箱中，該溶液每毫升含富馬酸二甲酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)10.0 μg，有效期14 d。

乙酸銨緩沖溶液（0.02 mol/L，含0.008 mol/L四丁基溴化銨）：稱(chēng)取1.54 g乙酸銨，2.60 g四丁基溴化銨以適量水溶解后，加水至1 000 mL，過(guò)孔徑0.45 μm濾膜。

1.3.2樣品前處理

準(zhǔn)確稱(chēng)取制備均勻的糕點(diǎn)試樣5.0 g（精確至0.01 g）于50 mL具塞比色管中，加入10 mL甲醇，用超聲波萃取20 min后冷卻至室溫，再超聲20 min，冷卻后用甲醇定容至25 mL，混勻，上清液經(jīng)孔徑0.45 μm濾膜過(guò)濾后，進(jìn)樣測(cè)定。

1.3.3色譜條件

色譜柱Eclipse XDB-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；柱溫：30℃；流動(dòng)相：甲醇+乙酸銨溶液（55+45，V/V）；流速：1.0 mL/min；波長(zhǎng)：230 nm；進(jìn)樣量：10 μL。

根據(jù)保留時(shí)間定性，外標(biāo)峰面積法定量。

1.3.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)工作液1.0 mL、2.0 mL、4.0 mL、6.0 mL、10.0 mL至10 mL容量瓶中，分別用甲醇定容至10 mL。富馬酸二甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度分別為1.0 μg/mL、2.0 μg/mL、4.0 μg/mL、6.0 μg/mL、10.0 μg/mL，經(jīng)孔徑0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾后分別注入液相色譜儀中，測(cè)定相應(yīng)的峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)工作液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.5試樣的測(cè)定

將制備好的試樣溶液注入液相色譜儀中，得到峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線確定待測(cè)液中富馬酸二甲酯的含量。

1.3.6結(jié)果計(jì)算

試樣中富馬酸二甲酯含量公式：

式中：X——試樣中富馬酸二甲酯的含量，mg/kg；

c——由標(biāo)準(zhǔn)曲線求出樣液中富馬酸二甲酯的質(zhì)量濃度，μg/mL；

V——樣液最終定容體積，mL；

m——樣品質(zhì)量，單位為克，g；

1 000——換算系數(shù)。

2　結(jié)果與討論

2.1檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

取一定濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液在190 nm～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，結(jié)果顯示在220 nm處富馬酸二甲酯紫外吸收最強(qiáng)，同時(shí)考慮到甲醇在210 nm左右對(duì)紫外的最大吸收，為了減少甲醇的干擾故選擇檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm。

2.2流動(dòng)相及比例的選擇

分別選取乙酸銨和四丁基溴化銨、乙酸鈉和四丁基溴化銨作為緩沖溶液進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果表明，流動(dòng)相對(duì)組分的分離沒(méi)有明顯差異，因乙酸鈉和四丁基溴化銨還需調(diào)節(jié)pH，故選擇操作相對(duì)簡(jiǎn)便的乙酸銨和四丁基溴化銨作為緩沖溶液。

分別對(duì)甲醇-緩沖溶液按不同體積比（55∶45、30∶70）進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)體積比為55∶45時(shí)峰形最好。

2.3樣品前處理的優(yōu)化

分別用氨化甲醇和甲醇作為提取溶劑對(duì)加標(biāo)樣品進(jìn)行前處理，進(jìn)行6次測(cè)定，其回收率甲醇為102.2%，氨化甲醇為89.3%。故選擇甲醇作為樣品提取劑。

2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍

將富馬酸二甲酯儲(chǔ)備液用甲醇稀釋配制成質(zhì)量濃度為1.0 μg/mL、2.0 μg/mL、4.0 μg/mL、6.0 μg/mL、10.0 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在1.3色譜條件下測(cè)定，對(duì)色譜峰面積x和對(duì)應(yīng)的富馬酸二甲酯質(zhì)量濃度y進(jìn)行線性回歸，得線性方程y=22.485 03x-0.326 15（R2=0.999 97）。測(cè)定結(jié)果表明，在1.0 μg/mL～10.0 μg/mL的范圍內(nèi)，峰面積與質(zhì)量濃度呈線性關(guān)系，符合定量要求。富馬酸二甲酯標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示。

圖1　富馬酸二甲酯標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.5加標(biāo)回收試驗(yàn)和精密度試驗(yàn)

選取不同基質(zhì)無(wú)本底值的糕點(diǎn)樣品6批次，進(jìn)行3水平添加回收試驗(yàn)，每個(gè)添加水平取6個(gè)平行樣。同時(shí)與現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)方法NY/T 1723—2009《食品中富馬酸二甲酯的測(cè)定高效液相色譜法》進(jìn)行比較，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　糕點(diǎn)中富馬酸二甲酯的加標(biāo)回收率及相對(duì)偏差

由表1可見(jiàn)，根據(jù)GB/T 27404—2008實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范，本方法的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）均符合要求，其回收率在82.5%～106.8%，準(zhǔn)確度和精密度均滿(mǎn)足富馬酸二甲酯的檢測(cè)要求。而NY/T 1723—2009方法回收率均低于80%，精密度相對(duì)較差，且對(duì)于該標(biāo)準(zhǔn)方法的檢出限加標(biāo)也無(wú)法檢出。2.6方法檢出限

方法的檢出限和定量限為方法靈敏度的指標(biāo)，將標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)稀釋后進(jìn)行不同樣品、空白樣品的加標(biāo)回收，以3倍信號(hào)噪聲比對(duì)應(yīng)的質(zhì)量濃度為檢出限，以10倍信號(hào)噪聲比所對(duì)應(yīng)的質(zhì)量濃度為定量限。根據(jù)不同樣品的基質(zhì)效應(yīng)，加入1.0 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析測(cè)定，得S/N=2.9，同時(shí)將添加5.0 mg/kg的樣品進(jìn)行測(cè)定，得S/N=2.5。因此，該方法檢出限為5.0 mg/kg。

3　結(jié)論

通過(guò)大量試驗(yàn)，本方法采用高效液相色譜法測(cè)定糕點(diǎn)中的富馬酸二甲酯，對(duì)糕點(diǎn)進(jìn)行前處理方法的確認(rèn)、方法線性范圍、方法檢出限、精密度加標(biāo)回收及現(xiàn)有方法比較等一系列試驗(yàn)，結(jié)果表明，該方法線性范圍寬、準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好，快速、靈敏，適用于糕點(diǎn)中富馬酸二甲酯含量的測(cè)定。

［1］陳明，梁春穗，黃偉雄.廣式月餅中富馬酸二甲酯殘留量測(cè)定方法［J］.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜質(zhì)，2011，11（1）：45.

［2］劉萬(wàn)山，李青，楊大鵬，等.富馬酸二甲酯食品中殘留檢測(cè)方法的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)衛(wèi)生工程學(xué)，2007，6（4）：250-251.

［3］闞周密，王建陽(yáng)，王戲丹.氣相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定食品中富馬酸二甲酯的含量［J］.食品科學(xué)，2007，28（1）：247-249.

［4］鄭曉冰，趙質(zhì)創(chuàng)，肖曉檳.高效液相色譜法測(cè)定食品中的富馬酸二甲酯［J］.化學(xué)分析計(jì)量，2011，20（3）：23-25.

［5］農(nóng)業(yè)部食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心.NY/T 1723—2009食品中富馬酸二甲酯的測(cè)定高效液相色譜法［S］.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2009：1-4.

Study on the detection methods ofdimethyl fumarate in pastry

LIANGBaoai1*YANGKai2

1（National farm products and liquor quality supervision and inspection center，Shanxi Taiyuan 030012，China）
2（Shanxi province food quality satety supervision and inspection institute，Shanxi Taiyuan 030012，China）

采用高效液相色譜法測(cè)定糕點(diǎn)中的富馬酸二甲酯。試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法的檢出限為5.0 mg/kg，線性范圍為1.0 μg/mL～10.0 μg/mL（R2=0.999 97），加標(biāo)回收率為82.5%～106.8%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）＜3.0%。該方法能快速、準(zhǔn)確的測(cè)定糕點(diǎn)中富馬酸二甲酯的含量。

糕點(diǎn)；富馬酸二甲酯；檢測(cè)；高效液相色譜

A method for the determination ofdimethyl fumarate（DMF）in pastrywas studied.The results show that the detection limit of the method was 5.0 mg/kg，the linear was 1 μg/mL～10 μg/mL（R2=0.999 97），the recovery rate was 82.5%～106.8%and the relative standard deviation（RSD）is less than 3.0%.This method can determine the dimethyl fumarate in pastry rapidlyand accurately.

pastry；dimethyl fumarate；detection；HPLC

TS213.2+3

A

1673-6044（2016）03-0058-03

10.3969/j.issn.1673-6044.2016.03.016

*梁寶愛(ài)，女，1963年出生，1983年畢業(yè)于太原理工大學(xué)分析專(zhuān)業(yè)，正高級(jí)工程師。

2016-07-26