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        白頭翁湯及拆方對模型小鼠抗炎作用的實驗研究

        2016-10-18 06:29:02楊昌文
        中國中醫(yī)急癥 2016年9期
        關(guān)鍵詞:秦皮白頭翁二甲苯

        楊昌文

        (三峽大學(xué)第一臨床附屬醫(yī)院,湖北省宜昌市中心人民醫(yī)院,湖北 宜昌443000)

        白頭翁湯及拆方對模型小鼠抗炎作用的實驗研究

        楊昌文

        (三峽大學(xué)第一臨床附屬醫(yī)院,湖北省宜昌市中心人民醫(yī)院,湖北宜昌443000)

        目的研究白頭翁湯及組方藥物對小鼠二甲苯耳廊腫脹的抗炎作用,比較幾種抗炎效果的差異,為臨床提供試驗依據(jù)。方法采用常規(guī)的炎癥模型,主要為二甲苯造模進行藥效學(xué)觀察。取昆明種小鼠70只,隨機分成7組,分別灌胃白頭翁湯、黃連、黃柏、秦皮、白頭翁水提物,以阿司匹林為陽性對照,以生理鹽水為空白對照。各組于末次給藥前測量小鼠右耳厚度,給藥后0.5 h在小鼠右耳涂20μL致炎,分別在涂后0.5、1、2、3、4 h測量小鼠右耳厚度,計算腫脹值差異進行組間比較。取小鼠60只,分為白頭翁湯組、黃連組、黃柏組、秦皮組、白頭翁組、模型對照組,腹腔注射大腸桿菌復(fù)制腹瀉模型。觀察6 h內(nèi)小鼠的腹瀉情況。結(jié)果白頭翁湯、黃連、黃柏、秦皮、白頭翁分別具有一定的抗炎作用。在對抗二甲苯所致的小鼠炎性反應(yīng)中,其抗炎時間從長到短分布順序為白頭翁湯、黃連>黃柏>秦皮、白頭翁。白頭翁湯組稀便率及平均腹瀉次數(shù)均低于各拆方組。結(jié)論白頭翁湯在抗炎方面作用佳,且以黃連、黃柏為主要抗炎物質(zhì)發(fā)揮較好抗炎效果。白頭翁湯抗腹瀉能力優(yōu)于各拆方組。

        白頭翁湯大黃拆方抗炎腹瀉小鼠二甲苯

        《傷寒論》中白頭翁湯主要組成為白頭翁、黃連、黃柏、秦皮。全方清熱解毒,涼血止痢,為熱毒血痢之首選。方中白頭翁為君藥,性苦寒,歸大腸經(jīng),效在清熱解毒、涼血止痢,其清腸胃之濕熱與血分之熱毒效甚佳,為治療熱毒血痢之要藥[1]。黃連瀉火解毒,燥濕厚腸,配合黃柏清熱燥濕,兩藥為臣藥,助白頭翁以發(fā)揮清熱解毒治痢之效[2]。秦皮性苦澀而寒,入大腸經(jīng),為佐藥,既助上述3藥清熱燥濕,又起收澀止痢之功。另外,白頭翁湯中包含的小檗堿、藥根堿、巴馬汀、白頭翁素、秦皮甲素乙素等物質(zhì)有明確的殺菌、抗炎、解熱鎮(zhèn)痛及抗癌效果[3]。近來年,隨著全方及拆方對治療尚未潰破的淋巴結(jié)核、神經(jīng)性皮炎、壞死性腸炎、降血糖、抗腫瘤等方法的不斷深入研究,本試驗對白頭翁湯及拆方的抗炎作用進行了初步探討,為白頭翁湯的臨床應(yīng)用提供試驗依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1實驗動物昆明種小鼠,普通級,共130只,雌雄各半,體質(zhì)量18~22 g,來源于三峽職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)學(xué)院實驗動物中心。

        1.2實驗藥物白頭翁湯中白頭翁15 g,黃連6 g,黃柏12 g,秦皮12 g。其余各單藥組為白頭翁50 g,黃連30 g,黃柏50 g,秦皮50 g?;亓魉岱ㄟM行兩次提取:第1次,30min,紗布過濾;第2次,20min,紗布過濾。濾液合并靜置,取上清液加熱濃縮并水浴蒸干。再80℃真空干燥,獲得干浸膏備用。最終各組的得膏率為:白頭翁湯15.0%,白頭翁14.6%,黃連17.7%,黃柏9.8%,秦皮18.0%。最終配制為每種藥物1mL溶液中含有1 g生藥。所有藥材均源于安徽亳州滬譙中藥飲片廠,批號:20050922。

        1.3試劑與儀器二甲苯(蚌埠化學(xué)試劑廠,分析純,批號030519);復(fù)方阿司匹林腸溶片(南京白敬宇制藥有限責(zé)任公司,國藥準字H32026500)。HH.S-D電熱恒溫水浴鍋,上海躍進醫(yī)療器械廠;FA-1004N電子天平,上海天平儀器廠;2K-82B型真空干燥器,上海試驗儀器總廠;千分卡尺等。

        1.4白頭翁湯及拆方對小鼠二甲苯性耳廓腫脹的作用

        1.4.1分組與給藥小鼠稱體質(zhì)量后隨機編號,分成7組,每組各10只。分別是白頭翁湯組、黃連組、黃柏組、秦皮組、白頭翁組、模型對照組以及阿司匹林組。前5組中藥組分別按10g生藥/kg灌胃。模型對照組小鼠則予等容積生理鹽水灌胃,陽性對照組予以阿司匹林(0.3 g/kg)灌胃。每日1次,共3 d。

        1.4.2觀察指標小鼠右耳厚度應(yīng)用千分卡尺測3次取平均值作為正常值。末次給藥后30 min,每只小鼠右耳背均勻涂抹二甲苯20μL,再計時,于涂二甲苯后0.5、1、2、3、4 h準時測量每只小鼠右耳厚度3次,取平均值記錄。以腫脹度表示炎癥程度:腫脹值=腫脹后右耳厚度-腫脹前右耳厚度。腫脹值為致炎前后厚度差。1.5白頭翁湯及拆方對小鼠大腸桿菌致腹瀉的作用

        1.5.1分組與給藥60只小鼠稱體質(zhì)量后隨機編號,每組各10只,分別為白頭翁湯組、黃連組、黃柏組、秦皮組、白頭翁組、模型對照組。各組按10 g生藥/kg灌胃藥物,白頭翁湯組灌胃全方藥液,黃連組灌胃單方黃連藥液、黃柏組灌胃單方黃柏藥液、秦皮組灌胃單方秦皮藥液、白頭翁組灌胃單方白頭翁藥液、模型對照組灌胃生理鹽水。每日1次,共3 d。

        1.5.2大腸桿菌致腹瀉模型參照趙榮山等的方法,末次給藥后禁食水12 h后,每只小鼠按0.2 mL/10 g體質(zhì)量腹腔注射108個/mL的大腸桿菌菌液,以建立大腸桿菌致腹瀉模型。造模4h后開始動物開始出現(xiàn)腹瀉癥狀,致瀉率100%。

        1.5.3觀察指標造模后將小鼠入鋪有濾墊紙的單獨動物籠內(nèi),觀察6 h內(nèi)小鼠的腹瀉情況,每30分鐘更換一次濾墊紙,計數(shù)濾墊紙上糞便次數(shù)。小鼠糞便分為5種:(1)正常糞便;(2)糞便基本成形,含水多;(3)不成形糞便;(4)水樣便;(5)血液便。(1)(2)判定為正常,(3)(4)(5)判定為腹瀉。計算各組小鼠腹瀉數(shù)及稀便率。稀便率(%)=每只小鼠稀便數(shù)/每只小鼠總便數(shù)×100%。

        1.6統(tǒng)計學(xué)處理應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件分析。計量資料以(表示,組間采用t檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

        2 結(jié) 果

        2.1白頭翁湯、黃連、黃柏、秦皮、白頭翁提取物對小鼠二甲苯性耳廓腫脹的作用比較見表1。據(jù)表中數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析可見,白頭翁湯組、黃連組在4 h的實驗中與對照組相比較,均差異顯著(P<0.01)。阿司匹林組和黃柏組持續(xù)在2 h內(nèi)與對照組相比較,差異極顯著。在第3小時差異顯著(P<0.05或P<0.01),到第4小時差異不顯著(P>0.05)。秦皮組和白頭翁組在1 h內(nèi)與對照組相比較,差異極顯著。第2小時時差異顯著(P<0.01),之后差異不顯著(P>0.05)。結(jié)果表明,白頭翁湯組、黃連組、黃柏組、秦皮組、白頭翁組,均有抗炎作用。白頭翁湯組、黃連組抗炎作用持續(xù)較長,黃柏組與陽性對照組抗炎作用相似,持續(xù)時間較短。秦皮組、白頭翁組抗炎持續(xù)時間低于陽性對照組。

        表1 白頭翁湯、黃連、黃柏、秦皮、白頭翁提取物對小鼠二甲苯性耳廓腫脹的作用(μm,

        表1 白頭翁湯、黃連、黃柏、秦皮、白頭翁提取物對小鼠二甲苯性耳廓腫脹的作用(μm,

        與模型對照組比較,*P<0.05,**P<0.01。

        組別n劑量(g/kg) 正常耳厚度 二甲苯致小鼠耳廓腫脹值0.5 h 1 h 2 h 3 h 4 h模型對照組10-238.82±22.81 106.52±19.87 114.87±29.96 80.87±21.17 66.63±19.54 42.57±22.43阿司匹林組10 0.3 240.45±23.73 56.75±24.62**50.28±30.54**40.18±13.32**34.86±32.74*32.97±29.87*白頭翁湯組10 10 238.75±22.73 60.05±18.90**44.54±18.42**30.54±19.47**30.23±17.87**24.43±15.86**黃連組10 10 234.08±21.73 58.27±33.54**40.19±16.37**32.93±14.76**28.37±27.86**24.32±18.35**黃柏組10 10 236.78±18.45 54.91±25.57**42.75±17.54**38.39±17.50**32.34±28.68*28.27±17.5秦皮組10 10 238.44±22.45 58.67±40.45**54.67±13.59**42.85±28.61**3.66±32.06 32.34±14.86白頭翁組10 10 232.81±21.54 66.78±19.41**54.37±19.94**42.87±37.45**38.07±22.46 30.23±17.53

        2.2白頭翁湯、黃連、黃柏、秦皮、白頭翁提取物對小鼠大腸桿菌致腹瀉的作用比較見表2。白頭翁湯組稀便率及平均腹瀉次數(shù)均低于各拆方組(P<0.05)。

        表2 白頭翁湯、黃連、黃柏、秦皮、白頭翁提取物對小鼠大腸桿菌致腹瀉的作用比較(

        表2 白頭翁湯、黃連、黃柏、秦皮、白頭翁提取物對小鼠大腸桿菌致腹瀉的作用比較(

        與模型對照組比較,*P<0.05;與白頭翁湯比較,△P<0.05。

        組別 稀便率(%)平均腹瀉次數(shù)2 h 4 h 6 h模型對照組78.20 6.51±2.01 8.23±3.10 12.19±3.99白頭翁湯組10 50.78*3.53±0.2*4.88±1.08*6.26±2.17*黃連組10 59.91*△5.88±1.18 6.51±2.34*△7.29±2.97*△n 10黃柏組10 62.13*△5.56±1.07 6.37±2.78*△8.90±3.23*△秦皮組10 67.85*△6.01±1.25 7.55±2.34△10.21±3.17*△白頭翁組10 58.23*△4.59±0.98*6.02±2.01*△8.74±3.00*△

        3 討 論

        白頭翁湯由白頭翁、黃連、黃柏以及秦皮組成。方藥簡潔,但各藥配伍嚴謹,臨床療效經(jīng)歷年來驗證,屢試不爽[4]。白頭翁湯現(xiàn)代多項研究表明其具有較好的抗炎止痢作用。部分研究者將其進行體外抑菌研究,結(jié)果證實白頭翁湯在治療痢疾中的作用佳,主要抑制痢疾桿菌,包括志賀氏、施氏、福氏以及宋內(nèi)氏菌[5]。而也有研究證實,其在抑制金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌的作用方面效果也極佳[6]。其抗炎作用即表現(xiàn)在對大鼠多種實驗性浮腫及肉芽消炎效果顯著。炎癥是機體應(yīng)對創(chuàng)傷進行的防御反應(yīng),主要由血管與細胞的應(yīng)答組成。旨在消滅與清除損傷出現(xiàn)的各種致炎因子,幫助損傷修復(fù)[7]。

        炎癥是機體應(yīng)對創(chuàng)傷進行的防御反應(yīng),主要由血管與細胞的應(yīng)答組成。旨在消滅與清除損傷出現(xiàn)的各種致炎因子,幫助損傷修復(fù)。二甲苯炎性造模的機制為:二甲苯可促進組織中肥大細胞等釋放組胺、5-羥色胺等血管活性胺類,局部組織出現(xiàn)中微血管擴張,通透性增加。同時,機體其他來源的細胞和血漿中炎癥介質(zhì),可進一步增加血管活性,造成組織液外滲,出現(xiàn)水腫。此外,炎癥發(fā)生過程中血管內(nèi)皮細胞自身損傷,可造成部分血液外滲,進一步加重腫脹程度。炎癥、感染以及敗血癥的發(fā)生均與NO合酶相關(guān),損傷的血管表達NO合酶,可引發(fā)NO的大量產(chǎn)生,致使血管擴張通透性增加而水腫。白頭翁湯中主要提取成分有白頭翁素、小檗堿和秦皮乙素。研究顯示白頭翁素和小檗堿在抑制NO水平方面效果最佳。而黃連、黃柏中提取物以小檗堿、藥根堿為主,在抑制NO的同時,也可抑制對組胺引起的小鼠皮膚毛細血管通透性增加,是有效的抗炎成分。秦皮中含有的七葉苷、秦皮苷類以也具有抗炎作用,其中秦皮乙素可在調(diào)控微血管功能方面發(fā)揮作用,可有效降低NO生成以及阻礙細胞間黏附分子,從而在抗炎方面作用較佳[8-10]。

        本試驗中采用的白頭翁湯中白頭翁清熱解毒,黃柏瀉火除蒸、黃連泄火解毒、秦皮可收澀止痢。復(fù)方中的白頭翁、黃柏對腹瀉均有一定的抑制效果。但白頭翁清熱解毒,涼血治痢,對腹瀉的抑制效果相比黃柏更為顯著,在復(fù)方中起到了君藥的作用,而黃柏清熱燥濕、瀉火解毒,在復(fù)方中作為白頭翁的臣藥起到輔助白頭翁抗腹瀉的作用,因此復(fù)方中的各味中藥通過配伍加強了白頭翁原有的抗腹瀉作用,能夠有效抑制大腸桿菌引起的腹瀉。

        本試驗綜合比較可以得出,對抗二甲苯所致的小鼠炎性反應(yīng)中,各藥物組的抗炎時間由長至短順序為:白頭翁湯、黃連>黃柏>秦皮、白頭翁。因此,可初步得出本實驗研究中白頭翁湯抗炎作用的發(fā)揮主要依賴于黃連、黃柏的作用。

        本項試驗中為公正評定各種藥物的的抗炎作用,單用時采用同等劑量。試驗過程中發(fā)現(xiàn)黃連在此劑量時可導(dǎo)致實驗后多數(shù)小鼠死亡,其機理有待進一步研究,也說明黃連在白頭翁湯中劑量最小是有一定道理的。

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        R285.5

        A

        1004-745X(2016)09-1737-03

        10.3969/j.issn.1004-745X.2016.09.029

        2015-05-14)

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