席 強(qiáng)， 宋麗杰， 劉仲明， 王 捷*

(1.廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院，廣東廣州 510010；2.華南理工大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院，廣東廣州 510006)

萊克多巴胺是繼克倫特羅之后的一類新型瘦肉精，屬于苯乙醇胺類衍生物，其結(jié)構(gòu)類似于腎上腺素，具有營(yíng)養(yǎng)再分配作用，可提高畜禽瘦肉率[1]。由于其價(jià)格遠(yuǎn)低于克倫特羅，因而近年來(lái)在畜禽養(yǎng)殖中違法添加萊克多巴胺的現(xiàn)象屢禁不止。萊克多巴胺容易殘留在動(dòng)物體內(nèi)，并通過食物鏈在人體中累積，繼而引起肌肉震顫、心律失常、惡心及眩暈等[2]。但萊克多巴胺的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)和方法均比克倫特羅滯后，較難對(duì)其進(jìn)行快速、有效地監(jiān)控。目前，用于萊克多巴胺檢測(cè)的方法主要有高效液相色譜法(HPLC)[3]、氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)[4]、液相色譜-質(zhì)譜法(HPLC-MS)[5]、電化學(xué)法[6]、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)[7,8]等。然而，這些方法大多需要昂貴的設(shè)備，并且檢測(cè)過程繁瑣費(fèi)時(shí)，不適于大規(guī)模的快速篩選。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

ECL檢測(cè)在改進(jìn)的噴射式電化學(xué)發(fā)光分析儀上進(jìn)行，該檢測(cè)系統(tǒng)及其檢測(cè)池示意圖如圖1所示。樣品溶液通過進(jìn)樣端口中的鋼針噴射到與其正對(duì)的鉑金圓盤工作電極表面，檢測(cè)池中多余的液體則從廢液端口流出，其中檢測(cè)池內(nèi)體積約為150 μL(圖1(B))。三電級(jí)系統(tǒng)包括：鉑金圓盤工作電極(Φ=2 mm)、鉑絲輔助電極(Pt)、Ag/AgCl參比電極均由西安瑞邁分析儀器有限責(zé)任公司提供。MSP1-C2工業(yè)注射泵(保定蘭格恒流泵有限公司)；KQ-100DE型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；VOTEX 漩渦振蕩器(海門市其林貝爾儀器制造有限公司)；OAKTON PH 510 臺(tái)式套裝酸度計(jì)(美國(guó)，奧克公司)；艾科浦超純水機(jī)(美國(guó)，艾科浦國(guó)際有限公司)。

六水合三(2，2′-聯(lián)呲啶)氯化釕、N-丁基二乙醇胺、萊克多巴胺鹽酸鹽，均購(gòu)于Sigma-Aldrich公司； Na2HPO4·12H2O、NaH2PO4·2H2O、尿酸，均購(gòu)于上海阿拉丁試劑有限公司；其它試劑均為分析純。所有試劑用純化水配制并稀釋到所需濃度后于4 ℃冰箱中保存。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

實(shí)驗(yàn)前，將工作電極依次在含1.0、0.3、0.05 μm Al2O3的麂皮上進(jìn)行打磨直至呈鏡面，用純化水超聲清洗5 min。然后將清洗后的工作電極置于1 mol/L H2SO4中進(jìn)行循環(huán)伏安(CV)掃描(-0.2～1.5 V)直至獲得穩(wěn)定的CV曲線。最后用純化水清洗，自然晾干后，按圖1(B)所示進(jìn)行組裝。

由于進(jìn)樣端口與樣品閥之間有約100 μL的體積，故舍棄首次檢測(cè)數(shù)據(jù)。ECL初始檢測(cè)參數(shù)設(shè)置：工作電極電位為1.35 V；PMT高壓為900 V，放大級(jí)數(shù)為3級(jí)。每次檢測(cè)前或更換樣品時(shí)，均需用0.1 mol/L相應(yīng)pH的磷酸鹽緩沖溶液(PBS)作為清洗液清洗檢測(cè)池，直至無(wú)發(fā)光信號(hào)。實(shí)驗(yàn)中注射泵設(shè)置的參數(shù)見表1。

表1 注射泵參數(shù)設(shè)置

2 結(jié)果與討論

2.1 萊克多巴胺對(duì)丁基二乙醇胺體系發(fā)光的猝滅效應(yīng)

2.2 檢測(cè)條件的優(yōu)化

工作電極電位和緩沖溶液pH對(duì)萊克多巴胺的猝滅效率(△I/I0×100%，式中△I=I0-It,I0與It分別為加入萊克多巴胺前后的發(fā)光強(qiáng)度)有一定的影響。當(dāng)電極電位和緩沖液pH分別為1.35 V和8.5時(shí)，萊克多巴胺的猝滅效率達(dá)到最大值(圖3(A)、3(B))。當(dāng)N-丁基二乙醇胺濃度較高時(shí)，萊克多巴胺的猝滅效率較低；隨著N-丁基二乙醇胺濃度的降低，萊克多巴胺對(duì)發(fā)光強(qiáng)度的湮滅能力就越強(qiáng)(圖3(C))。然而，過低濃度的N-丁基二乙醇胺也會(huì)造成體系ECL強(qiáng)度變?nèi)酢＞C合考慮，選取1.0×10-8mol/L的N-丁基二乙醇胺進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。此外，噴射速率對(duì)萊克多巴胺的猝滅效率的影響也非常明顯。樣品溶液噴射到工作電極表面的速率決定著電化學(xué)產(chǎn)物在工作電極表面更新速率的快慢，也在一定程度上影響著萊克多巴胺的猝滅效率。當(dāng)樣品噴射速率為4 mL/min時(shí)，萊克多巴胺的猝滅效率達(dá)到最大(圖3(D))。

2.3 萊克多巴胺的檢測(cè)

2.4 萊克多巴胺檢測(cè)體系選擇性評(píng)估

2.5 實(shí)際樣品分析

分別用兩份經(jīng)高效液相色譜法確認(rèn)不含有萊克多巴胺的豬尿樣品，將1 μg/mL的萊克多巴胺標(biāo)準(zhǔn)品溶液分別稀釋至5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL，由該方法測(cè)得萊克多巴胺的含量如表2所示，結(jié)果與實(shí)際添加的萊克多巴胺的量較為吻合，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)在0.84%～1.46%之間；所測(cè)得的回收率為93.60%～107.40%，表明該分析方法具有較好的準(zhǔn)確度和精密度。

表2 加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)(n=3)

3 結(jié)論