洛陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院（471300）王玉霞 王慧敏 申緋翡

中國人民解放軍96531部隊醫(yī)院（471300）崔華勝

1 資料和方法

糖尿病是一種“富貴病”，隨著飲食習(xí)慣的改變，具有較高的發(fā)病率，易對機體產(chǎn)生彌漫性的損傷，傷害全身多個系統(tǒng)，產(chǎn)生較多的并發(fā)癥[1]。由于長期注射胰島素及服用其他的降糖藥物，其中極易損傷人體腎臟，促使糖尿病患者并發(fā)腎病。糖尿病腎?。╠iabetic nephropathy，簡稱DN），又名為糖尿病腎小球硬化癥[2]?；颊叩脑缙诎Y狀并不是很明顯，易與其它病癥混淆，一旦發(fā)現(xiàn)臨床已難以控制，易進展為腎功能衰竭甚至死亡。目前針對DN患者的臨床治療以控制血糖和血壓為主要方式，但是其臨床療效欠佳，雖然可以延緩病情的進展，但不能終止病情的進展。因此，為了更好地明確糖尿病腎病的進展情況，本文旨在糖尿病腎病患者的臨床診斷過程中，評價應(yīng)用微小RNAs的臨床意義，為DN患者的臨床治療奠定基礎(chǔ)，詳細報道如下。

1.1 一般資料 選擇2013年6月～2014年12月期間收治的診斷為糖尿病腎病患者39例，作為本研究的試驗組。其中，男性和女性患者各23例和16例；患者年齡49～75歲，平均年齡（56.12±4.76）歲。同時抽取來我院體檢的健康人39例，以此作為本研究的對照組，患者年齡在48～73歲之間，平均年齡（55.8±9.2）歲。對比兩組患者的一般資料，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 采集標本 所有患者的采血于清晨空腹?fàn)顟B(tài)下進行，抽取2mL的外周靜脈血，1小時內(nèi)離心，取上層液離心5min，再吸取上層液置于-80℃，以備檢測。

1.2.2 miRNA芯片制備：采用 miRNA TaqMan Low Density Array芯片對所有患者的血清樣本進行分析。

1.2.3 實時熒光定量PCR(qRT-PCR)：①提取總RNA；②合成cDNA；③PCR。

1.3 統(tǒng)計學(xué)>方法 采用SPSS17.0軟件對所有研究數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)處理，各項測定指標結(jié)果的顯著性檢驗采用T檢驗，以P＜0.05差異顯著，具有可比性。

附表 兩組患者血清中miRNA的表達水平

2 結(jié)果

2.1 miRNA的篩選 通過檢測基因芯片發(fā)現(xiàn)，在試驗組患者中，表達升高的基因共有158個，表達降低的基因共有150個，根據(jù)基因的表達水平從中篩選出miR-150-5p、miR-155-5p、miR-30e-5p和miR-3196作為本研究的后續(xù)實驗。

2.2 兩組患者血清中miRNA的表達水平 通過qRT-PCR檢測兩組患者血清中miRNA的表達水平發(fā)現(xiàn)，四種miRNA在試驗組患者血清中的表達水平顯著高于正常健康人的對照組，差異顯著，有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，詳情見附表。

2.3 分析血清中miRNA的表達水平與患者臨床參數(shù)相關(guān)性 通過分析試驗組患者血清中miRNA的表達水平與患者臨床參數(shù)相關(guān)性發(fā)現(xiàn)，miR-155-5p和 miR-150-5p與患者的eGFR呈明顯的正相關(guān)，但是與患者的尿蛋白排泄率呈負相關(guān)（P＜0.05）。

3 討論

在糖尿病患者的并發(fā)癥中，約有20%～40%的DN患者。DN的病因較為復(fù)雜，其腎為DN的主要病位，病情的日益發(fā)展可逐漸累及心、脾、肝等其他臟器[3]。在DN的臨床治療中，現(xiàn)有的治療方案僅僅延緩了患者進展為腎衰竭，但是無法逆轉(zhuǎn)病情的進展。因此，完全闡明DN的發(fā)病機制，干預(yù)其發(fā)病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，提出治療的新靶點，防止病情的惡化，有利于患者良好的預(yù)后[4]。

微小RNAs是廣泛存在于動植物體內(nèi)的單鏈非編碼RNA，共包含21～24個核苷酸[5]。其通過結(jié)合互補的非編碼區(qū)的堿基，抑制或是降解mRNA，從而調(diào)控基因的表達水平。近些年，多項研究表明在DN的發(fā)生發(fā)展過程中，微小RNAs是治療的新靶點。

在本研究中，通過qRT-PCR檢測了兩組患者血清中miRNA的表達水平發(fā)現(xiàn)，四種miRNA在試驗組患者血清中的表達水平顯著高于正常健康人的對照組，差異顯著，有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。進一步分析其與試驗組患者臨床參數(shù)相關(guān)性發(fā)現(xiàn)，miR-155-5p和miR-150-5p與患者的eGFR呈明顯的正相關(guān)，但是與患者的尿蛋白排泄率呈負相關(guān)（P＜0.05）。這是因為miR-30e-5p和miR-3196在DN的早期病變中起重要的調(diào)控作用。此外，miR-150-5p和miR-155-5p在DN患者的血清中呈高表達，與患者的eGFR和尿蛋白排泄率密切相關(guān)，可作為DN進展的預(yù)測指標。

綜上所述，在糖尿病腎病患者的臨床診斷過程中，應(yīng)用微小RNAs準確診斷患者病情的輕重程度，早期診斷價值高，應(yīng)廣泛推廣。