代容春，林榮華

（福建師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，福建 福州 350108）

茉莉花窨制前后總黃酮含量的測定*

代容春，林榮華

（福建師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，福建 福州 350108）

以正交試驗(yàn)法優(yōu)化后的超聲波提取工藝提取總黃酮，聚酰胺吸附提純，蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，用分光光度法于510nm處測定了茉莉花窨制前后的總黃酮含量。結(jié)果表明：蘆丁濃度在10.0～50.0mg .L-1內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為y=0.0101x+0.0047，相關(guān)系數(shù)R2=0.9991，平均回收率為100.43%（RSD=4.397%）。窨制前的茉莉花總黃酮含量為2.806%，窨制后的茉莉花總黃酮含量為2.656%；差異顯著性分析可知，2個樣品總黃酮含量差異不顯著。研究結(jié)果可為利用茉莉花渣生產(chǎn)黃酮類藥用成分提供科學(xué)根據(jù)。

茉莉花；窨制；總黃酮；含量測定；正交試驗(yàn)

茉莉(Jasminum sambac(L.)Ait)為木犀科多年生常綠灌木，多分布于熱帶、亞熱帶和溫帶地區(qū)，我國以江蘇、浙江、福建、臺灣、廣東、四川、云南等地分布最為廣泛[1]。茉莉的根、葉、花均有藥用價值。根有麻醉、止痛之功效，可以用于治療失眠、頭痛、齲齒、跌打損傷；葉用于治療外感發(fā)熱、腹脹腹瀉；花可用于治療腹脹腹瀉、結(jié)膜炎、皮炎、瘡毒等[2-4]。關(guān)于茉莉的藥用成分多數(shù)研究者認(rèn)為主要為黃酮類與多糖類化合物，韋英亮等的初步研究也表明，從茉莉花渣中所提取的黃酮化合物對某些人類腫瘤細(xì)胞在體外試驗(yàn)時表現(xiàn)出一定的細(xì)胞毒性 [5-6]。

茉莉花是我國具有相當(dāng)經(jīng)濟(jì)價值的重要花卉，大量栽培主要用于采摘茉莉花以窨制茉莉花茶或加工成價值昂貴的天然香精。目前，我國茉莉花茶年產(chǎn)量穩(wěn)定在11～12萬t之間，由此產(chǎn)生了大量的茉莉花渣[7]。茉莉花渣是茉莉花苞經(jīng)過花茶窨制后的廢棄物，是茉莉花茶加工過程中主要的下腳料，在此過程中有20%～25%的芳香油物質(zhì)被茶葉吸收，其它化學(xué)成分的變化尚未見詳細(xì)報道。本研究采用超聲波提取法提取總黃酮，比色法測定茉莉花窨制前后總黃酮含量的變化，為合理利用茉莉花渣，實(shí)現(xiàn)廢物循環(huán)利用和農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展打下基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

蘆?。篊27H30O16·3H2O，相對分子質(zhì)量為664.57，上海試劑二廠生產(chǎn)。聚酰胺粉：80～100目，以70%乙醇預(yù)處理。

窨制前的茉莉花（樣品I）和窨制后的茉莉花（樣品II），由福州春倫茶業(yè)有限公司提供。樣品處理方法為自然晾干，80℃恒溫干燥2 h后粉碎過篩。

1.2 儀器

UV-1100型紫外可見分光光度計（上海美譜達(dá)儀器有限公司）、RE-52CS型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）、數(shù)控超聲波清洗器KQ3200-DV（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 超聲波提取工藝的優(yōu)化

以窨制前的茉莉花為材料，在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選用正交表L9（34）對超聲波提取工藝的4個主要因素（溫度、時間、乙醇濃度、料液比）進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)，各因素的水平表見表1。

表1 正交試驗(yàn)因素水平表

1.3.2 總黃酮的提取及純化

稱取過60目篩的樣品干燥粉末10 g，按表1正交試驗(yàn)結(jié)果獲得的最佳超聲波提取工藝提取總黃酮，過濾后濾渣重復(fù)提取1次。合并濾液，減壓濃縮至適量，以石油醚反復(fù)萃取脫脂，棄去醚層。濾液進(jìn)一步濃縮至浸膏狀，用70%乙醇溶解并定容至100ml。

準(zhǔn)確吸取提取液5ml，加200mg聚酰胺粉攪勻，轉(zhuǎn)移到裝有400mg聚酰胺粉的砂芯層析柱中，用乙醇梯度洗脫，洗脫順序?yàn)?5%乙醇（20ml）→55%乙醇（20ml）→75%乙醇（20ml）→95%乙醇（20ml）→無水乙醇（20ml）。收集各級洗脫液，合并濃縮，用70%乙醇定容至100ml，備測。

1.3.3 最大吸收波長的選擇

以NaNO2、Al(NO3)3、NaOH為顯色劑，分別作樣品I、樣品II提取液以及蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品的吸收曲線，三者均在510nm處有一強(qiáng)吸收，因此選擇510nm為測定波長。

1.3.4 蘆丁濃度與吸光度的關(guān)系確定

精密稱取蘆丁標(biāo)樣10mg（80℃干燥至恒重），用70%乙醇溶解，然后轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中，70%乙醇定容，搖勻，即得0.1mg .mL-1的蘆丁標(biāo)液。分別取0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml蘆丁標(biāo)液于6個10ml容量瓶中，各加70%乙醇使成5ml，加入5%NaNO2溶液0.3ml搖勻，放置6min后，加10%Al(NO3)3溶液0.3ml，搖勻放置6min后加入1 mol .L-1NaOH溶液4ml，再加蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，放置15min后于510nm波長處測定OD值，以蘆丁空白為參比，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.5 總黃酮含量的測定

分別吸取樣品I和樣品II提取液1.0ml于10ml容量瓶中，按標(biāo)準(zhǔn)蘆丁—吸光度測定法，以樣液空白參比，于510nm波長下測定OD值，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各樣液總黃酮含量，最后換算成各樣品的總黃酮含量百分率，即得率（以蘆丁計）。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

以O(shè)D值為縱坐標(biāo)，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品含量（mg.L-1）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為y=0.0101x+0.0047,相關(guān)系數(shù)R2=0.9991，表明蘆丁濃度在10.0～50.0mg.L-1具有良好的線性關(guān)系，見表2。

表2 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

表3 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果表

表4 茉莉花窨制前后總黃酮含量測定結(jié)果（按蘆丁計算）

表5 加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果

2.2 超聲波提取工藝的優(yōu)化

以總黃酮得率為指標(biāo)，L9（34）正交試驗(yàn)結(jié)果見表3。由正交試驗(yàn)結(jié)果可以看出，6號樣品總黃酮的得率最高，為2.850%。極差分析可知，各因素對總黃酮提取得率影響的大小順序?yàn)椋篈>B>D>C。試驗(yàn)較優(yōu)條件為A2B3C1D2，即茉莉花總黃酮超聲波提取的最佳工藝為溫度55℃、時間90min、乙醇濃度70%、料液比1:15。

2.3 總黃酮含量的測定

2個樣品總黃酮含量測定結(jié)果見表4。窨制前的茉莉花總黃酮含量為2.806%；窨制后的茉莉花總黃酮含量為2.656%。經(jīng)LSD檢驗(yàn)進(jìn)行差異顯著性分析可知，2個樣品總黃酮含量差異不顯著（P=0.05）。

2.4 顯色穩(wěn)定性試驗(yàn)

各樣品提取液及蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品顯色反應(yīng)較穩(wěn)定。在45min內(nèi)每隔15min測定其吸光度，吸光度值均未發(fā)生改變。

2.5 加標(biāo)回收試驗(yàn)

稱取以上樣品6份，分別添加質(zhì)量濃度為0.1mg.mL-1的蘆丁標(biāo)樣3.9ml，按前述操作進(jìn)行提取、層析、測定。以加標(biāo)測得量減去原樣含量，除以加標(biāo)量，計算回收率，其結(jié)果見表5。平均回收率為100.43%，標(biāo)準(zhǔn)差為4.416%，相對標(biāo)準(zhǔn)差為4.397%。

3 討論

早期茉莉花渣無有效的利用途徑，除了少量用做豬飼料外，有的被排放江河，有的長期堆放后腐敗，造成資源的極大浪費(fèi)和環(huán)境的污染[8]。研究以正交試驗(yàn)法優(yōu)化后的超聲波提取工藝提取總黃酮，利用聚酰胺吸附提純與常用的硝酸鋁顯色法相結(jié)合，測定茉莉花窨制前后的總黃酮含量。結(jié)果表明，窨制前的茉莉花總黃酮含量為2.806%，窨制后的茉莉花總黃酮含量為2.656%，二者差異不顯著。黃酮類化合物具有抗癌、抗腫瘤、抗心腦血管疾病、抗炎鎮(zhèn)痛、免疫調(diào)節(jié)、降血糖、治療骨質(zhì)疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗輻射等作用[9-14]。鑒于窨制后的茉莉花渣資源豐富，黃酮含量較高，藥用價值大，作者認(rèn)為可以大力開發(fā)利用其黃酮類藥用成分，為利用茉莉花渣生產(chǎn)黃酮類藥用成分提供科學(xué)依據(jù)。

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10.3969/j.issn.1007-550X.2016.08.001

Q946

A

1007-550X（2016）08-0038-04

福建省教育廳資助項(xiàng)目(編號：JA13072)。

2016-06-19

代容春(1973-)，女，福建仙游人，副教授，碩士，主要從事植物生理學(xué)和植物細(xì)胞工程研究。