黎　雄　盛國玉　岳曉荷　張子豪

海南省東方市東方醫(yī)院檢驗(yàn)科，海南　東方　572600

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血小板假性減少8例原因分析及其對(duì)策

黎雄盛國玉岳曉荷張子豪

海南省東方市東方醫(yī)院檢驗(yàn)科，海南東方572600

目的:探討血小板(PLT)計(jì)數(shù)假性減少原因及解決措施。方法:采用血細(xì)胞分析儀檢測(cè)血小板結(jié)果明顯減低(≤50×109/L)標(biāo)本458例，進(jìn)行血涂片觀察血小板分布情況，對(duì)其中涂片結(jié)果和分析儀計(jì)數(shù)結(jié)果明顯不符以及臨床無出血體征的8例患者再次采血進(jìn)行手工法計(jì)數(shù)、末梢血涂片，觀察血小板分布情況和枸櫞酸鈉抗凝血進(jìn)行分析儀血細(xì)胞計(jì)數(shù)等方法復(fù)檢。結(jié)果：8例患者在復(fù)檢時(shí)手工法和枸櫞酸鈉抗凝法血小板結(jié)果均在正常范圍，與EDTA-K2抗凝結(jié)果差異明顯，EDTA-K2抗凝法與枸櫞酸鈉抗凝法、手工計(jì)數(shù)法差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，手工法與枸櫞酸鈉抗凝法結(jié)果比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論：EDTA-K2抗凝劑可導(dǎo)致血小板發(fā)生聚集，引起血球分析儀計(jì)數(shù)血小板結(jié)果假性減少，在臨床工作中應(yīng)得到重視。

血液分析儀法；PLT假性減少；原因分析；措施

血細(xì)胞分析儀在各級(jí)醫(yī)療機(jī)構(gòu)已廣泛使用，無論是對(duì)檢驗(yàn)質(zhì)量還是檢驗(yàn)速度都有極大的提高，但由于技術(shù)的缺陷，血細(xì)胞分析儀檢測(cè)的結(jié)果仍會(huì)存在一定的誤差。筆者現(xiàn)就實(shí)際工作中遇到的8例EDTA-K2抗凝劑引起血小板假性減低病例分析如下。

1　資料與方法

1.1一般資料收集2014年1月至2015年9月我院住院患者進(jìn)行研究，采用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀進(jìn)行血細(xì)胞分析血小板值明顯減低(≤50×109/L) 標(biāo)本458例，取同份標(biāo)本做涂片鏡檢觀察血小板分布情況，對(duì)涂片血小板分布情況與計(jì)數(shù)結(jié)果明顯不符以及臨床癥狀不符的8例患者再次采血進(jìn)行手工法血小板計(jì)數(shù)、末梢血涂片，觀察血小板分布情況和抽取枸櫞酸鈉抗凝血進(jìn)行血細(xì)胞計(jì)數(shù)等方法復(fù)檢。該8例患者分別為腫瘤患者2例，肺心病3例，晚期孕婦2例，發(fā)燒不明原因1例，均無皮膚瘀點(diǎn)、瘀斑、鼻出血及胃腸道和泌尿系統(tǒng)出血等表現(xiàn)；既往均無血液病史。

1.2儀器與試劑采用希森美康SysmeXN-1000血細(xì)胞分析儀，原廠配套試劑，伯樂質(zhì)控品。手工法草酸銨血小板稀釋液、瑞-姬氏染色液，按《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》(第3版)配制[1]。

1.3方法1.3.1分析儀法用血細(xì)胞分析儀對(duì)本組8例EDTA-K2抗凝血和枸櫞酸鈉抗凝血進(jìn)行血小板檢測(cè),按操作規(guī)程進(jìn)行操作,當(dāng)天室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果在控。

1.3.2手工計(jì)數(shù)法嚴(yán)格按照《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》(第3版)[1]手工計(jì)數(shù)法進(jìn)行末梢血血小板計(jì)數(shù)。

1.3.3涂片染色鏡檢EDTA-K2抗凝血、枸櫞酸鈉抗凝血、末梢血均作涂片染色鏡檢觀察血小板分布情況。EDTA-K2抗凝血、枸櫞酸鈉抗凝血在不同時(shí)間段做涂片進(jìn)行PLT分布情況的比較。

1.3.4其它檢驗(yàn)本組8例患者檢測(cè)血常規(guī)同時(shí)也進(jìn)行其它項(xiàng)目如凝血功能、肝功能、腎功能、血脂、血糖、電解質(zhì)等檢查。

2　結(jié)果

2.1不同方法檢測(cè)PLT結(jié)果比較本組8例患者用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀分析，EDTA-K2抗凝血PLT結(jié)果明顯減少，僅為16×109/L～36×109/L；用枸椽酸鈉抗凝血PLT計(jì)數(shù)結(jié)果為147×109/L～202×109/L；經(jīng)顯微鏡手工法PLT計(jì)數(shù)結(jié)果為158×109/L～208×109/L。三種方法所測(cè)結(jié)果見表1。

表1　8例患者不同方法檢測(cè)PLT結(jié)果比較

注：與枸椽酸鈉抗凝劑(分析儀法)、手工計(jì)數(shù)法比較，*P<0.01。

表中結(jié)果顯示，EDTA-K2抗凝劑(分析儀法)結(jié)果明顯低于枸椽酸鈉抗凝劑(分析儀法)和手工計(jì)數(shù)法 ，EDTA-K2抗凝劑(分析儀法)與枸椽酸鈉抗凝劑(分析儀法)、手工計(jì)數(shù)法比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；枸椽酸鈉抗凝劑(分析儀法)和手工計(jì)數(shù)法比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.2涂片結(jié)果EDTA-K2抗凝血即刻涂片可見PLT出現(xiàn)小聚集，且隨時(shí)間延長聚集程度愈加增強(qiáng)。枸椽酸鈉抗凝血在各時(shí)間段均未出現(xiàn)聚集，手工法涂片PLT也呈散在分布，不同方法涂片血小板分布情況見表2。

表2　不同方法涂片血小板分布情況

2.3其它檢驗(yàn)8例患者其它化驗(yàn)檢查如凝血功能、肝功能、腎功能、血脂、血糖、電解質(zhì)等結(jié)果均未見明顯異常。

3　討論

目前血液分析儀測(cè)定血小板大多數(shù)采用電阻抗法進(jìn)行計(jì)數(shù)，也有光散射法,其原理都是根據(jù)細(xì)胞的大小區(qū)分進(jìn)行計(jì)數(shù)的。這種檢測(cè)原理決定了對(duì)于血小板數(shù)量和形態(tài)正常的標(biāo)本結(jié)果是可靠的，但是對(duì)于血小板明顯減少或形態(tài)異常者，結(jié)果誤差就比較大。正常人的血小板體積平均分布于2～30fl[2]，如果血小板聚集體積增大，儀器將無法正確識(shí)別而導(dǎo)致PLT分析結(jié)果偏低。

引起PLT假性減低的因素很多，比如有EDTA依賴型假性血小板減少[3]、冷凝集素致使血小板假性減少[4]，血液處于高凝狀態(tài)可以使血小板發(fā)生假性減少，此外高血鎂、高膽固醇、高甘油三酯血癥，都可以使血小板聚集性升高，易出現(xiàn)血小板假性減低[5]等情況。根據(jù)本組8例患者資料及與結(jié)果分析來看，患者均無出血體征，既往無血液病史，凝血、生化等項(xiàng)目結(jié)果均正常， EDTA-K2抗凝血結(jié)果均明顯低下，涂片鏡下可見PLT成堆聚集；而枸椽酸鈉抗凝血測(cè)得的結(jié)果和末梢血手工計(jì)數(shù)法測(cè)得的結(jié)果均正常，兩法涂片PLT均呈散在分布，無聚集現(xiàn)象，結(jié)合當(dāng)天室內(nèi)質(zhì)控均在控的結(jié)果，由此推斷本組8例患者屬于EDTA-K2依賴性假性PLT減少。本組患者EDTA-K2抗凝血涂片可見PLT聚集外，部分病例不同程度見到“血小板衛(wèi)星現(xiàn)象”(是指血小板黏附、圍繞于中性粒細(xì)胞或偶爾黏附于單核細(xì)胞的現(xiàn)象)， “血小板衛(wèi)星現(xiàn)象”偶見于EDTA抗凝血中[6]。“血小板衛(wèi)星現(xiàn)象”是血液分析儀PLT計(jì)數(shù)假性減少的原因之一[7]。

EDTA-K2可誘導(dǎo)血小板發(fā)生聚集，其作用機(jī)制與血小板表面存在隱匿性抗原相關(guān)，在EDTA誘導(dǎo)下，使血小板膜表面某種隱匿性抗原暴露，暴露的抗原與血漿中的自身抗體相結(jié)合，激活血小板胞膜中的磷脂酶，磷脂酶水解血小板膜磷脂并釋放5-羥色胺、內(nèi)源性鈣離子、膠原、花生四烯酸、凝血酶原等活性物質(zhì)，這些物質(zhì)活化血小板纖維蛋白原受體，使血小板與纖維蛋白原聚集成團(tuán)，出現(xiàn)血小板互相聚集現(xiàn)象[8]，成堆的血小板聚集在一起，超過了血小板計(jì)數(shù)閾值設(shè)定的范圍，使得其在血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定中被視為非血小板而不被計(jì)數(shù)，從而導(dǎo)致血小板假性減少[9]。EDTA依賴性假性血小板減少可能與血漿中存在的抗血小板抗體和/或抗心磷脂抗體等自身抗體有關(guān)，但無任何病理、生理意義，也與特殊藥物使用無關(guān)，常見于腫瘤、自身免疫病、肺心病、肝病、毒血癥、晚期孕婦及一些不明原因疾病[10]。

由于EDTA-K2抗凝劑對(duì)血液細(xì)胞的影響極小，被國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(ICSH)認(rèn)定和推薦使用，一般不會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成影響。但在實(shí)際工作中，偶爾也會(huì)出現(xiàn)EDTA依賴性假性PLT減少癥(PTCP)發(fā)生。據(jù)資料報(bào)道PTCP的臨床發(fā)生率約為0.09%～0.21%[11]，雖然PTCP的臨床發(fā)生率很低，但其結(jié)果的誤差很可能導(dǎo)致嚴(yán)重醫(yī)療差錯(cuò)而造成臨床誤診誤治的嚴(yán)重后果。因此檢驗(yàn)科工作人員必須加強(qiáng)血小板減少原因的綜合分析，遇到血小板檢測(cè)結(jié)果明顯減低者(≤50×109/L)，首先應(yīng)觀察標(biāo)本有無凝塊，然后制作血涂片染色鏡檢，觀察血小板呈單個(gè)散在還是成堆聚集分布，以及觀察PLT直方圖：如PLT曲線右移呈低而寬并有尾部上翹的現(xiàn)象和MPV值增高，提示有PLT聚集，及時(shí)與臨床溝通了解病情。對(duì)于血細(xì)胞分析儀檢測(cè)出現(xiàn)血小板顯著減少與臨床癥狀不符合者，考慮血小板假性減少，應(yīng)采用手工計(jì)數(shù)法、枸櫞酸鈉抗凝血加上涂片染色鏡檢進(jìn)行復(fù)查，從而避免臨床誤診。

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[3]王欣,張麗萍.抗凝劑EDTA及枸櫞酸鈉導(dǎo)致血小板假性減少現(xiàn)象分析[J]. 中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2008，18(12)：2651-2652.

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[10]劉雁,張繹.EDTA-K2抗凝劑引發(fā)血小板假性減少2例[J].中國現(xiàn)代內(nèi)科學(xué)雜志,2007,4(4):366.

[11]宓慶梅，施巍宇，郝婉瑩，等.EDTA依賴性假性血小板減少癥1例[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2004，27(10):719.

(編輯：劉斌)

2016-04-22

黎雄(1964-)，男，大專，臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)主管技師(中級(jí))，研究方向?yàn)檠簩W(xué)分析。E-mail：jy25537616@163.com

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1007-8517(2016)15-0082-03