揚子江藥業(yè)集團北京海燕藥業(yè)有限公司（102206）薛麗芳

消旋卡多曲片由消旋卡多曲、乳糖、羧甲淀粉鈉、硬脂酸鎂、羥丙甲纖維素、阿司帕坦、70%乙醇組成。其中消旋卡多曲為主要成分，具有治療急性腹瀉的功效。

鑒于藥典中并無消旋卡多曲片的檢驗方法，本文建立了一種高效液相色譜法測定片劑中消旋卡多曲的含量，保證該片劑的臨床療效。此方法操作簡單，定量準(zhǔn)確，線性范圍寬，溶液穩(wěn)定性良好，片劑中的輔料不干擾測定。

1 儀器與試劑、試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀（美國安捷倫公司，Agilent1260），電子分析天平[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司，XS205型]，pH計[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司，SevenEasy型]。

1.2 試劑、試藥 醋酸、醋酸銨（分析純，國藥集團化學(xué)試劑有限公司），甲醇、乙腈[色譜純，賽默飛世爾科技（中國）有限公司]，水為超純水。

消旋卡多曲對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號100682-201502，含量99.9%），消旋卡多曲片（揚子江藥業(yè)集團北京海燕藥業(yè)有限公司，規(guī)格30mg，批號15010601、15010602、15010701）。

2 方法與結(jié)果[1][2]

2.1 色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱（150mm×4.6mm，5μm）；乙腈-0.02mol/L醋酸銨溶液（用醋酸調(diào)節(jié)pH值至5.0）（65∶35）為流動相；檢測波長210nm；柱溫30℃；流速1.0mL/min；進樣體積20μL。

附圖 專屬性圖譜。A：陰性空白溶液 B：空白溶液 C：供試品溶液 D：對照品溶液

2.2 對照品溶液的配制 精密稱取消旋卡多曲對照品約10mg，置100ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液的配制 取莫尼卡（消旋卡多曲片）20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量，加流動相溶解并稀釋制成每1ml中約含消旋卡多曲0.1mg的溶液，作為供試品溶液。

2.4 陰性模擬制劑的制備 按照消旋卡多曲片的處方工藝組成，制備不含消旋卡多曲的陰性模擬制劑。

2.5 系統(tǒng)適用性試驗 在高效液相色譜法中理論塔板數(shù)是衡量色譜柱效能的參數(shù)之一，用于定量表示色譜柱的分離效率，其數(shù)值越大色譜柱的柱效越高。本次實驗以消旋卡多曲的理論塔板數(shù)為指標(biāo)，考察了色譜柱的效能。具體方法為精密量取對照品溶液20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測得消旋卡多曲的理論塔板數(shù)為8656。

2.6 方法學(xué)考察

2.6.1 專屬性試驗 取陰性模擬制劑按照供試品溶液配制方法配制陰性空白溶液，取陰性空白溶液、空白溶液（流動相）、對照品溶液、供試品溶液各20μL，在2.1色譜條件下分別進樣，記錄色譜圖，對比陰性空白試驗圖譜、空白試驗圖譜、對照品圖譜、供試品圖譜，確定流動相與輔料是否影響消旋卡多曲的出峰。

對照品溶液和供試品溶液均在保留時間3.4min處出峰，而陰性空白溶液和空白溶液在相近的保留時間處均未出現(xiàn)干擾峰。由配制過程可知對照品溶液和供試品溶液中均含有消旋卡多曲，陰性空白溶液和空白溶液中均不含消旋卡多曲，因此可判定3.4min處的峰為消旋卡多曲峰。詳見附圖。

2.6.2 檢測限、定量限[3][4]取對照品溶液在2.1色譜條件下進樣20μL，記錄色譜圖，對照品溶液中消旋卡多曲峰的信噪比為15000，遠(yuǎn)大于10。

取消旋卡多曲對照品溶液稀釋至消旋卡多曲峰高與基線噪音高度比約為10∶1確定定量限，之后再連續(xù)測定5針，記錄該色譜圖，計算其濃度。結(jié)果為10.97ng/ml，主峰保留時間的RSD=0.1%，峰面積的RSD=4.3%。

取消旋卡多曲對照品溶液稀釋至消旋卡多曲峰高與基線噪音高度比約為3∶1確定檢測限，之后再連續(xù)測定2針，記錄該色譜圖，計算其濃度。結(jié)果為4.316ng/ml，主峰保留時間的RSD=0.1%，峰面積的RSD=9.6%。

2.6.3 儀器精密度試驗 取對照品溶液連續(xù)進樣6次，記錄色譜圖，峰面積分別為5244.28027、5250.30664、5252.06592、5250.54102、5250.51221、5257.78760，峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.1%。

2.6.4 重復(fù)性試驗 取莫尼卡（消旋卡多曲片）樣品，制備6份供試品溶液，按2.1中色譜條件進樣，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計算含量。結(jié)果為95.3%、96.8%、96.3%、95.4%、96.6%、96.7%，RSD=0.7%，重復(fù)性良好。

2.6.5 中間精密度試驗[5][6]取三批莫尼卡（消旋卡多曲片）樣品，在相近的時間由不同的實驗員采用不同的儀器進行含量測定，對比測定的數(shù)據(jù)。實驗員A的含量測定結(jié)果分別為96.0%、96.5%、95.2%，實驗員B的含量測定結(jié)果分別為96.8%、95.8%、95.7%，兩者的結(jié)果相差不大表明此方法的中間精密度良好。

2.6.6 加標(biāo)回收試驗[7][8]稱取陰性模擬制劑[9]約25mg共9份，分別置100ml量瓶中，于1～3號中分別加入消旋卡多曲對照品8mg，4～6號中分別加入消旋卡多曲對照品10mg，7～9號中分別加入消旋卡多曲對照品12mg，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為80%、100%、120%的回收率溶液。取空白溶液、對照品溶液、回收率溶液按2.1中色譜條件測定，計算回收率，結(jié)果如附表所示。

附表 回收率結(jié)果

2.6.7 線性關(guān)系考察 精密稱取消旋卡多曲對照品約20mg置100mL容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取1.0mL、2.5mL、5.0mL、7.5mL、10.0mL于10mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，得線性系列溶液。按2.1色譜條件分別進樣，測定峰面積，以對照品溶液濃度X（mg/mL）為橫坐標(biāo)，峰面積Y為縱坐標(biāo)進行線性回歸，得出回歸方程Y=49820X+150.62，相關(guān)系數(shù)r=0.99937，線性范圍為0.02158mg/mL～0.2003mg/mL。

2.6.8 溶液穩(wěn)定性考察 取對照品溶液和供試品溶液，在室溫條件下放置0h、3h、6h、12h、18h、24h、36h后分別進樣20μL，記錄色譜圖，考察兩份溶液在36小時之內(nèi)的峰面積變化。計算得對照品溶液各時間點峰面積的RSD為0.5%，供試品溶液各時間點峰面積的RSD為0.4%。表明溶液在36小時內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 樣品含量測定 按2.2項下的方法制備對照品溶液，按2.3項下的方法制備3批供試品溶液，照2.1的色譜條件進行測定，按外標(biāo)法以峰面積計算樣品的含量。測得結(jié)果為3批樣品中消旋卡多曲含量分別為標(biāo)示量的96.0%、96.5%、95.2%，平均含量為95.9%。

3 結(jié)論與討論

綜上所述，本方法的系統(tǒng)適用性符合要求，專屬性高，定量準(zhǔn)確，精密度良好，線性范圍寬，溶液在36小時內(nèi)穩(wěn)定，適合于消旋卡多曲的含量測定[12-15]。本文中系統(tǒng)適用性試驗僅考察了色譜柱的柱效，在后續(xù)試驗中有已知雜質(zhì)后可以考察消旋卡多曲與已知雜質(zhì)的分離度是否符合要求，以增強系統(tǒng)的適用性。

在檢測限與定量限的考察中，定量限濃度確定后連續(xù)進樣六次，而檢測限只進樣了三次，后續(xù)亦可以進樣六次或以上考察檢測限的準(zhǔn)確性與精密度[16][17]。

在專屬性考察中，后續(xù)可以考慮用破壞的方法進行專屬性試驗，即用酸、堿、高溫等條件破壞消旋卡多曲后再進樣[10][11]。

本次試驗中未考察該方法的耐用性，后續(xù)可以增加方法的耐用性試驗?？赏ㄟ^改變流速、改變柱溫等改變色譜條件的一些參數(shù)以及在不同實驗室間進行試驗來考察方法是否耐用[18][19]。